全 文 ：中草1|骞ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第12期2006年12月·1799·
p一榄香烯脂质体的制备工艺研究
黄汉昌1，朱宏吉卜，张明贤2，
(1．天津大学化工学院制药工程系，天津300072；
李庆武1，林 强2，兰天路1
2．北京联合大学制药工程研究所，北京100023)
摘要：目的 确定p榄香烯脂质体较佳的配方组成和制备方法。方法 比较薄膜水化(TFH)、逆相蒸发(REV)和
REV结合高压挤压法制备p榄香烯脂质体方法，优选出较优的制备方法；光子相关衍射法测量p榄香烯脂质体的
粒径；气相色谱法测定包封率。结果 薄膜水化法制备的p榄香烯脂质体的包封率大于逆相蒸发法脂质体的包封
率，但该法不易于批量生产。逆相蒸发法脂质体经高压挤压后在一定挤压程度内，粒径减小、包封率和载药量增加，
所制得的p榄香烯脂质体稳定性良好，6个月未发现凝絮分层现象。结论逆相蒸发结合高压挤压方法制备的p一榄
香烯脂质体粒径小而分布较均匀，且有较高的载药量和包封率。
关键词：p榄香烯；脂质体；高压挤压法；气相色谱
中图分类号：R284．2；R286．02文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2006)12—1799一04
Preparativeproc ssingtechniqueofp— lemeneliposomes
HUANGHan—chan91，ZHUHong—jil，ZHANGMing—xian2，LIQing—WUl，LINQian92，LANTian—lul
(1．DepartmentofPharmaceuticalEngineering，SchoolofChemicalEngineeringandTechnology，TianjinUn vers ty，
Tianjin300072，China；2·InstituteofPha．rmac uticalEngineering，BeijingUnitedUn versity，Beijing100023，China)
Abstract：ObjectiveToop mizethcompositionandprocessingmethodofpelemeneliposomes．
MethodsThe口一elemeneliposomeswerepreparedbythethinfilmhydration(TFH)，thereverse—phase
evaporation(REV)，andREVplushighpressureextrusionwhichwerecomparedtoselecttheptimum
preparativeway．Theenvelopmentrateofp—elemenewasanalyzedbyGC．Theparticlediameterofp—ele—
meneliposomeswasmeasuredbydynamiclightscattering．ResultsAlthoughthe nvelopmentrateofp
ele—meneLiposomespr paredbyTFHmethodwasbetterthanthatpreparedbyREVmethod，itwasdiffi—
cultobeusedtoscaleup．Theenvelopmentratea dtheloadofpele—meneliposomeswereincreased
whilediameterofvesicleswadecreasedwhenpreparedwithREVplushighpressureextrusion．Theob—
tainedliposomehadagoodstoragestabilityandnotbeenfoundflocculatedinsixmonths．Conclusion
