全 文 ：中草喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月·57·
2．8回收率试验：取含莪术醇0．752mg／g的莪术
油微纳囊样品(批号20041021)0．1g，平行6份，分
别加入莪术醇对照品贮备液0．8、1．0、1．2mL，依
法制备供试品溶液，分别测定莪术醇的质量分数，计
算回收率，结果平均回收率为99．52oA，RSD为
1．51％(，z一6)。
2．9样品的测定：取莪术油微纳囊样品5批，分别
制备供试品溶液，注入气相色谱仪，测定各样品中莪
术醇和内标物的色谱峰峰面积，内标法计算样品中
莪术醇的质量分数，结果见表1。
表1莪术油微纳囊中莪术醇的测定结果(打一4)
Table1 DeterminationofcureumolinO eumCurcumae
Micro／nanoC psules(稃一4)
3讨论
莪术油微纳囊是通过选用可生物降解的聚乳酸
包覆莪术油而制得的粒径分布在100～200nm的
纳米微胶囊，微纳囊化改变莪术油的水溶性，提高了
其稳定性与溶解速率。因此，其测定与单纯莪术油不
同，需要经过二氯甲烷溶解聚乳酸，除去二氯甲烷，
再用无水乙醇萃取莪术油，醋酸乙酯定容。如果微纳
囊直接用醋酸乙酯萃取定容，则由于聚乳酸微溶于
醋酸乙酯，造成微纳囊破壁不彻底，莪术油萃取不完
全，引起损失，造成误差。另外，由于聚乳酸是高分子
物质，在用气相色谱分析时，被滞留在柱内堵塞毛细
管柱，降低柱效。
文献报道[1]以氧杂蒽为内标测定莪术醇，但是
在本实验中以氧杂蒽为内标未达到基线分离。以联
苯为内标，通过对样品的适当处理，在程序升温条件
下，莪术油微纳囊溶液中莪术醇的出峰时间为
10．45min，内标物联苯出峰时间为7．8min，二者都
达到基线分离，对称性也很好。
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HPLC法测定灌胃虎杖提取物大鼠粪便及尿液中大黄素和大黄素甲醚
蒋 晔，郝晓花，刘红菊
(河北医科大学药学院，河北石家庄050017)
蒽醌类化合物具有消炎、抗菌、致泻、利尿以及
抗肿瘤、抗病毒等作用，是大黄、虎杖、何首乌、决明
子等中药的主要活性成分。蒽醌类化合物有游离型
和结合型两种存在形式。结合型蒽醌不吸收，在肠道
内被细菌代谢后产生泻下作用[1]，因此结合型蒽醌
在肠道内的吸收、代谢与其药动学有关。已有的药动
学研究均为测定血清或血浆中的蒽醌类成分[2’3]，由
于代谢物中成分复杂，干扰较多，因此本实验建立了
测定大鼠灌胃虎杖提取物后的粪便和尿液中的游离
型和结合型大黄素总量的非水反相液相色谱法。
1仪器与试药
高效液相色谱仪：SP一8810高压泵、SP一8450
紫外检测器(美国光谱物理公司)，千谱色谱工作站
(南京千谱软件有限公司)。
甲醇为色谱纯，冰醋酸、氯仿、盐酸、硫酸等均为
分析纯；大黄素(批号0756—200110)、大黄素甲醚对
照品(批号758—200006)均由中国药品生物制品检
定所提供；虎杖提取物为自制，HPLC测得大黄素的
质量分数为51．25mg／g、大黄素甲醚的质量分数为
40．57mg／g，其中结合大黄素与游离大黄素的比例
基本一致(1：1．08)；SD大鼠由河北医科大学实验
动物中心提供。
收稿日期：2006—04—18
作者筒介：蒋哗(1961一)，上海人，教授，博士生导师，主要从事药物的质量研究与质量控制。
Tel：(0311)86266069E—mail；jiangye@hebmu。edu．cn
万方数据
·58· 中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1,El
2方法与结果
2．1色谱条件：色谱柱：KromasilC18柱(250mmx
4．6mm，5．0弘m)；柱温：室温；流动相：甲醇一冰醋酸
(99．9：0．1)；检测波长：254nm；体积流量：1．0
mL／min；进样量：20弘L。
2．2对照品溶液的配制：精密称定大黄素、大黄素
甲醚对照品适量，分别置50mL量瓶中，用少量氯
仿溶解后用甲醇稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为
0．140mg／mL的大黄素储备液和质量浓度为0．210
