全 文 ：中草芮 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第9期2006年9月·1375·
白藜芦醇抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导其凋亡的实验研究
刘宏胜1，王金环1，徐新女1
(1．天津市第一中心医院，天津300192；
，王淑杰1，祁建滨1，刘洪利2
2．天津市药科中等专业学校，天津300400)
摘要：目的研究自藜芦醇对人脑胶质瘤细胞U251细胞生长抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法采用MTT法
检测白藜芦醇对U251细胞的增殖活性的影响，采用流式细胞仪检测白藜芦醇对U251细胞早期、晚期凋亡率的影
响，用倒置显微镜观察不同浓度的白藜芦醇作用后U251细胞的形态学改变。结果白藜芦醇对U251脑胶质瘤生
长有抑制作用，且具时间及剂量依赖性；白藜芦醇能诱导U251细胞早、晚期凋亡，且具时间及剂量依赖性。结论
白藜芦醇能抑制U251脑胶质瘤的增殖并能诱导细胞凋亡。
关键词：白藜芦醇；胶质瘤细胞U251；细胞凋亡
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)09—1375—03
Proliferationinh bitionandapoptosisinducementofresveratroionU251cells
LIUHong-shen91，WANGJin—huanl，XUXin—nnl，WANGShu—jiel，
QIJian—binl，LIUHong—li2
(1．TheFirstCentralHospitalinTianjin，Tianjin300192，China；2．PharmaceuticalSectionSecondary
SpecialSchoolinTianjin，Tianjin300400，China)
Abstract：0bjectiveToinvestigatetheffectsofresveratroloninhibitingproliferationandinducing
apoptosisfU251cells．MethodsTheproliferationactivitywasdetectedbyMTTassay，andapoptosisf
earlyandlateperiodbymethodofAnnexinV—FITCapoptosisa say。andthecellmorphologicalchanges
wereobservedbymicroscopyafterU251cellsbeingtreatedwithresveratr01．ResultsResveratrolcould
significantlyinhibitethproliferationandinducetheapoptosisfearlyandlateperiodofU251cellina
time—anddoes—dependentmanner．ConclusionResveratr01cansignificantlyinhibitethproliferationand
inducetheapoptosisfearlyandlateperiodofU251cell．
Keywords：resveratr01；gliomacellofU251；apoptosis
神经胶质瘤是最常见的中枢神经系统原发性肿
瘤，统计资料表明其发病率占全部颅内肿瘤的
40％。我国每年新查出此病患者约为10万人。胶质
瘤的恶性度高，患者的生存率极低。在美国每年新查
出的25000个病例中，2／3的人在当年死亡。可见，
神经胶质瘤病是当今医学界较难治愈的疾病之一。
白藜芦醇是1940年从毛叶藜芦Veratrum
grandiflorum(Maxim．)Loes．f．中分离出来的，
是一种多酚类化合物，化学名为芪三酚(3，5，4，_
trihydroxystilbene)。它是许多植物受到真菌感染、
紫外线照射或病理状况下产生的一种抗毒素，70多
种天然植物中含有白藜芦醇及其苷，包括藜芦、决
明、虎杖、葡萄、桑子、花生、凤梨等。迄今为止的研究