Thediameter』8-elemeneliposomespr paredbyREVplushighpressureextrusionaresmalleranduniform．
Theloadinga denvelopmentrateofpelemeneishigherthanthatbytraditionalmethod．
Keywords：13-elemene；liposomes；highpressureextrus onmethod；GC
脂质体是磷脂类等分子的自组装体，是一种由
一个或多个脂质双层中间包覆水相结构的微囊。脂
质体在很多领域得到了应用，作为一种药物载体也
已经实现了商业化[1]。p一榄香烯(8一elemene)是从温
莪术等植物中提取的具有抗肿瘤活性的天然药物。
在香茅精油中也含有较高的量，在提取轻组分后的
香茅油重组分中，p榄香烯可以高达80％瞳]。作为治
疗恶性肿瘤如肝癌，癌性胸、腹水的抗癌药物，以p一
榄香烯为主要成分，同时还含有7一榄香烯、辞榄香烯
及其他萜类化合物的榄香烯乳剂已经被开发为国家
二类新药。乳剂是传统的药物赋型形式，具有制备容
易、给药方便的优点。但也有不利的一面，在热力学
上是不稳定的体系，随着时间的延长，乳剂会破乳分
层；乳液粒径较大且分布不均，易造成病灶吸收缓
慢。本实验将B一榄香烯制备成脂质体制剂，研究制备
粒径小而包封率高的p榄香烯脂质体的制备工艺，
考察实验条件及配方组成对p榄香烯脂质体包封
率、载药量和稳定性的影响。
1材料与仪器
】8一榄香烯(实验室自行提纯，质量分数为97％)；
卵磷脂PC(实验室自制，TLC纯)；胆固醇、正十六
烷、石油醚、三氯甲烷等均为分析纯(北京化学试剂
收稿日期：2006—03—08
*通讯作者朱宏吉Tel：(022)27890645E—mail：zhj@tju．edu．cn
万方数据
·1800· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第12期2006年12月
公司)。
EYELAN一1000旋转蒸发仪(上海爱朗仪器
有限公司)；日本岛津GC一14C气相色谱仪；高压均
质机(Niro—Soavi，意大利)；激光粒度仪(Holiba
LB一550，日本)；80一2(2B)型离心机(上海浦东物
理光学仪器厂)。
2方法与结果
2．1 不同离子强度的磷酸盐缓冲溶液(PBS)配制：
分别称取Na2HP04·12H202． 910g，NaH2PO。·
2H200．2324g，NaCl8．0145g，KCl0．1937g溶
于1000mL的超纯水中，即得标准PBS(1／1PBS)。
将标准PBS用超纯水稀释至10倍，得1／10PBS。将
标准PBS用超纯水稀释至20倍，得1／20PBS。
2．2 p榄香烯的测定：参照文献报道[3川的测定p
榄香烯的方法稍有改进。以正十六烷为内标物，气相
色谱法测定B一榄香烯的量。
2．2．1 气相色谱条件：毛细柱Se一54(30m× ．25
mm×0．25um)；柱温：160。C，保持7rain，程序升
温20℃／min到280。C；进样温度与检测温度：300
‘C。载气：N。，毛细柱内流量1．5mL／min，检测器：
FID(氢离子火焰检测器)，进样2．0／aL，20：1分流。
2．2．2校正因子(厂)测定：精确称取28mgp一榄香
烯对照品及30mg正十六烷于25mL量瓶中，用甲
醇定容到亥0度。按厂一(Cp植香烯·A正十六烷)／c正十六烷·
Ap榄香烯)计算。结果见表1。表明p一榄香烯对正十六
烷的平均校正因子为1．157，RSD为0．882(咒一4)。
表1 p一榄香烯校正因子测定(甩一4)
Table1 Calibrationfactorf13-elemene(n一4)
2．3 B一榄香烯脂质体包封率的测定：参考《中国药
典》2005年版附录XIXE微囊、微球与脂质体制剂
指导原则。
