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Change of ginsenoside Rg1 and ginsenoside Re in different compatibilities of Renshen Baihu Decoction

人参白虎汤不同配伍条件下人参皂苷Rg1和Re变化的研究



全 文 :·702· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月
分离度和适当分离时间的色谱分离方法;在此基础
上,通过复方共煎与各味药单煎及单煎混合的
HPLC图谱比较分析,可以得出复方中的化学成分
因相互作用而出现量的变化情况,同时还可以得出
中药复方指纹峰与单味药的相关信息、化学成分结
构信息、量变信息等。在上述总体思路和策略的指导
下,本实验采用HPLC—DAD及其指纹图谱方法,对
大黄、黄芩配伍前后活性成分的变化情况进行了考
察。实验确定了在反相色谱模式和梯度洗脱条件下,
乙腈一0.01mol/L戊烷磺酸钠溶液为流动相系统的
分离条件,并利用保留时间和紫外光谱归属配伍后
合煎液中主要峰的来源。结果表明,泻心汤中的大
黄、黄芩相配伍,既表现出了增溶协同作用(峰2、4、
10),又表现出明显的溶出抑制作用(峰6、9)。
大黄能抑制血中肿瘤坏死因子(TNF)和白细
胞介素一1(IL一1)浓度的升高,从而降低内毒素血症
的毒性及炎性反应,并通过影响中枢介质cAMP水
平来抑制内毒素性发热[2]。前期药效筛选研究的结
果证实了大黄蒽醌和黄芩黄酮均为活性成分。活性
成分之间的相互作用往往能够影响疗效。实验中发
现,大黄、黄芩配伍的水煎液中没有出现明显的沉
淀,这可能由于大黄蒽醌类成分和黄芩苷均为酸性
成分,成盐的机会少,故沉淀不明显。配伍后,黄芩苷
的煎出量明显降低,可能是由于大黄蒽醌类成分的
酸性较强,混煎液由其所致的酸性因素,不利于其他
酸性成分溶人汤液。而大黄蒽醌类成分大黄酸、大黄
素、大黄酚在配伍后较配伍前有显著升高,可能受黄
芩和大黄蒽醌类大部分成分的增溶效应影响。研究
结果既是对大黄、黄芩配伍的活性成分相互作用的
一般规律的探讨,也为进一步开展泻心汤抗内毒素
作用的药效物质基础研究奠定基础。
实验结果提示,中药复方配伍并非是单味药的
简单加合,而中药复方研究的重要任务之一就是寻
找能够提升复方疗效、使多个药效指标达到综合最
优的配伍比例。大黄与黄芩相配伍,未发现新的成
分,但使大黄中大部分蒽醌类成分的煎出量升高,使
黄芩苷的煎出量有所降低,而其作为整体抗内毒素
作用得到加强。说明在泻心汤抗内毒素作用的研究
中,大黄蒽醌与黄芩黄酮存在一个最佳配伍比例。至
于这个最佳配伍比例是什么,是否为原方以药材配
伍合煎提取所得的配比,这是一个值得研究的问题。
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人参白虎汤不同配伍条件下人参皂苷Rg。和Re变化的研究
丁选胜,安娜芹,姚丹,赵一鸣
(中国药科大学药理研究室,江苏南京210009)
摘要:目的通过研究不同配伍条件下人参皂苷Rg。、Re的变化,探讨人参白虎汤配伍规律。方法采用HPLC
法测定人参白虎汤中各单味药物及不同配伍组别和全方中人参皂苷Rg,、Re。结果各配伍组别在原方配伍比例
条件下,人参皂苷Rg。和人参皂苷Re的量有了很大的提高。结论人参与方中其他药物配伍后,人参皂苷Rg-和
人参皂苷Re的溶出量有一定程度的增加,表明原方配伍比例是合理的。
关键词:人参白虎汤;配伍;人参皂苷Rg。;人参皂苷Re
中图分类号:R286.02 文献标识码:B 文章编号:0253—2670(2007)05—0702—03
ChangeofginsenosideRglandginsenosideRein ifferentcompatibilities
ofRenshenBaihuDecoction
DINGXuan—sheng,ANNa—qin,YAODan,ZHAOYi—ming
(DepartmentofPharmacology,ChinaPharmaceuticalUniversity,Nanjing210009,China)