表明，白藜芦醇不但具有抗血栓、抗突变、抗氧化、抗
炎等功效，而且具有抑制肿瘤的效能[1’2]。如对肺癌、
肝癌、肠癌、胃癌、乳腺癌、白血病等均有拮抗作用。
收稿日期：2006—01—12
作者简介：刘宏胜，女，副主任药师。E—mail：lhswmg@sina．corn
但其对脑胶质瘤的抑制作用少见报道。本实验研究
白藜芦醇对人脑胶质瘤U251细胞生长抑制及诱导
细胞凋亡的作用。
1材料与方法
1．1药品、试剂与仪器：白藜芦醇，购自中国药品生
物制品检定所。批号11535—200301，质量分数99％。
二甲基亚砜(DMSO，Sigma公司产品)，无水乙醇、
含10％小牛血清DMEM培养液(圣东生物科技
发展公司)，0．25％胰酶一0．02％乙二胺四乙酸二钠
(EDTA)、1×PBS(2L)：16gNaCl、0．4gKCl、
3．07gNa2HP04·12H20、0．4gKH2P04，加入经
EASYpureLF超纯水系统净化的蒸馏水至2000
mL、MTT(噻唑蓝，Sigma公司产品)，青霉素、链霉
素(华北制药有限公司)，96孔板、6孔板(美国
Corning公司)，ClinioBi0128酶标仪、REVCOLind
Ber928804C02培养箱、AnnexinV—FITC凋亡检测
万方数据
·1376· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第9期2006年9月
试剂盒(美国BD公司)，包括：膜联蛋白
(Annexin)V—FITC、碘化丙啶(PI)、10×Annexin
V结合缓冲液，HB一10101AF倒置显微镜(日本
尼康公司)。
1．2细胞来源：人星形胶质瘤细胞株U251购自武
汉大学中国典型培养物保存中心。该细胞经一系列
体外和体内培养传代生长稳定。
1．3细胞培养：将U251细胞于含10％小牛血清
的DMEM培养液中(含青霉素100U／mL、链霉素
100>g／mL)，放入CO：培养箱(37℃)培养，隔日
用0．25％胰酶一0．02％EDTA消化传代用于MTT
检测细胞的增殖活性及流式细胞仪检测凋亡。
1．4 白藜芦醇对细胞生长的抑制作用：分别取对数
生长期细胞，用0．25％胰酶～0．02％EDTA消化并
计数，按1×105／mL将90弘L细胞混悬液分别接种
于96孔培养板中。24h后，待细胞融合达80％左
右时，分别加入终浓度为592、395、263、175、116
umol／L白藜芦醇(白藜芦醇先用无水乙醇溶解，再
用DMEM培养液稀释)。每孔10弘L，每个浓度设3
个复孔。对照组加DMEM培养液(含醇量与实验
组等量)，置C02培养箱(37℃)培养24、48、72h
后，加入5g／LMTT(临用前用PBS溶解，pH
7．4)振荡摇匀，置37℃培养箱培养4h，弃去液
体，每孔加入100弘LDMSO，室温振荡10min，用
ClinioBi0128酶标仪492nm处测吸光度(A)值，
作为反应细胞代谢状况的参数。
1．5 白藜芦醇对U251细胞形态学的影响：U251
细胞经白藜芦醇(终浓度为592、395、263、175、116
umol／L)作用72h，用倒置显微镜观察细胞形态学
变化。
1．6流式细胞仪检测U251细胞凋亡：分别取对数
生长期细胞，用0．25％胰酶一0．02％EDTA消化并
计数，U251细胞按2×105／mL将1mL细胞混悬
液分别接种于6孔培养板中，分为5组，分别为加药
组(加膜联蛋白V和PI)、PI组、膜联蛋白V组、空
白对照组(2种染剂都不加)及对照组(2种染剂都
加)。24h后，待细胞融合达80％左右时，加药组加
入白藜芦醇终浓度分别为592、395、263、175、116
umol／L。将其置CO：培养箱(37℃)培养24、48、72
h后，用0．25％胰酶一0．02％EDTA消化离心处理
后，用冷PBS洗涤细胞2次，然后加入1×结合缓
冲液使细胞再次悬浮，并使细胞浓度为1×106／
mL；移出100弘L溶液(1×106个细胞)至5mL培
养管内；相应地加入5肛L膜联蛋白V或5弘LPI，
轻微地涡动细胞，并在避光温箱(25℃)中孵育20
min后，每管中添加400弘L1×结合缓冲液，用流式
细胞仪在1h内检测。
1．7 统计学方法：实验数据以i±J表示，应用