载药量=脂质体中所含药物的质量／脂质体的总质量×
100％
包封率一(系统中的总药量一液体介质中未包封的药
量)／系统中的总药量×100％
以石油醚萃取未包封的p一榄香烯[5]。将10mL
B一榄香烯脂质体置于分液漏斗中，加入5mL石油醚
并振荡萃取未包封的8一榄香烯，待分层后取出石油
醚层。重复萃取5次，合并石油醚层。于石油醚液中
加入定量的正十六烷为内标物。测定8一榄香烯与正
十六烷的峰面积，内标法测定未包封p榄香烯(游离
口一榄香烯质量一Ap榄香烯×m正十六烷×∥A正十六烷)，从而
间接测得p榄香烯的包封率。
2．4薄膜水化法制备口一榄香烯脂质体[6]：固定卵磷
脂用量400mg，按3因素3水平的正交设计(表2)
(卵磷脂与胆固醇的物质的量比为6：-1～2：1；卵
磷脂与p一榄香烯的物质的量比为1：1～3：1)，精
确称取卵磷脂、胆固醇、p榄香烯于500mL旋转烧
瓶中，加入适量的维生素E，再加入三氯甲烷使以上
物质溶解。于旋转蒸发器上，42‘C下减压旋转蒸发
50rain，烧瓶内壁形成一层薄膜。向烧瓶内壁通入
N。1rain，以除去残留三氯甲烷和防止脂质氧化。向
旋转烧瓶中加入适量的PBS，超声振荡水化形成脂
质体。测定包封率。以包封率为考察目标，采用直观
分析方法分析胆固醇、p一榄香烯及缓冲溶液对包封
率的影响，包封率高表明该组配方组成有利于p榄
香烯脂质体的形成。实验结果见表3。
表2因素与水平
Table2 Factorsandlevels
表3薄膜水化法制备的B一榄香烯脂质体包封率测定
Table3 Envelopmentrateof13-elemene
liposomespr paredbyTFH
试验号胆固醇／mg p榄香烯／mg 缓冲液 包封率／％
7
8
9
K1
K2
K3
R
由R值可见，缓冲液的离子强度与B一榄香烯的
用量对薄膜水化法脂质体的包封率有较大影响，胆
固醇的用量影响较小。较佳的脂质比为卵磷脂与胆
固醇质量比10：1，载药量小，有利于得到较高包封
率的脂质，当卵磷脂与p一榄香烯质量比达到4：1时
|3峨麟|9麟|3峨|9|9：。。。嚼一一一一膦一麟一％∞％曲
1
1
2
1
2
1
2
1
1
．
．
．Ⅳ∥vⅣ∥∥ⅣⅣⅣ”％％趵
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第12期2006年12月·1801·
基本上不能形成p榄香烯脂质体。
2．5逆相蒸发法制备B一榄香烯脂质体[7]：固定卵磷
脂用量400mg，按3因素3水平的正交设计表(同
表2)，精确称取卵磷脂、胆固醇、p一榄香烯于500mL
旋转烧瓶中，加入适量的维生素E。加入三氯甲烷使
以上物质溶解后，加入所需PBS的1／3，室温下超声
5min以形成w／o乳液。于旋转蒸发器上，42℃下
减压旋转蒸发，待烧瓶内壁形成胶状物。向旋转烧瓶
中加入剩余的PBS，继续减压旋转蒸发结合超声下
形成脂质体。测定其包封率。实验结果见表4。
表4逆相蒸发法制备的B一榄香烯脂质体包封率测定
Table4 Envelopmentratofp—elemene
iiposomespr paredbyREV
试验号胆固醇／mg 8一榄香烯／mg 缓冲液 包封率／％
1 51 108 l／1PBS 47．68
2 5l 54 l／10PBS 90．21
3 51 36 1／20PBS 92．72
4 40．8 108 1／10PBS 84．70
5 40．8 54 1／20PBS 92．67
6 40．8 36 1／1PBS 91．02
7 34 108 1／20PBS 57．98
8 34 54 1／1PBS 82．58
9 34 36 1／10PBS 92．16
K1 76．87 63．45 73．76
K2 89．46 88．49 89．02
K3 77．57 91．97 81．12
R 12．59 28．51 15．26