Keywords:RenshenBai uD coction;compatibility;ginsenosideR91;ginsenosideRe
收稿日期:2006—09—19
作者简介:丁选胜(1962一),男,安徽广德人,副教授,硕士生导师,主要研究方向为心血管药理与临床药学。E—mail:dxs0162@sina.tom
万方数据
中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·703·
前期研究结果表明,人参白虎汤中人参总皂苷
有显著降低糖尿病模型大鼠血糖、升高胰岛素水平
作用,同时能够降低心脏指数和心室指数,上调糖尿
病心肌病变大鼠心肌中GluT。基因表达[1]。还能够
抑制内皮细胞损伤,改善血管内皮细胞功能,可用于
治疗糖尿病血管并发症[2]。基于此,本实验采用RP—
HPLC法对人参自虎汤方中单味人参以及人参与方
中其他药物不同配伍合煎后其中人参皂苷Rg。、Re
的变化进行系统的研究,以进一步揭示人参白虎汤
的配伍规律。
1仪器与材料
PTHW型电热套(巩义市英峪予华仪器厂),
BtichiR114旋转蒸发仪(美国BtiCHI公司),高效液
相色谱仪(日本岛津公司)。
生晒参、知母、石膏、炙甘草购自南京市医药股
份公司,粳米购于市场,经笔者鉴定知母为百合科多
年生草本植物知母Anemarrhenaasphodeloides
Bunge的干燥根茎,生晒参为五加科多年生植物人
参PanaxginsengC.A.Mey的干燥根,石膏为单
斜晶系含水硫酸钙的矿石,炙甘草为豆科植物甘草
GlycyrrhizauralensisFisch.的干燥根及根茎,粳米
为禾本科植物稻(粳稻)OryzasativaL.的种仁。人
参皂苷Rg。(批号0732—200117)、人参皂苷Re(批号
0754—200115)对照品由中国药品生物制品检定所
提供。试验所用试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1供试品溶液的制备:按照各配伍组别剂量称取
药物,水煎2次,每次1h,加水量分别为15和12倍
量,滤过,合并2次滤液。分别取各组的水煎液15~
30mL,用等体积的水饱和正丁醇提取4次,合并提
取液,减压浓缩至适量,置水浴上蒸干,残渣加甲醇
使溶解并转移至5mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇
匀,以0.22ttm微孔滤膜滤过,取滤液,即得。
2.2 色谱条件:采用ODSC18柱(150mm×4.6
mm,5肚m),以乙腈一水(20:80)洗脱,体积流量为
1.0mL/min,检测波长203nm,柱温30.0℃。在此
条件下,理论塔板数按人参皂苷Rg。计算为707,
人参皂苷Rg。、Re的分离度达到1.6。
2.3 阴性对照试验:按照各配伍组别剂量除人参外
分别称取各药物,按照供试品溶液的制备方法制备
阴性对照溶液,进样测定,结果在与人参皂苷Rg。、
Re的色谱峰相应的位置未检出色谱峰,表明方中其
他药物对人参皂苷Rg。、Re的测定无干扰,见图1。
U 5 lU l, 2U Z, jU j,
t/min
1一人参皂苷R912一人参皂苷Re
1-ginsenosideRgl2-ginsenosideRe
图1 人参皂苷Rg-和Re混合对照品(A)、阴性对照
(B)和6样品(C)的HPLC图谱
Fig.1HPLCChromatogramsof insenosideRgl
andRemixedsubstances(A),negative
sample(B),andNo.6sample(C)
2。4线性关系考察:精密称取人参皂苷Rg。3.15
mg、人参皂苷Re2.02mg,置10mL量瓶中,加甲
醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得混合对照品溶液。按
上述色谱条件分别进样4.0、8.0、12.0、16.0、20.0
弘L,各2次,记录峰面积。以峰面积积分值的平均值
为纵坐标,人参皂苷Rg。、Re的质量为横坐标绘制
标准曲线,计算回归方程,结果人参皂苷Rg,:Y=
207521X一182778,r一0.9990,线性范围1.26~
6.31/xg;人参皂苷Re:y=103254X一.51789,T-=
