全 文 ：·92· 中草鸣ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月
川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖抑制作用的探讨
冯津萍1，卢 奕2，陈 星1，陈敏荔1，郭玉军1，梁爽霖1
(1．天津市胸科医院，天津300051；2．天津医科大学，天津300203)
摘 要：目的 观察川芎嗪(TMP)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的抑制作用，并探讨其作用机制。方法利用
大鼠颈动脉血管内膜损伤可引起VSMC增殖、血管增厚为实验模型。行增殖细胞核抗原(PCNA)、I型胶原、Ⅳ型
胶原组织化学检测，纤维母细胞生长因子(FGF)、血小板源生长因子(PDGF)、Bel一2、Bax、C—myc原位杂交检测及
TUNEL染色。结果内皮损伤后VSMC增殖，血管管腔面积减少；低剂量TMP治疗组有轻度抑制VSMC增殖
的作用，使管腔面积有所增加；TMP高剂量抑制作用明显增强。高剂量TMP组和假手术组PCNA、Ⅳ胶原、PDGF
的表达低于模型组；TMP低剂量组与模型组相比无显著差异。高、低剂量TMP组和假手术组的I型胶原、FGF、
Bcl一2、c—myc和TUNEL的表达低于模型组。高、低剂量TMP组和假手术组的Bax表达高于模型组。结论TMP
能抑制平滑肌细胞I型胶原、Ⅳ型胶原、FGF、PDGF表达；影响Bct～2、c—myc、Bax基因表达，促进血管平滑肌细胞
凋亡；达到抑制平滑肌细胞增殖的作用。
关键词：血管平滑肌细胞(VSMC)；增殖；川芎嗪
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)01—0092一04
Explorationfornhibitorymechanismoftetramethylpyrazine
onvascularsmoothmusclecellproliferation
FENGJin—pin91，LUYi2，CHENXin91，CHENMin—lil，GUOYu—junl，LIANGShuang—linl
Keywords：vascularmoothmusclecell(VSMC)；proliferation；tetramethylpyrazine(TMP)
冠状动脉介入治疗存在的主要问题仍是再狭
窄，近年来研究认为，再狭窄是血管损伤的一种修复
反应，是平滑肌细胞增殖的结果。与血管平滑肌细胞
(VSMC)有关的生长因子主要为血小板源生长因
子(PDGF)、纤维母细胞生长因子(FGF)等。增殖
细胞核抗原(PCNA)是反映细胞增殖程度的指标。
I型和Ⅳ型胶原在再狭窄中作用机制报道甚少。川
芎嗪(tetramethylpyrazine，TMP)是一种新型钙
离子拮抗剂，有研究[13发现川芎嗪对原代培养的
VSMC具有明显的抑制作用，其机制尚不清楚。本
研究通过建立大鼠颈动脉内皮损伤模型，观察了血
管内皮损伤后平滑肌细胞增殖及相关因子的调节情
况、细胞凋亡及相关基因(Bcl一2、Bax、c—myc)的调
节情况，应用TMP进行干预，探讨TMP抑制血管
成形术后再狭窄的可能机制。
1材料与方法
1．1 主要试剂：PCNA、I型胶原和rq型胶原免疫
组化试剂盒和Bax、c～myc、FGF和PDGF原位杂交
试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。bcl一2
原位杂交试剂盒购自天津津脉生物有限公司。
TUNEL试剂盒购自美国罗氏诊断公司。
1．2动物模型的建立及实验分组：6～8周龄
Wistar大鼠，体重250350g，购自军事医学科学
院实验动物中心。大鼠麻醉后，钝性分离出大鼠颈外
动脉，将Fogarty导管(2F)沿颈外动脉到颈总动