mg／mL的大黄素甲醚储备液。临用时，分别吸取大
黄素和大黄素甲醚的储备液各10mL置于同一25
mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得大黄素、大黄
素甲醚的混合对照品溶液。取混合对照品溶液按倍
比稀释法配制不同质量浓度的系列对照品溶液，与
混合对照品溶液共同作为系列对照品溶液。
2．3大鼠粪便的预处理方法：取大鼠粪便样品，混
匀，精密称取约0．5g，置锥形瓶中，精密加乙醇25
mL，置水浴上加热回流1h，放冷，滤过，取全部滤
液，置烧瓶中，水浴蒸于，加30％乙醇一盐酸(10：1)
溶液15mL，置水浴中加热水解1h，立即冷却，用氯
仿强力振摇提取3次，每次15mL，合并氯仿液，置
水浴上蒸干，残渣用甲醇2．5mL溶解，摇匀，用
0．45肛m微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2．4大鼠尿样的预处理方法：取大鼠尿样3mL，加
入30％盐酸3mL，旋涡混匀，(70±2)。C水浴水解
30rain。冷却，用氯仿强力振摇提取3次，每次5
mL，合并氯仿液，挥干氯仿，残渣用甲醇2．5mL溶
解，摇匀，用0．45pm微孑L滤膜滤过，取续滤液，即
得。
2．5干扰试验：在选定的色谱条件下以空白大鼠粪
便、尿液，空白大鼠粪便、尿液中加人大黄素、大黄素
甲醚对照品，灌胃虎杖提取物后的大鼠粪便、尿液样
品经处理后进样，色谱图见图1。结果表明粪便和尿
液中的其他组分不干扰大黄素和大黄素甲醚的测
定，其分离度均大于2．0，理论塔板数以大黄素计不
低于13200，以大黄素甲醚计不低于18600。
2．6线性关系的考察：精密量取系列混合对照品溶
液各0．5mL，分别加至空白大鼠粪便(o．5g)和尿
液(3mL)样品中，使粪便样品中的大黄素质量分数
分另Ij相当于0．420、0．840、1．68、3．36、6．72、13．44、
33．6／zg／g；大黄素甲醚的质量分数分别为0．525、
1．05、2．10、4．20、8．40、16．8、42．0肛g／g。尿液样品
中大黄素质量浓度分别相当予0．084、0．168、
0．336、0．672、1．344、2．69、6．72弘g／mL；大黄素甲
2 4 6 8 2 4 6 8 2 4 6 8
timin
1一大黄素2一大黄素甲醚
1-emodin2一physcion
图1 空白大鼠粪便(A)、空白大鼠尿液(B)、空白大鼠粪便
样品加入大黄素、大黄素甲醚对照品(c)、空白大鼠
尿液样品加入大黄素、大黄素甲醚对照品(D)，
灌胃虎杖提取物后的大鼠粪便样品(E)和灌胃
虎杖提取物后的大鼠尿样(F)的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsofbl nkratfeces(A)，
blankraturine(B)，blankratfeceswithemodin
andphyscionreferencessub tance(C)，blank
raturinewithemodinandphyscionreferences
substance(D)，ratfecessampleafterig
administeredwithRhizomaPolygontumCuspi—
datumextract(E)，andraturi esample
afterigadministeredwithRhizomaeoly—
gontumCuspidatumextract(F)
醚的质量浓度分别为0．0875、0．175、0．350、0．700、
1．40、2．80、7．00pg／mL。按大鼠粪便和尿液样品的
处理方法进行处理，测定大黄素、大黄素甲醚。以峰
面积为纵坐标，对照品质量浓度或者质量分数为横
坐标，绘制标准曲线，拟合线性方程，结果见表1。
表1线性范围和回归方程 ．
Table1 Linearrangesandregressionequations
2．7精密度试验：分别精密吸取含大黄素和大黄素
甲醚的大鼠粪便和尿液样品，进样20肛L，连续进样
5次，测定峰面积。结果大黄素在粪便样品和尿样中
峰面积的RSD分别为0．6％、0．9A；大黄素甲醚在
粪便样品和尿样中峰面积的RSD分别为0．9％、
1．1％。
