全 文 ：·762· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月
青海地区唐古特大黄药材HPLC指纹图谱研究
李锦萍1‘2”，陈桂琛P，纪兰菊1，保怡1，李玉林1，周国英1
(1．中国科学院西北高原生物研究所，青海西宁810001；2．青海师范大学，青海西宁810008；
3．中国科学院研究生院，北京 100039)
摘 要：目的 建立了青海地区唐古特大黄药材的HPLC指纹图谱。方法采用反相高效液相色谱法，乙腈一水
(o．04％的磷酸)为流动相，梯度洗脱，体积流量1．0mL／min，检测波长为280nm，柱温为40C。结果精密度、
重现性、稳定性试验中共有峰面积和保留时间的RSD均小于5％。青海不同采集地唐古特大黄的平均相似度为
0．925。结论该方法简便、实用、可靠，可用于以青海果洛地区为主产地不同海拔唐古特大黄药材质量标准的分析
检测，也为栽培大黄代替野生大黄提供理论基础。
关键词：青海；唐古特大黄；HPLC；指纹图谱
中图分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)05—0762—04
FingerprintsofRheumtanguticumfroQinghaiRegionbyHPLC
LIJin—pin91’2’3，CHENGui—chenl，JILan—jul，BAOYil，LIYu—linl，ZHOUGuo—yin91
(1．NorthwestInsti uteofPlateauBiology，ChineseAcademyofSciences，Xining810001，China；2．QinghaiNormal
University，Xining810008，China；3．GraduateSchoolofChin seAcademyofSciences，Beijing100039，China)
Abstract：ObjectiveToestablishtheHPLCfingerprintsofRheumtanguticumfromQinghaiRegion．
MethodsByRP—HPLC，acetonitrileandwaterincluding0．04％H3P04asmobilephase，gradientelution，
flowratewas1．0mL／min，thedet ctionwavelengthwas280nm，andthetemperaturewas40C．Results
TheRSDofpeakareasndretentionmeofcommonpeakinthetestofprecision，repeatability，and
stabilityhasnotreached5％，respectively．Averagesimila itywas0．925inR．tanguticumcollectedfrom
differenthabitats．ConclusionAllabover sultsshowthatthismethodissimple，practicable，andreli—
able．ItcanbeusedasastandardanalysismethodinthequalitycontrolofR．tanguticumfromGuoluoRe—
gioninQinghaiProvince．Italsoprovidesatheoryfoundationonwhicht especiescultivatedcouldreplace
thewildones．
Keywords：Qinghai；RheumtanguticumMaxim．exBalf．；HPLC；fingerprints
大黄为蓼科大黄属植物掌叶大黄Rheumpal—
matumLinn．、唐古特大黄R．tanguticumMax m．
exRegel．或药用大黄R．彬；cinaleBail ．的干燥
根及根茎。具有泻火解毒、攻积化瘀、导泻、利胆、保
肝、降血脂、止血、抗肿瘤、调节免疫等多重作用[1]。
唐古特大黄在青海主要生长于海拔2300～4200m
的林缘、林下、沟谷灌丛及草地，四川I西北部和甘肃
南部也有分布[2]。
大黄的指纹图谱已有文献报道[3~5]，但未见不
同海拔唐古特大黄及对种植与野生唐古特大黄对比
的研究。按照国家药典委员会关于“中药注射剂指纹
图谱试验研究的技术要求(暂行)的通知(2000)”要
求，并参考相关文献报道[6]，对种植与野生唐古特大
黄进行了指纹图谱研究。应用中药色谱指纹图谱相
似度评价系统(2004A)(国家药典委员会)，对其所
有峰和共有峰相似度进行评价和标准指纹图谱的模
拟比较。试验证明，该方法简便、准确、重现性好，结
合药材中共有峰和所有峰的相似度，可以评价其药
材质量、判断其基源。
1药材、仪器与试剂
1．1青海地区唐古特大黄野生样品采集：2004年
10月中旬采集于青海果洛州班玛和达日两县；栽培
样品取自湟中县群加乡、湟源县大黑沟种植基地；部
分材料购自当地药材市场，总计12批。所有采集和
种植材料均为果后期唐古特大黄根部，采集样品均
由中国科学院西北高原生物研究所卢学峰博士鉴
收稿日期：2005—09—12
基金项目：国家科技攻关计划中西部专项资助(2001BA901A47)；青海省重大科技攻关招标项目(200l—N107一 2)