脉伸至主动脉弓，稍回撤，充盈气囊回拉Fogarty导
管剥脱颈总动脉血管内膜，撤出导管，结扎该侧颈外
动脉口]。受试药物：盐酸川芎嗪注射液(北京第四制
药厂生产，批号021027)。随机分组：假手术组，9
只，仅暴露左侧颈总动脉后缝合局部伤口；模型组，
10只，行左侧颈总动脉内膜剥脱术；TMP低剂量药
物组，10只，术前3dip给予盐酸川芎嗪50mg／
(kg·d)，行左侧颈总动脉内膜剥脱术，术后继续给
药2周；TMP高剂量药物组，11只，术前3dip给
予盐酸川芎嗪120mg／(kg·d)，行左侧颈总动脉内
膜剥脱术，术后继续给药2周。标本制备：术后2周
处死大鼠，以5％多聚甲醛和3％戊二醛配制的灌
注液进行血管的固定。取材左侧颈总动脉，送电镜，
并进行蜡块包埋，制备石蜡切片。
1．3方法：HE染色光镜观察血管管腔面积。电镜
’观察。免疫组织化学检测：包括胶原I、胶原Ⅳ、
PCNA等。原位杂交检测，包括：FGF、PDGF、Bcl一2、
收稿日期：2006—05—09
基金项目：天津市科技发展计划项目(973113310)
作者简介：冯津萍(1967一)，女，副主任医师，硕士学位，天津医科大学和南开大学硕士生导师，从事心血管内科临床和科研工作，发表论
文10余篇，曾主持多项课题研究，曾获天津市科技进步三等奖。
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月·93·
Bax、c—myc等。TUNEL检测。各项检测结果应用
MIAS2000图像分析系统进行分析。每张切片随机
选取5个不同视野进行扫描分析，测定平均吸光度。
显色越深平均吸光度值越低，显色越浅平均吸光度
值越高，故平均吸光度值与表达量成反比。本实验各
项指标的染色结果用平均吸光度值表示。
1．4统计学分析：实验结果以z±S表示，显著性检
测采用单因素方差分析和Dunnet—t检验。
2结果
2．1 HE染色结果：见图1。在内皮损伤后，血管内
膜增厚，平滑肌细胞增殖、排列紊乱，内弹力层迂曲
明显，细胞外基质增加。TMP低剂量对上述改变有
抑制作用，使内皮损伤后血管管径增加，TMP高剂
量的该抑制作用更加明显。
2．2各组血管截面积和TUNEL染色结果：见表1。
锻手术基i 模型组TMP巅剂餐缀
图1光镜结果
Fig．1Resultsoflight—microscope
表l各组血管管腔面积和TUNEL染色的比较
Table1 Comparisonbetweenvascularcapacityarea
andTUNELamonggroups
’P<0．05’’P<0．01USmodelgroup
2．3电镜结果：见图2。假手术组平滑肌细胞超微
结构形态特点：核不规则，异染色质沿核膜下分布，
核两极端可见线粒体和聚核糖体；胞膜外可见胶原
滑肌细胞形态呈激活状态，细胞突起明显增多，核不
规则，异染色质沿核膜下分布；胞浆内微纤维减少，
粗面内质网和线粒体以及游离聚核糖体增多；细胞外
有基底膜性物质，弹性纤维包围线粒体和突起。TMP
低剂量组：平滑肌细胞较活跃，胞核皱褶多；微纤维
少，粗面内质网和线粒体较多；聚核糖体多；细胞周围
的微纤维物质较少。TMP高剂量组：平滑肌细胞核
较规则，细胞突起明显减少，细胞间距较窄，胞浆内粗
面内质网和线粒体数量减少；微纤维较多；细胞外微
细纤维和弹性纤维减少；无定型物质增多。
2．4免疫组织化学结果：见表2。
2．5原位杂交结果：见表3。
假f术组 模矬缀TMP赢荆肇镶
图2电镜结果
Fig．2Resultsofelectro—microscope
表2各组I型胶原、Ⅳ胶原、PCNA免疫组织化学结果
(平均吸光度)
Table2 Resultsofimmunehistochemistryof
collagenI，collagen1V，andPCNA
amonggroups(averageabsorbance)
