全 文 ：·210· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
表3方差分析
Table3 Analysisofvariance
方差来源 SS
浸膏收率
总黄酮
肿胀度
A
B(误差)
C
D
总和+
A
B(误差)
C
D
总和
A
B(误差)
C
D
总和
11．7475
2．1043
44．8299
3．9384
62．6201
3．091
1．6156
24．0188
1．8535
30．5790
0．1667
0．0467
1．040
0．0867
1．3401
1．5456
0．8079
12．0094
0．9268
5．58
1．00
21．301．87
3．56
1．00
22．221．86
，’o 05(2，2)一19．00
2．6 验证试验：按A。B。C。D：的条件进行提取3次，
结果浸膏得率平均为17．98％，总黄酮的质量分数
平均值为11．14％，肿胀度为(1．9±1．1)mg。由实
验结果看出，利用正交试验方法确定的A，B。C。D：为
最佳的工艺条件。
3讨论
了哥王用乙醇为提取剂，有利于黄酮类化合物
的溶出且可提出水溶和脂溶的成分，乙醇毒性小，来
源方便。乙醇体积分数对总黄酮影响最大，75％乙醇
提取黄酮类化合物较多，体积分数增加，提取量下
降，可能由于以下两种原因。一方面醇体积分数增
加，植物细胞皱缩，不利于黄酮类成分溶出；另一方
面提取液颜色加深，说明一些醇溶性的杂质、色素等
成分溶出量增加，可能这些成分与黄酮类化合物竞
争乙醇～水分子结合，导致提取率下降。
通过正交试验已考察到醇体积分数对浸膏收
率、抗炎效果有显著影响，75％乙醇提取量较多，抗
炎效果好，提取黄酮类化合物较多，所以确定乙醇体
积分数为75％。由于加醇量对结果影响最小，虽然
乙醇6倍量节约能源，但10倍量更有利于有效物质
的浸出。所以正交试验优选出最佳提取条件为
A，B。C。D：，即用75％乙醇，加10倍量，提取2次，每
次4h。由实验结果看出，不同工艺条件所获得乙醇
浸膏收率可相差7．34％，总黄酮的质量分数可相差
5．81％，肿胀度可相差1．2mg。
有研究表明了哥王中黄酮类成分有抗炎作用，
所以本实验以总黄酮质量分数为指标，结果看出肿
胀度与浸膏得率无关，而与总黄酮质量分数有关，再
次证明了黄酮类化合物有抗炎作用。
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何首乌清蒸工艺研究
赵荣华，赵声兰，解奉江，饶高雄，毛晓健
(云南中医学院中药炮制研究中心，云南昆明 650200)
何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum
multiforumThunb．的干燥块根。何首乌的炮制对其
化学成分和药理作用均有一定的影响。何首乌常用
的方法为清蒸法。何首乌中结合蒽醌随着蒸制时间
的延长而减少，结合蒽醌水解反应属于一级反应，反
应物为游离蒽醌‘引。常用的清蒸炮制方法费时费
力Ⅲ，而高温炮制则时间短。因此本实验以结合蒽醌
的量和淀粉糊化程度为指标，研究了120℃下长、
收稿日期：200604—06
基金项目：国家中药现代化科技产业(云南)基地建设专项基金资助项目
作者简介：赵荣华(1958～)，男，昆明人，中药炮制研究中心主任，主要从事中药炮制方面的研究。
Tel：(0871)6212611E～mail：zharh@tom．net
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月·211·
宽、高在0．8～1cm粒状何首乌和切片厚度在2～4
mm厚片何首乌常用两种规格饮片的清蒸工艺，希
望为何首乌工业化生产提供依据和参考。
1仪器、药品与动物
7520型可见一紫外分光光度计(上海分析仪器
厂)；Waters液相色谱仪，600泵，2487双波长紫外
检测器；xPT一7型偏光显微镜(江南光学仪器厂)。
大黄素(批号0756—200110)、二苯乙烯苷(批号
0844—200003)对照品由中国药品生物制品检定所提
供。试剂均为分析纯试剂，水为纯净水。
何首乌药材样品均来自云南绿劝县，经云南中
医学院中药鉴定教研室廖心荣教授鉴定为蓼科植物
何首乌P．multiforumThunb．的块茎，人工切成
0．8～1cm粒状(平均0．5g／粒)和2～4mm厚片
两种不同规格饮片。
昆明种小鼠，18～22g，购自云南省药物研究
所，雄雌各半。
2方法与结果
2．1清蒸品的制备：取0．8～1cm粒状何首乌10
份，每份200g，每份用200mL水浸润，润透后，放
入高压锅中的竹皿中，120℃蒸制，蒸制时间分别为
0．5、1、2、3、4、5、6、8、10、12h。取 ～4mm厚片何
首乌5份，每份200g，每份用200mL水浸润，润透
后，放人高压锅中的竹皿中，120℃蒸制，蒸制时间
分别为2、3、4、5、6h。蒸好后置电热鼓风干燥箱中
80℃干燥至含水量为10％，备用。
2．2结合蒽醌的测定
2．2．1对照品溶液的制备：准确称取大黄素对照品
10．40mg，用甲醇溶解并定容于10mL量瓶中，即
得质量浓度为1．04mg／mL的储备液。取3．00mL
储备液，以甲醇定容于100mI。量瓶中，即为31．2
／-g／mL大黄素对照品溶液。
2．2．2标准曲线的制备[3]：分别准确吸取大黄素对
照品溶液0．5、1．0、3．0、5．0、6．0mL置于10mL
量瓶中，各加2．5mL乙酸镁显色剂，用甲醇定容并
混匀显色。显色15min后，以显色液为空白，于512
