全 文 ：中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs笫38卷第5期2007年5月·733·
地龙提取物的抗凝血作用
何红1’2，车庆明r，孙启时2
(1．北京大学药学院，北京100083；2．沈阳药科大学中药学院，辽宁沈阳110016)
摘要：目的研究地龙提取物的抗凝血作用。方法观察地龙提取物对小鼠凝血、出血时间和家兔离体血浆复钙
时间的影响，测定提取物中游离氨基酸的量。结果地龙提取物能延长小鼠凝血、出血时间和家兔离体血浆复钙时
间。游离氨基酸测定结果表明，提取物中含有丰富的氨基酸。结论地龙提取物所含的游离氨基酸可能是其抗凝血
作用的有效成分。
关键词：地龙；抗凝血作用；氨基酸
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)05—0733一03
AnticoagulanteffectsO￡Pheretimaextr cts
HEHon91’2，CHEQing—min91，SUNQi—shi2
(1．CollegeofPharmaceuticalScience，BeijingUniversity，Beijing100083，China；2．CollegeofChinese
MateriaMedica，ShenyangPharmaceuticalUniversity，Shenyang110016，China)
Abstract：ObjectiveTos udytheanticoagulanteffec sofPheretimaextractsandanalyzeth
effectiveconstituents．MethodsAntithromboticeffectsofPheretimaextractswereobservedby
determiningthecoagulationtime，bleedingtimeofmiceandtherecalcificationtimeofrabbitplasmain
vitro，meanwhilethecontentoffreeaminoacidinthextractsweredetermined．ResultsPhere ima
extractscouldprolongthecoagulationtime，bleedingtimeofmice，andtherecalcificationtimeofrabbit
plasmainvitro．ThecontentoffreeaminoacidwasrichinPheretimaextracts．ConclusionFreeam no
acidinPheretimaextractsmaybethemainanticoagulanteffectiveconstituents．
Keywords：Pheretima；anticoagulanteffe ts；aminoacid
地龙是一味常用传统中药，为钜蚓科动物参环
毛蚓Pheretimaaspergillum(E．Perrier)、通俗环
毛蚓P．vulgartsChen、威廉环毛蚓P．guillelmi
(Michaelsen)或栉盲环毛蚓P．pectinifera
Michaelsen的干燥体，具有清热定惊、平喘通络的
功效，用于高热神昏、关节痹痛、半身不遂等症。现代
研究发现地龙具有中枢抑制、松弛平滑肌、抑制血栓
形成、解热、降压等作用[1]。
1983年Mihara等发现人口服地龙提取物后有
直接溶解纤维蛋白及激活纤溶酶原作用后，地龙在
凝血、抗血栓方面的作用备受关注，但多数研究的重
点集中在地龙对纤溶酶的作用方面。由于口服的酶
制剂难于吸收及在消化系统易被水解为氨基酸，
且中药汤剂需长时间煎煮，酶易变性失活等原因，
笔者认为地龙提取物的有效成分可能不是其活性
酶，而是降解产物或小分子化合物，所以本实验对地
龙提取物的抗凝血活性和游离氨基酸的量进行了
研究。
1材料与方法
1．1仪器：日立、835型氨基酸自动分析仪(日本)，
离心机(白洋离心机厂)。
1．2药品与试剂：广地龙购于北京首创大地药业有
限公司，经鉴定为参环毛蚓P．aspergiHumE．
Perrier的干燥体；氯化钙为上海通亚精细化工厂i
枸橼酸钠为北京化工厂生产；阿司匹林为北京双桥
制药公司生产。
1．3实验动物：ICR雄性小鼠50只，体重18～22
g；家兔1只，体重2．5kg，均由北京大学医学部实
验中心提供。
1．4地龙提取物的制备：广地龙加20倍量水浸泡