组别剂量／(mg·kg一1)动物／其1型胶原 ～型胶原PCNA
TMP 120 11 180．32+5．46。‘204．62+11．52”。148．96±1．45。‘
60 10 152．27±8．83’+160．ooil6．68124．90±4．74
假手术 一 9 189．42i0．81+’230．24217．35。+220．90i6．85。’
模型 一 10 129．57+15．09156．29+11．51129．21±14．99
与模型组比较：’P。P3讨论
冠心病是一种危害人类健康的常见病，随着冠
心病介入治疗领域的飞速发展，经皮冠状动脉介入
治疗(PCI)已经成为冠心病的有效治疗手段之一，
但是PCI后困扰着临床医生的重要问题是PCI术
纤维和弹性纤维；细胞突起有微纤维包绕，偶见粗面 后再狭窄，再狭窄的发生机制及防治亦成为当今心
内质网；细胞间胶原纤维排列较为规整。模型组：平 血管疾病领域研究的热点之一。
表3各组FGF、PDGF、c—myc、bcl一2、Bax原位杂交的结果(平均吸光度)
Table3 ResultsofinsituhibridizationofFGF，PDGF，c—myc，bcl-2，andBaxamonggroups(averageabsorbance)
与模型组比较：+P’P 万方数据
·94· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第1期2007年1,El
TMP是一种新型钙离子拮抗剂，是从川芎的
根茎中提取分离的生物碱单体，是川芎的主要有效
成分。现已证实其具有抗凝血活性[3]。有研究发现[2]
TMP对原代培养的VSMC具有明显的抑制作用，
且呈剂量依赖性，TMP能明显缩小VSMC的细胞
面积、核面积和核周长，能明显抑制VSMC数目的
增长，从形态学角度证实其有效抑制VSMC增殖的
作用。本研究电镜结果提示模型组VSMC明显增
殖，为合成表型。TMP对细胞的形态和分泌功能有
一定的影响，表现在平滑肌细胞较静止、突起减少、
细胞膜较平滑、细胞外基质减少及胞浆内粗面内质
网、线粒体和游离聚核体减少。HE染色结果提示内
皮损伤后VSMC增殖，血管管腔面积减少；低剂量
TMP有轻度抑制VSMC增殖的作用，使管腔面积
有所增加；TMP高剂量的该抑制作用明显增强。内
皮损伤后平滑肌细胞明显增殖、血管管腔面积减少，
TMP对该平滑肌细胞增殖有一定的抑制作用，从
而使血管管腔面积增加，为TMP治疗经皮冠状动
脉腔内成形术(PTCA)术后再狭窄提供理论依据。
本研究结果提示随着平滑肌细胞的增殖，
PCNA表达亦增多，TMP对其有一定的抑制作用，
进一步支持TMP抑制VSMC增殖的理论。本研究
中在体实验显示内皮损伤后胶原I和胶原Ⅳ表达均
增加，TMP干预后表达降低，接近正常。TMP对胶
原I和胶原Ⅳ合成的抑制作用是其干预内皮损伤后
再狭窄的可能机制之一。TMP抑制平滑肌细胞的
增殖，同时也抑制了胶原的合成，使血管管腔面积增
加，干预了血管成型术后再狭窄。
血管成形术导致血管的非血栓性表面破裂后，
胶原纤维暴露导致血小板黏附、聚集以及生长因子
的释放。损伤内皮分泌许多促平滑肌迁移增殖生长
因子如PDGF、FGF等。有研究表明[4]血管成形术
后的修复过程，发现在血管成形术后人冠状动脉部
位有PDGF—B[51表达。本研究结果显示内皮损伤后
PDGF表达明显增加，低剂量TMP可抑制其表达，
TMP高剂量进一步抑制其表达，提示TMP对平滑
肌细胞的抑制作用可能是通过抑制PDGF的表达
从而抑制了SMC由中膜迁移至内膜而起的作用。
FGF出现在动脉损伤早期受损细胞所释放的生长
因子中，对SMC的增殖有促进作用。本研究显示内
皮损伤后FGF表达增多，TMP随剂量增加对FGF
表达的抑制作用亦增强，TMP对SMC的抑制作用
亦可能与其对FGF分泌的抑制有关，从而抑制了