SPSS10．0统计软件分析，组间比较采用方差分析
(OneWayANOVA)。
2结果
2．1 白藜芦醇对U251细胞增殖活性的影响：结果
见表1。可见随着白藜芦醇浓度的增加及作用时间
的延长，细胞的A值降低，表明白藜芦醇对U251
细胞的增殖抑制作用呈剂量与时间依赖性。
表1 自藜芦醇对U251细胞增殖活性的影响(；土s，一一3)
Table1 Effectofresveratrolonproliferation
ofU251cells(；±s，n一3)
Cf
组别(gm01．L一1)——24h( · 一1)
A
48h 72h
与对照组比较：’Pd0．05
。P2．2 白藜芦醇对U251细胞形态学的影响：见图
1。不同浓度自藜芦醇处理U251细胞72h后，与对
照组相比，随着药量加大细胞开始由梭形变成圆形，
胞膜皱缩，胞体缩小，间隙增大，细胞逐渐失去其原
有贴壁特性。细胞数量也随着剂量的增加而减少，细
胞破碎，崩解等坏死表现明显加重。
2．3 细胞凋亡的检测：不同浓度的白藜芦醇作用
U251细胞24、48、72h后，流式细胞仪测定早期、晚
期凋亡率。结果见表2。可见白藜芦醇诱导U251细
胞凋亡呈时间及剂量依赖性。各组与对照组相比均
有显著性差异。
3讨论
胶质瘤是常见的原发性颅内肿瘤，其传统的治
疗方式(手术治疗、化学疗法、放射疗法)疗效很不理
想。可见研究医治脑胶质瘤药物非常必要。文献已
经报道白藜芦醇对多种肿瘤均有抑制、杀伤作用。其
可能的生化机制包括：(1)抑制核苷酸还原酶、Cox、
细胞色素、P450、DNA聚合酶、DNAH：辅酶Q氧化
还原酶。(2)诱导p53、抑制Bcl一2、拓朴异构酶
(topoisomerase)Ⅱ表达。对癌症发生的3个阶
段——起始、促进、发展均有抑制作用D“]。从本实验
结果可知，白藜芦醇能明显抑制人脑胶质瘤U251
万方数据
中草喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第9期2006年9月·1377·
对照 白藜芦醇116utool／L 白藜芦醇175umol／L
白藜芦醇263unol／L 白藜芦醇395utool／L 白藜芦醇592umol／L
图1 U251细胞形态学变化
Fig．1MorphologicalchangesofU251cells
表2 白藜芦醇对U251细胞凋亡的影响(；土s，辟一3)
Table2 EffectofresveratrolonapoptosisofU251cellso±s。弹一3)
组别
c／ 作用24h细胞凋亡率／％ 作用48h细胞凋亡率／％ 作用72h细胞凋亡率／％
(btmol·L_1)早期 晚期 早期 晚期 早期 晚期
与对照组比较：。P<0．05
+P<0．05uscontrolgroup
细胞增殖并诱导其凋亡，并呈时间及剂量依赖性。形
态学观测也显示随着药量加大细胞逐渐失去其原有
贴壁特性，细胞数量逐渐减少，细胞破碎。体外实验
表明白藜芦醇能抑制、杀伤胶质瘤细胞，白藜芦醇对
脑胶质瘤细胞的作用将进行更深入研究。
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万方数据
白藜芦醇抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导其凋亡的实验
研究
作者： 刘宏胜， 王金环， 徐新女， 王淑杰， 祁建滨， 刘洪利， LIU Hong-sheng， WANG Jin-
huan， XU Xin-nü， WANG Shu-jie， QI Jian-bin， LIU Hong-li
作者单位： 刘宏胜,王金环,徐新女,王淑杰,祁建滨,LIU Hong-sheng,WANG Jin-huan,XU Xin-nü,WANG
Shu-jie,QI Jian-bin(天津市第一中心医院,天津,300192)， 刘洪利,LIU Hong-li(天津市
药科中等专业学校,天津,300400)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(9)
被引用次数： 4次

参考文献(4条)
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