12h，煎煮2次(2、1．5h)，减压浓缩，浓缩液加石油
醚萃取3次，水相经离心(4000r／rain)20min后
收稿日期：2006—08—22
基金项目：国家自然科学基金杰出青年项目(30225049)
作者简介：何红(1979一)，女，江苏昆山人，沈阳药科大学生药学博士研究生，研究方向为中药复方的现代研究。
E—mail：ks7912@sina．corn
*通讯作者车庆明Tel：(OLO)82802468E—mail：cheqingming2003@sina．corn
万方数据
·734· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月
浓缩至浸膏，浸膏加95％乙醇加热回流提取，滤
过，回收乙醇得醇溶部分。
1．5地龙提取物对小鼠凝血、出血时间及家兔血浆
复钙时间的影响
1．5．1地龙提取物对小鼠凝血时间的影响：ICR小
鼠40只，随机分为给药组和对照组，以人20g／d生
药量折算[2]，分别ig给予地龙提取物(o．30、0．55、
1．10g／kg)和等体积蒸馏水，连续给药3d。于末次
给药75min后用毛细玻管法测定凝血时间[3]。
1．5．2地龙提取物对小鼠出血时间的影响：ICR小
鼠30只，随机分为3组，即给药组、阿司匹林组和对
照组，分别ig给予地龙提取物(o．55g／kg)、阿司匹
林羧甲基纤维素混悬液(10mg／kg)和等体积蒸馏
水，连续给药3d。参照文献方法[4]，将小鼠置于固定
器中，使其尾部垂直，末次给药后75min，在距尾尖
5IBm处剪断，从血自行流出后计时，每隔30S用滤
纸吸去血，直至滤纸吸时无血(On液自然停止)即
为出血时间。
1．5．3地龙提取物对家兔血浆复钙时间的影响：家
兔静脉取血4．5mL，迅速加入装有38mg／mL枸
橼酸钠抗凝剂0．5mL的离心管中，混匀后离心
(1000r／min)10min，分离血浆置冰浴备用。取试
管5支，每管加入血浆和生理盐水各0．1mL，随即
放入37℃水浴温育1min，然后各加入2．8rag／
mLCaCl。溶液0．1mL。混匀，加入时开动秒表，每
隔10S缓慢倾斜试管一次。记录自加入CaCl。至纤
维蛋白形成，即液面不动所需时间，计算5管均值，
即为对照组血浆复钙时间。将生理盐水换成不同质
量浓度的地龙提取物0．1mL，按相同方法求出提取
物组血浆复钙时间[3]。
1．6地龙提取物中游离氨基酸测定
1．6．1样品液的制备：取地龙提取物干燥，精密称
量，定容至1mL。再将样品溶液和磺基水杨酸以
1：1混合，充分混匀，离心(100 0r／rain)15rain，
取上清液直接上机测试。
1．6．2样品测定：采用日本日立835型氨基酸自
动分析仪，分析柱2．6mrn×150mill不锈钢柱，离
子交换树脂为日立Hilachigcl2619#，柱温53℃，体
积流量0．225mL／min，压力80～130kg／cm2，循环
时间70min，茚三酮体积流量0．3mL／min，压力
15～35kg／cm2。分析变换5，标准浓度3nmol／L，氮
气压力0．28kg／cm2。
2结果
2．1地龙提取物对小鼠凝血、出血时间及家兔血浆
复钙时间的影响
2．1．1地龙提取物对小鼠凝血时间的影响：结果见
表1。从表中可以看出，地龙提取物可显著延长小鼠
凝血时间，与对照组比较差异极显著(P<0．001)。
表1地龙提取物对小鼠凝血时间的影响(；土s，n一10)
Table1 EffectofPheretimaextractsoncoagulation
timeofmice(；士s，肛一10)
与对照组比较：一P<0．Ol⋯P’。P2．1．2地龙提取物对小鼠出血时间的影响：结果见
表2。地龙提取物可延长小鼠尾尖出血时间，与对照
组比较差异极显著(P<0．001)。
表2地龙提取物对小鼠出血时间的影响(；±s，咒一10)
Table2 EffectofPheretimaextractsonbleeding
timeofmice(i±s，n一10)
与对照组比较：一P。’P2．1．3地龙提取物对家兔离体血浆复钙时间的影
响：结果见表3。地龙提取物能明显延长家兔离体血
浆复钙时间，并随着其质量浓度的升高而呈现明显
的量效关系，且与对照组比较均有显著性差异
(P<0．001)。
表3地龙提取物对家兔离体血浆复钙时间的影响
@土s，n一5)
Table3 EffectofPheretimaextractsatvarious
cOncentrationsonrecalcificatiOntime