作者简介：李锦萍(1974一)，女，青海西宁人，讲师，现在中国科学院西北高原生物研究所攻读硕士学位，主要从事中藏药种植及化学分
析研究。
*通讯作者陈桂琛Tel：(0971)6143900E—mail：gcchen@nwipb．ac．ca
万方数据
中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月·763·
定，样品来源及编号见表1。
1．2 试剂与仪器：LC一10AT，。二元泵(日本岛
津)；Rheodyne7725进样器(美国)；SPD—
M10AVP二极管阵列检测器(日本岛津)；Class一
装置；AT—132柱温箱(Auto—Science公司)；梯度
滞后时间为0．25min；水为重蒸水并经0．45弘m滤
膜滤过；乙腈(美国Tedia公司，色谱纯)；甲醇(上
海化学试剂有限公司，分析纯)；磷酸(上海化学试
VP液相色谱工作站(日本岛津)；Milli—Q超纯水剂有限公司，分析纯)。
表1唐古特大黄样品来源
Table1 OriginsofR．tangutieum
样品号 产地 采集时间或来源 样品号 产地 采集时间或来源
T—01班玛则达(海拔3810m) 2004—10—16 T—07甘德上贡麻(4050m) 2004—10一17
T—02达日满掌(4360m) 2004—10一15 T—08甘德上贡麻(4030m) 2004—10--17
T一03班玛知钦(3810m) 2004—10--16 T—09达日建设(3980m) 2004—10-18
T-04甘德上贡麻(4056m) 2004—10采挖 T—lO湟中群加(栽培4年2900m) 2004—09--30
T—05班玛 班玛药材市场购买(2004—09)T一11湟源大黑沟(栽培3年2900m)2004一09—27
T-06班玛 班玛药材市场购买(2003--09)T—12玉树 玉树药材市场购买(2003-09)
2方法与结果
2．1色谱条件：色谱柱为KromasilC18(254mm×
4．6mm，5肛m)；乙腈一0．04％磷酸水溶液为流动相
进行梯度洗脱：o～50min乙腈体积分数由10％增
至35％；50～70min由35％增至100％；70～80
min为100％；检测波长280nm；柱温40‘C；体积
流量I．0mL／min，进样体积20弘L。
2．2供试品的制备：经过提取溶剂对比实验，甲醇
提取法显示色谱分析峰数目较多，为23个共有峰，
且操作简单。取大黄样品各1．0kg粉碎，过20目
筛，混合均匀后精密称取0．5g，置具塞锥形瓶中，
加甲醇25mL，回流提取2h，放冷至室温，再称定
质量，用甲醇补足减失的质量，取上清液，过0．45
弘m滤膜，备用。样品应在避光、低温、密闭容器条件
下保存。
2．3精密度试验：取同一批号的供试品溶液(T一
01)，连续进样5次，测得各共有峰面积和保留时间
的RSD分别为1．26％～4．92％和0．047％～
1．490％，表明精密度良好。
2．4稳定性试验：取同一批号的供试品溶液(T一
03)，分别在0、2、4、6、8、10h进样，测得各共有峰面
积和保留时间的RSD分别为1．10％～4．85％和
0．032％～0．959％，表明样品在10h内稳定。
2．5重现性试验：取同一批号样品5份(T一07)，
精密称量，按相同方法制备供试品溶液，分别进样，
测得各共有峰面积和保留时间的RSD分别为
1．00％～4．53％和0．012％～0．386％，表明重现
性良好。
2．6指纹图谱分析、数据处理及相似度：用2．1的
色谱条件测定了12批采集样品指纹图谱。根据指
纹图谱相似度计算要求，以T一01(班玛则达)样
品色谱峰作为标准指纹图谱，其中25．6min左右出
现的峰为主要峰，选择此峰为参照峰(k)。按照“中
药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A)”进行对
照指纹图谱的模拟，标准指纹图谱的生成原理为中
位矢量法，标准指纹图谱如图1所示，对各个峰紫外
光谱图进行对比分析，确定23个共有峰。并且提供
了12批青海唐古特大黄样品的叠加图(图2)。采
用夹角余弦法对各个样品相对峰面积、相对保留时
间及相似度进行计算。以所有峰的峰面积计算相似
度，平均相似度为0．925；以共有峰的相对峰面积计
算相似度，12个样品的相似度为0．923～0．994，平
均相似度为0．971；以共有峰的相对保留时间计算
12个样品的相似度为0．999～1．000，平均值为
1．000，结果见表2～4。
3讨论
3．1供试品溶液制备方法的选择、色谱条件的选择
及优化以及检测波长的选择按参考文献方法[7’8]，样
品处理过程中发现粉碎后回流提取被检测物质的提
取率比其他方法，如超微粉碎、超声提取高，文献报
道大黄提取以丙酮一水为溶媒提取效果好[9]，试验中
甲醇提取物出现的峰最多，故选择甲醇为提取溶剂。
色谱条件选择优化过程中分别考察了0．01％、
0．02％、0．03％和0．04％的磷酸溶液，1％冰醋酸
0 10 20 30 40 50 60 70 80
t|min
图1唐古特大黄的指纹图谱
Fig．1FingerprintofR．tanguticum
万方数据
·764· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5月
O 10 20 30 40 50 60 70 80 90