由R值可见，|3一榄香烯的用量对逆相蒸发法脂
质体的包封率有较大影响，缓冲液的离子强度次之，
胆固醇的用量影响较小。较佳的脂质比为卵磷脂与
胆固醇质量比lO：1，载药量小，有利于得到较高包
封率的脂质，当卵磷脂与B一榄香烯质量比达到4：1
时基本上不能形成脂质体。
2．6高压挤压法制备p榄香烯脂质体凹]：虽然薄膜
水化法脂质体的包封率要高于逆相蒸发法，但考虑
到薄膜水化法较难于实现大的成膜面积等工业化放
大生产，而采用逆相蒸发法结合高压挤压法制备脂
质体。高压挤压法中p一榄香烯脂质体组成为大豆卵
磷脂、胆固醇与8一榄香烯质量比为400：40．8：54，
脂质体在120MPa的压力下经过不同挤压次数后，
得到小粒径的脂质体。利用激光粒度仪，在90。入射
角下，测定卵磷脂浓度为5mmol／L的逆相蒸发p
榄香烯脂质体挤压前后的动态光衍射粒径[9]。经过
不同挤压次数后脂质体的粒径及包封率变化见表
5。可以看出，在一定的高压挤压范围内，p榄香烯脂
质体的粒径随挤压次数的增加而变小、p一榄香烯的
包封率增大；但超过一定的范围后，则得到相反的结
果，究其原因可能是脂质体遭到破坏。
表5高压挤压对}榄香烯脂质体的影响
Table5 Effectofextrusionunder120MPa
onB—elemeneliposomes
改变8一榄香烯的载药量(卵磷脂为400mg，p
榄香烯分别为36、54、68、108rag)，卵磷脂与p一榄香
烯质量比4：1～10：1，胆固醇均为40．8mg制备
逆相蒸发p榄香烯脂质体，经120MPa高压挤压后
脂质体包封率分别为99．20％、99．18％、99．11％和
90．56％。可见，卵磷脂与B一榄香烯质量比达到4：1
后，脂质体依然有较高的包封率，高压挤压后p榄香
烯脂质体的载药量可以得到明显提高。
2．7稳定性考察：将以上3种方法制备的p一榄香烯
脂质体置于离心机中，在3000r／min的离心作用力
下，考察脂质体在离心时间内有无分层变化。结果见
表6。将相同配方组成而不同制备条件下所制备的
脂质体放置于4℃下，考察一定时间内有没有絮凝
分层现象发生。结果见表7。可见，逆相蒸发结合高
压挤压法制备的脂质体有很好的稳定性能。
表6不同方法制备的脂质体的离心稳定性
Table6 Centrifugalstabilityof[3-elemeneliposomes
preparedbyvariousprocessings
表7
Table7
不同方法制备的脂质体的储存稳定性
Storagestabilityofp—elemeneliposomes
preparedbyvariousprocessings
3讨论与结论
3．1 高压挤压对B一榄香烯脂质体的影响：从制备工
艺控制条件来看，薄膜水化法需要较大的成膜面积，
占用较大的实验空间，薄膜水化耗费的时间也较长，
因而难于实现批量生产；而逆相法对实验的压力及温
度要求较薄膜法严格，不易控制，但总体而言，逆相蒸
发法是较易于实现批量生产的制备脂质体的方法，故
采用逆相蒸发法结合其他方法制备p榄香烯脂质体。
万方数据
·1802· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第12期2006年12月
对于以上两种方法，当p榄香烯的量过高时，脂质双
分子层的分子排列遭到破坏，不利于脂质体的形成，
产生絮状物，从而降低p榄香烯的包封率。
脂质体在高压作用下通过狭小的通道后，产生强
大的剪切、冲击及空化撞击作用，脂质膜分子重新规
整排列，形成预期的粒径极为均一的脂质体。对于本
实验的p榄香烯脂质体，由逆相蒸发法制备的包封率
较低且粒径分布较宽的肛榄香烯脂质体，在120MPa
的压力下经过3次的高压挤压作用后，其粒径明显降
低而包封率显著增加；同时脂质体的载药量也得到相
应的提高。但若继续挤压，则起到相反的效果，可能施
加的能量过高，破坏了脂质双分子层。
3．2胆固醇对8一榄香烯脂质体形成的影响：在形成