ofrabbitplasmainvitroo士S，n一5)
与对照组比较：⋯P⋯P2．2地龙提取物中游离氨基酸成分分析：结果见表
4。地龙提取物含有19种游离氨基酸，其中有人体所
必需的8种氨基酸(苏氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮
氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、色氨酸)，游离氨基
酸总量占提取物的26％。
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·735·
表4地龙提取物中游离氨基酸成分分析
Table4 Analysisoffreeaminoacidcontent
inP^eretimaextracts
氨基酸 质量分数／％ 氨基酸 质量分数／％
牛磺酸0．48 异亮氨酸 2．31
天冬氨酸0．173 亮氨酸 5．92
苏氨酸 1．10 酪氨酸0．354
丝氨酸0．832 苯丙氨酸 2．95
谷氨酸0．572 赖氨酸 1．31
甘氨酸0．635 组氨酸0．332
丙氨酸 3．2 色氨酸0．295
7一氨基丁酸0．194 精氨酸0．922
缬氨酸 2．50 脯氨酸 1．17
蛋氨酸0．746 总氨基酸 26
3讨论
实验结果表明，地龙提取物可明显延长小鼠凝
血、出血时间及家兔离体血浆复钙时间，提示地龙提
取物能抑制内源性凝血系统，具有抗凝血作用。
地龙提取物含有19种游离氨基酸，总量达
26％以上。游离的谷氨酸、甘氨酸、酪氨酸、色氨酸、
和组氨酸或是神经递质或是递质的前体物质，且质
量分数最高的几种氨基酸缬氨酸、亮氨酸和异亮氨
酸为脑内的能源物质，上述物质易通过血脑屏障，具
有促进神经细胞更新、调节神经递质代谢、维护神经
功能及抗脑组织缺氧等作用。另外量较高的苯丙氨
酸、赖氨酸和精氨酸在心血管方面也有重要的作
用[5]，赖氨酸是优良的血栓预防剂，与蛋氨酸合用能
抑制重高血压病[63；苯丙氨酸能预防某些有高血压
病家族史“易感者”发病，降低心血管疾病的发病率；
还可对抗自由基，防治缺血一再灌注损伤[73；精氨酸
是人体半必需氨基酸，可通过L—Agr—NO途径扩张
血管、抑制血小板聚集、减少氧自由基损伤，用于治
疗缺血性心脏病、高血压、肺动脉高压症、动脉粥样
硬化等疾病[83。综上所述，推测地龙提取物中所含有
的游离氨基酸可能是地龙抗凝血作用的主要有效
成分。
以往的多数研究认为地龙纤溶酶是抗血栓活性
的有效成分，但临床上用的多为口服制剂，而口服的
酶制剂在消化系统易被水解为氨基酸进入血液，因
而推测地龙纤溶酶口服时实际发挥疗效的物质可能
是其水解产物。本实验所用的不含活性纤溶酶的提
取物具有抗凝血活性，且主要含有丰富的游离氨基
酸，所以推断其氨基酸可能是临床上实际发挥抗凝
血疗效的物质。
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虎杖提取物对0(一葡萄糖苷酶的抑制作用
郑晓媛，杜俊蓉+，杨芳，彭海燕，陈雏，喻冬柯
(四川大学华西药学院药理教研室，四川成都610041)
摘 要：目的 研究虎杖水溶性提取物对a一葡萄糖苷酶的作用。方法 采用大孔吸附树脂柱色谱法进行虎杖水溶
性总提取物初步分离，研究其总提取物和不同组分对a一葡萄糖苷酶活性的影响及其抑制反应的类型一结果 虎杖
总提取物(RRPC)与300A醇洗脱物(RRPCⅡ)对a一葡萄糖苷酶的IC；。分别为74、15t-tg／mL，而蒸馏水(RRPC
收稿日期：2006一10—13
基金项目：四川大学辐射物理及技术教育部重点实验室开放基金资助(LF04004)
*通讯作者杜俊蓉Tel：(028)85503938E—mail：dujr07@gmail．corn
万方数据
地龙提取物的抗凝血作用
作者： 何红， 车庆明， 孙启时， HE Hong， CHE Qing-ming， SUN Qi-shi
作者单位： 何红,HE Hong(北京大学药学院,北京,100083;沈阳药科大学中药学院,辽宁,沈阳,110016)
， 车庆明,CHE Qing-ming(北京大学药学院,北京,100083)， 孙启时,SUN Qi-shi(沈阳药科
大学中药学院,辽宁,沈阳,110016)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(5)
被引用次数： 12次

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