||min
图2 12批药材色谱分离叠加图(色谱分离图从下到上依次为样品l～12)
Fig．2Overlapchromatogramofseparated12batchesofherbs(Frombel wtotop：chromatogramofsamples1--12)
表2唐古特大黄样品所有峰的相似度 溶液与甲醇、乙腈所组成的流动相，其结果显示乙腈一
Table2 SimilarityofallpeaksfromR．tanguticum
样品编号 相似度 样品编号 相似度
1 1．000 7 0．94l
2 0．950 8 0．903
3 0．952 9 0．916
4 0．932 10 0．899
5 0．909 11 0．898
6 0．930 12 0．871
0．04％磷酸水溶液系统得到的色谱图最佳。出峰时
间通过160min的观察发现80min后无色谱峰。
对190～370am扫描的各波长下的色谱图进
行比较分析，结果280am各峰分离良好，峰数目较
多。因此，选择280rlm作为检测波长。同时按照试
行标准的要求考察了其他波长下的色谱图，其结果
表3唐古特大黄样品共有峰相对峰面积及相似度
Table3 RelativepeakareaandsimilarityofcommonpeakfromR．tanguticum
万方数据
中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第5期2006年5,El·765·
显示12批在不同波长下的色谱指纹图谱具有很好
的相似度。
3．2实验结果表明，唐古特大黄药材指纹图谱具有
较好的稳定性和重现性，12批唐古特大黄药材样品
指纹图谱的特征性和专属性很强，共有峰稳定性很
好，符合国家药典委员会颁发的“中药注射剂色谱指
纹图谱实验研究技术指南”的要求。较全面地反映唐
古特大黄的化学信息，可作为唐古特大黄药材的专
属性指纹图谱，为青海地区以果洛为主产地的不同
海拔唐古特大黄药材品质提供有效、稳定的质量控
制方法。对海拔约2900m的湟源大黑沟、湟中群加
栽培3、4年的唐古特大黄与野生唐古特大黄的指
纹图谱特征比较，证明其化学成分信息符合野生唐
古特大黄药材的指纹特征，为栽培大黄替代野生大
黄提供理论基础。
References：
[1]NorthwestInstituteofPlateauBiology，ChineseAcademyof
Sciences．TibetanMedici eGlossary(藏药志)[M]．Xining：
QinghaiPeople’SPublishingHouse，1991．
[2]LiuSW．FloraQinghaiica．(青海植物志)[M]．(V01．1)
Xining：QinghaiPeople’SPublishingHouse，1997．
I-3]ChenB，CaiBC，PanY，ela1．ComparisonofHPLCfinger—
printchromatographyofRheumpalmatumofdifferentpro—
ducingareas[J]．ChinTraditHerbDrugs(中草药)，2002，
34(5)：457—460．
[4]WangR，ZhangQ，JiaZP，ela1．Applicationofchr mato—
graph—-digitizedfing rprintspectruminidentificationofin·-
digenousmedicinalmaterialsR dixelRhizomaRheifrom
GansuProvince[J]．JChinMedMater(中药材)，2003，26
(7)：484—486．
[5]XuL，ZhangzR．Optimizationoftheseparationcondi—
tionsoffingerprintforRhubarbbyhighperformanceliquid
chromatography口]．JSichuanUniv(四川I大学学报)，
2004，35(4)：559—562．
[6]ZhouYX．ResearchTe nologyofFingerprintinChinese
MateriaMedica(中药指纹图谱研究技术)[M]．Beijing：
ChemicalIndustryPress，2002．
[7]ZhuLY，RenAN，GeJ，ela1．StudyonHPLCfingerprint
ofanthraqinonescompoundsinRadixetRhizomaRhei[J]．
ChinTraditPatMed(中成药)，2003，25(6)：438—440．
[8]JiLJ，LiaozX，SunHF．Determinationofchemicalcorn—
poundsoffourrhubarbs[J]．ActaBiolPlateSin(高原生物
学集刊)，1999，14：237—243．
[9]LiuX，HuFD，FengSL，eta1．Studyofchromatography
fingerprint(CEP)ofDahuang[J]．AnalTestTechnolIn—
strum(分析测试技术与仪器)，2004，10(3)：140—144．
万方数据
青海地区唐古特大黄药材HPLC指纹图谱研究
作者： 李锦萍， 陈桂琛， 纪兰菊， 保怡， 李玉林， 周国英， LI Jin-ping， CHEN Gui-chen