am测定其吸光度，数据回归处理，得回归方程为
A一41．1C+0．009052，r一0．9992。结果表明大黄
素在15．6～187．2tlg与吸光度呈现良好的线性
关系。
2．2．3供试品溶液的制备：精确称取样品约1g(过
60目筛)，置索氏提取器中，加入100mL氯仿，在沸
水浴上回流2h，经检查游离蒽醌提尽后，氯仿液回
收溶剂。药渣以100mL甲醇继续于沸水浴上回流
提取结合型蒽醌，约2h经检查结合蒽醌提尽后，甲
醇液回收溶剂，然后加入15％硫酸溶液40mL、氯
仿30mL，于沸水浴上回流水解约4h，经检查水解
完毕后，水解液置分液漏斗分取氯仿层，上层水相用
45mL氯仿分3次萃取。合并氯仿液，适量纯净水返
洗至pH值为6左右，回收氯仿，残留物用甲醇溶
解，转移至10mL量瓶中，并用甲醇定容至10mL，
作为结合蒽醌的供试品溶液。
2．2．4测定：制备供试品溶液，测定其吸光度，依回
归方程计算结合蒽醌的质量分数，结果见表1。
2．3二苯乙烯苷的测定
2．3．1色谱条件：ExsilODSC，8色谱柱(250mm×
4．6mm，5肛m)，以乙腈一水(25：75)为流动相，体
积流量1mL／min，检测波长320am，柱温30℃，进
样量10肛L。
2．3．2对照品溶液的制备：准确称取二苯乙烯苷对
照品10．80mg，以50％乙醇配成1．08mg／mL储备
液。取2．00mL储备液以50％乙醇定容至10mL，
即为0．216mg／mL二苯乙烯苷对照品溶液。
2．3．3供试品溶液的制备[3]：取样品约0．20g，精
确称定，精确加入50％乙醇25mL，称定质量，浸泡
1h，回流30min，放冷，用50％乙醇补足减失的质
量，摇匀，上清液用0．45弘m微孔滤膜滤过，即为供
试品溶液。
2．3．4系统适用性试验：分别取对照品溶液、供试
品溶液注人色谱仪。结果二苯乙烯苷对照品tn为
4．647min，理论塔板数100 0以上。供试品溶液中
二苯乙烯苷的tR为4．690min，理论塔板数8000以
上，且无相邻吸收峰。
2．3．5线性关系考察：分别吸取二苯乙烯苷对照品
溶液2、4、6、8、12、20肛L进样，记录色谱图。以峰面
积对进样量回归处理，结果回归方程为y一326．117
x+23．492，r一0．99923，表明二苯乙烯苷在
0．432～4．32弘g与峰面积呈现良好的线性关系。
2．3．6样品测定：按上述方法制备各种供试品溶
液，分别进样测定，结果见表1。
2．4样品淀粉粒糊化情况的观察：使用偏光显微镜
观察各个样品内的淀粉粒数量，结果见表1。
2．5 泻下实验
2．5．1受试药物的提取：分别取生首乌、粒状何首
乌和厚片何首乌清蒸品粉末(过60目筛)各10g，加
入索氏提取器中用甲醇提取12h，回收甲醇后加纯
净水溶解至8mL，备用。
2．5．2方法与结果：将禁食24h的小鼠160只，随
万方数据
·212· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第2期2007年2月
机分为16组(每组雌雄各半)，苦味酸标记。各组分别 纸、反罩的烧杯内进行观察，记录小鼠排稀便时间和
ig何首乌提取物0．2mL／lOg体重(25g／kg体重)， 数目，连续观察6h，6h内未泻者，排稀便时间按360
对照组ig同体积的生理盐水。各鼠分别置于铺有滤 min记，排稀便次数按0次记，实验结果见表2。
表1何首乌清蒸品中各指标的bE较
Table1 ComparisononvariousindexesofP．multiflorumsamplessteamedathightemperature
．．．．，⋯ 结合蒽醌／(mg·g。)处理时间／h——
粒状何首乌 厚片何首乌
二苯乙烯苷／％
粒状何首乌 厚片何首乌
淀粉粒观测
粒状何首乌 厚片何首乌
表2何首乌清蒸品对小鼠排便时间和次数的影响
(i士s，厅一10)
Table2 EffectofP．multiflorumsteamedathigh
temperatureontimeandfrequency
ofmicedefecation(i±s，n=10)
与生首乌比较：+尸。P<0．05‘。P数据呈偏态分布，排稀便时间和排稀便次数用
参比差值法统计比较，致泻率用简化直接概率法统
计比较。与生首乌比较，粒状何首乌须蒸制6h无致
泻作用。蒸制5h对排稀便次数有明显抑制(P<
0．01)，但对排稀便时间、致泻率则影响不明显(P>
0．05)；厚片何首乌须蒸制4h无致泻作用。蒸制3h
对排稀便次数、致泻率有明显的抑制作用(P<
0．01)，但对排稀便时间则影响不明显(P>o．05)。
3讨论
0．8～1CITI粒状何首乌120℃清蒸6h或 h
以上(即使结合蒽醌的量低于2．1rag／g)无致泻作
用，此时淀粉粒完全糊化，为了最大保护有效成分二
苯乙烯苷，蒸制6h最佳；2～4rnlTl厚片何首乌120
℃清蒸4h或4h以上无致泻作用，此时淀粉粒完全
糊化，为了最大保护有效成分二苯乙烯苷，蒸制4h
最佳。
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万方数据
何首乌清蒸工艺研究
作者： 赵荣华， 赵声兰， 解奉江， 饶高雄， 毛晓健
作者单位： 云南中医学院,中药炮制研究中心,云南,昆明,650200
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(2)
被引用次数： 2次

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