0.9991,线性范围0.80~4.04弘g。
2.5 精密度试验:分别精密吸取质量浓度为0.315、
0.202mg/mL人参皂苷Rg。、Re混合对照品溶液20
弘L,重复进样6次,测定峰面积,计算,结果人参皂苷
Rg。、Re峰面积的RSD分别为1.07%、1.08%。
2.6重现性试验:称取人参样品5份,每份20g,制
备供试品溶液,平行进样2次,每次进样20弘L,测定
峰面积,计算人参皂苷Rg,、Re的质量分数,结果
RSD分别为2.21%、2.52o.4。
2.7稳定性试验:取人参单煎液,分别于0、1、2、4、8、
12、24h各测定1次,进样20弘L,记录峰面积,计算,结
果人参皂苷Rg。、Re峰面积的RSD分别为1.20%、
1.36%。表明供试品溶液在24h内基本稳定。
2.8回收率试验:称取含人参皂苷Rg,0.995mg/g,
人参皂苷Re0.997mg/g的人参样品5份,每份20
g,每份样品精密加入人参皂苷Rg。、Re各10mg,制
万方数据
·704· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月
备供试品溶液,平行进样2次,每次进样20弘L,测定,
计算得人参皂苷Rg。、Re的平均回收率分别为97.3%
和96.7%,RSD分另4为2.43%、2.60%。
2.9样品的测定:精密吸取各样品液20弘L注入液
相色谱仪,每份样品进样2次,测定,计算各样品中
人参皂苷Rg。和Re的质量分数,结果见表1。
表1不同配伍中人参皂苷Rgl和Re的测定结果@一2)
Table1 DeterminationofginsenosideRgland
Reindifferentcompatibilities(捍一2)
样品
配伍

人参皂苷/(rag·g-1)
Rgx Re
3讨论
原方比例条件下,全方中人参皂苷Rg。的量为
人参单煎液的5.8倍,且高于其他按原方比例配伍
的组别。知母、人参在原方比例配伍条件下,人参皂
苷Rg。的量略低于人参单煎液,当增加人参或知母
的比例,人参皂苷Rg。的量均有所提高。在知母、人
参原方比例配伍基础上,加入石膏后,人参皂苷Rg。
的量提高,当增加或降低石膏的比例时,人参皂苷
Rg,的量均有所降低。知母、人参、石膏在原方比例
配伍的基础上,再加入炙甘草,人参皂苷Rg。的量提
高,当增加或降低炙甘草的量时,人参皂苷Rg。的量
均降低。知母、人参、石膏、炙甘草在原方比例配伍的
基础上,再加入粳米(全方),人参皂苷Rg。的量提
高,当增加粳米比例1倍时,人参皂苷Rg。的量略有
提高,而粳米比例减少l倍时,人参皂苷Rg。的量降
低约1倍。
原方比例条件下,各配伍组别中人参皂苷Re
的量大大提高。其中,知母、人参组在原方比例配伍
条件下,人参皂苷Re的量最高,当增加人参或知母
的比例,人参皂苷Re的量均有所降低。知母、人参、
石膏组,增加石膏的比例时,人参皂苷Re的量反而
降低,而降低石膏的比例,人参皂苷Re的量反而有
所提高。知母、人参、石膏、炙甘草组在原方比例配伍
条件下,人参皂苷Re的量最高,无论增加或减少炙
甘草比例,人参皂苷Re的量均降低。全方组,增加
粳米的比例是1倍时,人参皂苷Re的量略有降低,
当降低粳米的比例是1倍时,人参皂苷Re的量降
低约2.5倍。
人参皂苷为人参白虎汤治疗糖尿病(中医之消
渴症)有效成分之一。各配伍组别在原方配伍比例条
件下,其中人参皂苷Rg,和人参皂苷Re的量有了
很大的提高。说明原方配伍比例合理,且方剂配伍存
在规律性。有关本方不同配伍条件下其他化学成分
的动态变化,目前正在研究中。
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万方数据
人参白虎汤不同配伍条件下人参皂苷Rg1和Re变化的研究
作者: 丁选胜, 安娜芹, 姚丹, 赵一鸣, DING Xuan-sheng, AN Na-qin, YAO Dan, ZHAO
Yi-ming
作者单位: 中国药科大学,药理研究室,江苏,南京,210009
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2007,38(5)

参考文献(2条)
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