FGF对SMC增殖的促进作用。
细胞外生长因子与细胞表面受体结合可激活，
最终导致细胞分裂信号传导所需的级联反应。
c—myc的激活被认为是血管平滑肌细胞增殖的始动
因素之一。本研究提示在内皮损伤后出现c—myc表
达增多，TMP对其有明显的抑制作用，从而抑制了
平滑肌细胞增殖的始动环节，抑制平滑肌细胞的
增殖。
细胞凋亡是一个主动的、可控的、正常的生命现
象，受一系列基因调控。再狭窄病灶中的细胞增生比
原发性动脉粥样硬化病灶中的更活跃，而且细胞凋
亡发生率亦更高，许多动物实验结果支持了这一结
论。bcl一2基因是一种原癌基因，又称之为凋亡相关
基因。Bax基因在核苷酸序列上与bcl一2有一定同
源性，但作用迥异[6]。本研究显示球囊损伤后凋亡现
象减少，TMP促进细胞凋亡。Bcl一2在球囊损伤后
表达减少，TMP抑制其表达，相反，Bax在球囊损伤
后表达增加，TMP促进其表达。该研究提示球囊损
伤后血管平滑肌细胞增殖，平滑肌细胞凋亡减少，
TMP可促进平滑肌细胞凋亡，bcl一2抑制细胞凋亡，
Bax促进细胞凋亡，TMP正是抑制bcl一2的表达，
促进Bax的表达，从而促进平滑肌细胞的凋亡，抑
制平滑肌细胞的增殖。
内皮损伤后血管平滑肌细胞增殖，胶原合成增
加，平滑肌细胞凋亡减少，细胞外生长因子与细胞表
面受体结合可激活，最终导致细胞分裂信号传导所
需的级联反应。平滑肌细胞的凋亡和增殖对再狭窄
的发生、发展和形成起重要作用，其中PDGF和
FGF起介导作用，从而定量调控细胞增殖诱导内膜
增厚。PDGF与FGF等生长因子与平滑肌细胞凋亡
有密切关系，有防止凋亡形成的作用。PDGF可促进
平滑肌细胞产生胶原，此与PDGF和FGF对平滑
肌细胞增殖的诱导而产生胶原密切相关。TMP抑
制了PDGF和FGF的表达，从而抑制平滑肌细胞
的增殖和胶原的合成；TMP抑制bcl一2的表达，促
进Bax的表达，促进平滑肌细胞的凋亡，从而抑制
了内皮损伤后的再狭窄。
总之，大鼠颈动脉血管内膜损伤可引起VSMC
增殖，血管增厚，管径缩小。PCNA、I型胶原、IV型
胶原、PDGF、FGF、bcl一2、c—myc和TUNEL均高表
达，Bax呈低表达。血管内皮损伤，是多种细胞因子
和生长因子介导的局部血管重建和再塑，是血管平
滑肌细胞迁移、增殖、凋亡及细胞的基质分泌和堆积
的结果，是一系列基因异常表达所引起的血管功能
与结构的改变，此为PCI术后再狭窄的部分机制。
万方数据
中草喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月·95·
不同浓度的TMP对上述异常表达有一定抑制作 EJ]·Circulation，1996，93：577—584·
用，TMP抑制细胞因子和生长因子介导的局部血 ～Tetra二ethylpyr。azine。。dit。deriva。t。o。：。ticr-oag。lability
管重建和再塑，抑制VSMC的增殖，使管壁变薄，管 [。]昱jj黯TRr0Ieadi。t置耋鼻畿篡专黧：0：：慧。：2邕
径增大，为TMP用于治疗PCI术后再狭窄提供部derivedgrowthfactor(B-chain)inneointimaformationafter
分理论依据。 ；r4t^er‘81i“j“。y[J]·z
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z‘78：1966一1968。
十五昧沉香散等5种藏药抗慢性缺氧的实验研究
靳国恩1，张伟1，杨应忠1，杨全余2，周晓梅2，多杰2，格日力1*
(1．青海大学医学院高原医学研究中心，青海西宁810001；2．青海省藏医药研究所，青海西宁810007)
长期慢性缺氧往往使机体处于一种严重的代谢
与机能障碍，从而影响正常的生理和代谢活动，如不
及时给予处理，就会导致慢性高原病的发生。慢性高