脂质体时，胆固醇分子中的羟基与磷脂分子中的羰
基以氢键形成复合物。胆固醇对磷脂的相变具有双
向调节作用，在相变温度以上时，它能抑制磷脂分子
中脂肪酰链的旋转异构化运动，降低膜的流动性；在
相变温度以下时，膜脂处于晶态排列，它又可诱发脂
肪酰链的歪扭构象的产生，从而阻止晶态的出现。胆
固醇的用量对p榄香烯的包封率有影响，当卵磷脂
与胆固醇质量比10：1时得到较高包封率的p榄香
烯脂质体。胆固醇的量过高时，会使膜结构过于僵
固，不利于药物的包封，而且在外观上不易形成均一
相；胆固醇的量过低时，卵磷脂与p榄香烯可能易于
形成胶束结构而不利于形成脂质体，从而也降低p
榄香烯的包封率。
3．3缓冲溶液离子强度对p榄香烯包封率的影响：
脂质体中极性的偶极子卵磷脂PC的磷酸酯酰基团
居膜面外层，胆碱基团朝内，这种取向使中性的卵磷
脂PC脂质体膜表面诱导了负电荷[7]。离子强度对
脂质体粒子的表面电势有显著的影响作用[1⋯，离子
强度过高会有更多的反离子进入紧密层(Ster层)，
导致扩散层被压缩，从而易于引起脂质囊泡之间的
聚合。离子强度过高将影响p榄香烯脂质体的形成，
明显降低p榄香烯的包封率和引起p榄香烯脂质体
的存储不稳定。
可见，逆相蒸发结合压力挤压的方法是较易于
实现批量生产p榄香烯脂质体的方法；卵磷脂与胆
固醇的质量比为10：1，采用较低离子强度的缓冲
溶液有利于8一榄香烯脂质体的制备。以上工艺方法
也可以为其他脂溶性药物的脂质体制备及包封率的
测定提供参考。
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膨润土纯化黄芩水提液的研究
张建伟1，王中原1，肖 斌2
(1．沈阳化工学院，辽宁沈阳110142；2．辽河石油勘探局油田建设二公司，辽宁盘锦124120)
絮凝澄清法处理中药水提液比醇沉法具有成本
低，有效成分损失小等优点。但目前所应用的絮凝剂
仍会造成有效成分的损失。膨润土是天然纳米材料，
能吸附有机物，是一种具有选择性絮凝中药水提液
中杂质的絮凝剂Ⅲ，本实验采用膨润土对黄芩水提
液进行除杂净化。
收稿日期：2006—03—05
基金项目：辽宁省教育厅科学研究计划(05L331)
作者筒介：张建伟(1964一)，男(满)，辽宁省义县人，博士，教授，硕士研究生导师，沈阳化工学院机械工程学院院长，一直从事固液分离
和高效节能过程装备的科学研究工作。Tel：(024)89383279E—mail：zhangjianwei64@163．corn
万方数据
β-榄香烯脂质体的制备工艺研究
作者： 黄汉昌， 朱宏吉， 张明贤， 李庆武， 林强， 兰天路， HUANG Han-chang， ZHU Hong-
ji， ZHANG Ming-xian， LI Qing-wu， LIN Qiang， LAN Tian-lu
作者单位： 黄汉昌,朱宏吉,李庆武,兰天路,HUANG Han-chang,ZHU Hong-ji,LI Qing-wu,LAN Tian-
lu(天津大学化工学院制药工程系,天津,300072)， 张明贤,林强,ZHANG Ming-xian,LIN
Qiang(北京联合大学制药工程研究所,北京,100023)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(12)
被引用次数： 4次

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3.张岭.张莉.王嘉欢.陈莉.CHEN Li 麻黄碱壳聚糖修饰脂质体凝胶剂的制备及体外透皮研究仲博[期刊论文]-中草
药 2012(1)
4.王士勇.杨振君.于环.杜微丽.刘飒.张哲.张远.邓英杰 β-榄香烯脂质体体内外对消化系肿瘤的抑制作用[期刊论
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