， JI Lan-ju， BAO Yi， LI Yu-lin， ZHOU Guo-ying
作者单位： 李锦萍,LI Jin-ping(中国科学院西北高原生物研究所,青海,西宁,810001;青海师范大学,青
海,西宁,810008;中国科学院研究生院,北京,100039)， 陈桂琛,纪兰菊,保怡,李玉林,周国
英,CHEN Gui-chen,JI Lan-ju,BAO Yi,LI Yu-lin,ZHOU Guo-ying(中国科学院西北高原生物
研究所,青海,西宁,810001)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(5)
被引用次数： 3次

参考文献(9条)
1.Northwest Institute of Plateau Biology Chinese Academy of Sciences 藏药志 1991
2.Liu S W 青海植物志 1997
3.Chen B;Cai B C;Pan Y Comparison of HPLC fingerprint chromatography of Rheum palmatum of different
producing areas[期刊论文]-中草药 2002(05)
4.Wang R;Zhang Q;Jia Z P Application of chromatograph-digitized fingerprint spectrum in
identification of indigenous medicinal materials Radix et Rhizoma Rhei from Gansu Province[期刊论文]
-中药材 2003(07)
5.Xu X L;Zhang Z R Optimization of the separation conditions of fingerprint for Rhubarb by high
performance liquid chromatography[期刊论文]-四川大学学报(医学版) 2004(04)
6.Zhou Y X 中药指纹图谱研究技术 2002
7.Zhu L Y;Ren A N;Ge J Study on HPLC fingerprint of anthraqinones compounds in Radix et Rhizoma Rhei
[期刊论文]-中成药 2003(06)
8.Ji L J;Liao Z X;Sun H F Determination of chemical compounds of four rhubarbs 1999
9.Liu X;Hu F D;Feng S L Study of chromatography fingerprint (CEP) of Dahuang[期刊论文]-分析测试技术
与仪器 2004(03)

本文读者也读过(10条)
1. 解家顺.吴乃林.吴卫华.刘训红 胃舒宁颗粒的质量标准研究[期刊论文]-时珍国医国药2002,13(8)
2. 宋全道.丁易.米广太 槲皮素-部分甲基化β-环糊精包合物的研究[期刊论文]-山东大学学报(医学版)
2003,41(2)
3. 徐雄良.张志荣.黄园 大黄高效液相色谱法指纹图谱分离条件的优化[期刊论文]-四川大学学报(医学版)
2004,35(4)
4. 兰志琼 川产药用大黄叶的生药学研究[学位论文]2005
5. 李锦萍.卢学峰.白丽娜.李玉玲 青海碱茅属植物系统修订[期刊论文]-安徽农业科学2007,35(17)
6. 吴艳.格日力.魏全嘉.屠鹏飞.王戌梅.李晓波.WU Yan.GE Ri-li.WEI Quan-jia.TU Peng-fei.WANG Xu-mei.LI
Xiao-bo 青海产不同海拔唐古特大黄的遗传多样性分析[期刊论文]-中国药学杂志2008,43(21)
7. 胡延萍.谢小龙.温泉.赵旭东.王莉.李毅.HU Yan-Ping.XIE Xiao-Long.WEN Quan.ZHAO Xu-Dong.WANG Li.LI Yi
唐古特大黄五个居群的核型[期刊论文]-云南植物研究2007,29(4)
8. 李锦萍.陈桂琛.卢学峰 青海唐古特大黄种质资源现状与保护对策[期刊论文]-青海草业2007,16(2)
9. 周剑波.蒋福全.文怀秀.邵赟.师治贤.陶燕铎.ZHOU Jian-bo.JIANG Fu-quan.WEN Huai-xiu.SHAO Yun.SHI Zhi-
xian.TAO Yan-duo 唐古特大黄乙醇提取物的HPLC指纹图谱研究[期刊论文]-分析试验室2006,25(11)
10. 许靖 大黄真伪鉴别[期刊论文]-天津药学2001,13(6)

引证文献(3条)
1.皮凤娟.贺福元.罗杰英.李启泉.扶瑾.吴德智.戴儒文.沈俊 运用HPLC指纹图谱确定大黄控制中进样量的研究[期
刊论文]-中国实验方剂学杂志 2008(8)
2.周利.陈桂琛.史萍 一年和二年生人工种植唐古特大黄蒽醌类成分的变化[期刊论文]-中成药 2011(2)
3.李锦萍.陈桂琛.卢学峰 青海唐古特大黄种质资源现状与保护对策[期刊论文]-青海草业 2007(2)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200605047.aspx