原病是青藏高原特有的常见病，其病理生理特征为
严重的低氧血症、红细胞过度增殖和持续性肺动脉
高压。据流行病调查，海拔3500m以上地区，慢性
高原病的患病率是10．1％，并随海拔高度的上升而
增加，而且移居者明显高于世居者[1]，严重影响着青
藏高原人民的身心健康。藏药是我国尚待开发的民
族药物，在我国传统医药中占有重要地位。发掘、整
理、研究藏药对进一步开发利用藏药具有深远意义。
本研究在以往藏药抗急性缺氧研究基础上[2]，对十
五味沉香散等5种有一定抗急性缺氧效果的藏药进
行抗慢性低氧的研究。
1材料与方法
1．1 药物：本研究小组在对抗急性缺氧药物筛选实
验中有一定抗缺氧作用的八味沉香散、十五味沉香
散、愈心冲剂、七十味珍珠丸、如意珍宝丸等5种藏
药制成混悬液以备用o“]。具体如下：十五味沉香散
(藏名：阿嘎交阿，由沉香、肉豆蔻、诃子、藏木香等
15味藏药组成)，临床常用于益气行滞，通络止痛，
特别用于冠心病、心绞痛、脑梗死等气滞血瘀症。剂
量：每次1g，1132～3次。制法：15味药粉碎成细
粉，过筛，混匀即得。愈心冲剂(由檀香、肉豆蔻、广枣
3味组成)，临床用于清心热。剂量：每次1g，1日3
次。制法：将3味药材粉碎成粗粉，加水浸泡，先提取
挥发油，另器收集，药渣加水煎煮3次，合并煎液，滤
过，浓缩为浸膏，加乙醇静置，滤过，回收乙醇，浓缩
为稠膏，加入蔗糖，制成小颗粒，干燥，喷人挥发油，
混匀即得。七十味珍珠丸(由珍珠、玛瑙、珊瑚等70
味藏药精炼制成)，用于各种中毒症、“白脉”病、中风
等心脑血管及神经性障碍疾病。剂量：每3～7天1
丸，每丸1g。制法：除藏红花、牛黄、麝香另研细粉
外，其余动、植物类药共研细粉，矿物类药按其炮制
粉碎后，与动、植物类药细粉配研，过筛，再加入藏红
花、牛黄、麝香细粉，混匀，用麝香细粉加适量水泛
丸，阴干即得，八味沉香散制法同十五味沉香散，如
意珍宝丸制法同七十味珍珠丸。以上藏药均由青海
省金诃藏药厂提供。
1．2动物：Wistar大鼠，160～200g，雌雄各半，由
兰州医学院动物所提供。
1．3方法：将90只Wistar大鼠随机分成6组，每
组15只，雌雄分开并运至玛多县(海拔4300m)
饲养，其中5个药物组作为实验组用5种藏药混悬
收稿日期：2006—05—22
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30260034)
作者简介：靳国恩(1967一)，男，藏族，青海籍，硕士研究生，副教授，研究方向为中藏药开发和研究。
Tel：(0971)6108394E—mail：jmcy2005teacher@yahoo．corn．an；jmcy2005．student@sina．corn
*通讯作者格日力Tel：(0971)6142063E—mail：gerili@Public．xn．qh．cn
万方数据
川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖抑制作用的探讨
作者： 冯津萍， 卢奕， 陈星， 陈敏荔， 郭玉军， 梁爽霖， FENG Jin-ping， LU Yi， CHEN
Xing， CHEN Min-li， GUO Yu-jun， LIANG Shuang-lin
作者单位： 冯津萍,陈星,陈敏荔,郭玉军,梁爽霖,FENG Jin-ping,CHEN Xing,CHEN Min-li,GUO Yu-
jun,LIANG Shuang-lin(天津市胸科医院,天津,300051)， 卢奕,LU Yi(天津医科大学,天津
,300203)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(1)
被引用次数： 13次

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