2．8回收率试验：于空白大鼠粪便样品中分别加入
低 中、高3种质量浓度的大黄素、大黄素甲醚混合
对照品溶液(使之质量分数分别相当于含大黄素
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月·59·
0．840、3．36、13．44}_tg／g；大、黄素甲醚1．05、4．20、
16．8／-g／g)，空白尿液样品中分别加入低、中、高3
种质量浓度的大黄素、大黄素甲醚混合对照品溶液
(使之质量浓度分别相当于含大黄素0．168、
0．672，、2．69pg／mL；大黄素甲醚0．175、0．700、
2．80／tg／mI。)，每个质量浓度平行5份，按大鼠粪便
样品和尿液样品的处理方法进行处理，记录峰面积。
以测得量与加入量之比计算回收率，结果粪便样品
中大黄素、大黄素甲醚的平均回收率分别为
98．2％、97．6％，RSD分别为1．2％、1．4％。尿液样
品中大黄素、大黄素甲醚的平均回收率分别为
98．4％、97．1％，RSD分别为1．1％、1．5％。
2．9药动学测定结果：实验SD大鼠12只，体重
180～200g，雌雄各半。给药前禁食12h，自由饮水，
以1．0mL／100g-剂量ig给予虎杖提取物的10％阿
拉伯胶混悬液，相当于大黄素8．0mg／kg，收集给药
后o～36h粪便和尿液，按大鼠粪便样品和尿液样
品的处理方法进行处理，以外标法测定大黄素和大
黄素甲醚的量，结果见表2。大鼠粪便中大黄素的量
16．4～28．5弘g，大鼠尿样中大黄素的量5．60～
11．5弘g。虽然大黄素甲醚在大鼠粪便及尿样中都有
检出，但其量较低，无实际意义，故未在结果中列出。
表2大鼠灌胃虎杖提取物后粪便和尿液中大黄素的量
Table2 Contentofemodininfecesandurineofrats
afterigadministeredwithRhizoma
PolygontumCuspidatumextract
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
粪便中大黄素／ug 尿液中大黄素／肛g
：±s 22·84-3·8 8·48±2·10
3讨论
本实验采用非水反相液相色谱法测定大鼠排泄
物中大黄素，结果表明粪便样品中游离和结合大黄
素的总量(16．4～28．5pg)远低于ig给予大鼠的虎
杖提取物中结合大黄素的量(约每只1mg)，与文献
报道的结合蒽醌在肠道被代谢后具泻下作用u]相一
致，同时可看到蒽醌类化合物以原形形式排泄较少。
测定总蒽醌时，样品通常经提取、水解、萃取后
进行测定n]。水解时一般采用稀盐酸或稀硫酸，萃取
一般采用氯仿、乙醚等有机溶剂。考虑到氯仿对大黄
素和大黄素甲醚的溶解度大，且氯仿比水密度大，操
作易进行，本实验的样品经水解后均采用氯仿进行
萃取，同时氯仿萃取使极性大的内源性成分对测定
的干扰减小。
测定蒽醌类成分的方法有薄层色谱法[3]、反相
高效液相色谱法[53等。最常用的是含水的反相高效
液相色谱法，其流动相中均含极性大的水分子，故大
黄素、大黄素甲醚的保留时间长且柱效低，而采用非
水反相液相色谱法时，分离时间短、峰对称性好且柱
效高口]。在生物样品的测定中干扰成分较多，由于非
水反相液相色谱法的柱效高，故样品峰能和杂质峰
得到较好的分离。
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5
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万方数据
HPLC法测定灌胃虎杖提取物大鼠粪便及尿液中大黄素和大黄
素甲醚
作者： 蒋晔， 郝晓花， 刘红菊
作者单位： 河北医科大学药学院,河北,石家庄,050017
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(1)
被引用次数： 1次

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引证文献(1条)
1.汪秀月 HPLC法测定炎可宁片中大黄素、大黄酚的含量[期刊论文]-海峡药学 2010(7)


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