全 文 ：中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月·849·
大孔吸附树脂对喜树果中喜树碱和喜果苷的分离纯化研究
王瑞芳1，欧来良2，孔德领2，史作清1
(1．南开大学高分子化学研究所，天津300071；2．南开大学生物活性教育部重点实验室
分子生物学研究所，天津300071)
摘要：目的研究不同大孔吸附树脂对喜树碱和喜果苷吸附性能，筛选出对喜树碱和喜果苷具有较高选择性的
树脂。方法 考察了ME一1、ME一2、ME一3树脂对喜树碱和喜果苷静态和动态吸附性能，并采用HPLC法定量分析
喜树碱和喜果苷。结果 随着比表面积的升高，树脂对喜树碱和喜果苷吸附容量逐渐增高，ME一3较ME一1增加了
约40％。以50％乙醇为洗脱溶剂时，提取物中喜树碱和喜果苷含量分别达到15．08％和67．16％。结论具有较高
比表面积的弱极性吸附树脂ME一3对喜树碱和喜果苷具有较高的吸附选择性，是一种较为理想的喜树碱和喜果苷
分离介质。
关键词：喜树；喜树碱；喜果苷；大孔吸附树脂
中图分类号：R284．2；R286．02文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)06—0849一03
Isolationandpurificationofcamptothecineandv coside—lactamfrom
Camptothecaacuminatafruitbymacroporousadsorptionresi s
WANGRui—fan91，oULai—lian92，KONGDe—lin92，SHIZuo—qin91
(1．InstituteofPolymerChemistry，NankaiUnivers ty，Tianjin300071，China；2．KeyLaboratoryofBioactiveMat rials，
MinistryofEducation，InstituteofMolecularBiology，NankaiUniversity，Tianjin300071，China)
Keywords：CamptothecaacuminataDecne．；camptothecine；v coside—lactam；macroporous
adsorptionresi s
喜树中至今已分离出20多种化学成分，其中以
喜树碱和喜果苷(长春苷内酰胺，vincoside—lactam)
含量较高。药理研究表明，喜树碱类化合物和喜果苷
均具有抗癌活性[1~3]。目前提取分离喜树果中的有
效成分的方法主要是溶剂萃取法和氧化铝柱色谱
法，过程复杂，收率很低[45]。本实验采用大孔吸附树
脂法对喜树果中的喜树碱和喜果苷进行分离纯化，
使提取工艺大大减化，收率显著提高。
1仪器与材料
Waters484高效液相色谱仪，HL一2恒流泵
(上海沪西仪器厂)，BSZ一2自动部分收集器(上海
沪西仪器厂)，THZ88—1台式多用恒温震荡器(江
苏太仓鹿河生化仪器厂)，真空干燥箱(天津实验仪
器厂)，DT一100A型分析天平(北京光学仪器厂)。
ME一1、ME一2、ME一3大孔吸附树脂由天津欧瑞
生物科技公司提供；喜树果购自河北安国药材公司，
产地广西，经鉴定符合《广西中药材标准》1990年版
“喜树果”项下规定。喜树碱对照品[(+)一
camptothecine，质量分数为98％，ACROS
organics]，喜果苷对照品(自制，HPLC紫外检测为
单一组分。经高分辨正离子二次离子质谱、核磁共振
谱鉴定，质量分数99％以上)；乙腈(色谱纯)。
2方法与结果
2．1 树脂的预处理：ME一1、ME一2、ME一3湿法装
柱，用工业乙醇洗至加水不浑浊，然后用蒸馏水洗至
无醇，备用。
2．2喜树碱和喜果苷的HPLC测定
2．2．1色谱条件：KromasilC18色谱柱(150mmx
4．6mm，5tLm)；流动相：水一乙腈(70：30)；体积流
量：0．8mL／min；检测波长：256am；温度：室温。
2．2．2标准曲线的绘制：精确称取喜树碱和喜果苷
对照品各约100mg，置50mL量瓶中，加甲醇一氯仿
(1：1)至刻度。精密吸取5、2、1、0．5、0．1mL溶液
分别置于10mL量瓶中，稀释至刻度，混均，取20
弘L进行高效液相色谱测定。以质量浓度为横坐标，
峰面积为纵坐标，进行线性回归，得标准曲线方程。
喜树碱：】，一5．3314x一0．14170，r一0．99942；喜
果苷：Y=1．08172X一2．24386，r一0．99975。
2．3 喜树果中喜树碱和喜果苷的测定：精密称量
2．0g喜树果粉，用80％乙醇在100mL微型索氏提
收稿日期：2004—08—20
基金项目：国家自然科学基金资助项目(29974015)
作者简介：欧来良(1972一)，男，博士。Tel：(022)23500660E—mail：ouyll001@eyou．com
万方数据
·850· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月
取器中回流提取8h，取提取液，测定喜树碱和喜果
苷。结果喜树碱和喜果苷的质量分数分别为
0．0854％和0．3139％。喜果苷的量远比喜树碱高，
约是喜树碱的3．7倍。 ，
2．4供试品溶液的制备：称取100g喜树果粉，分别
7、5倍量80％乙醇回流提取两次，每次3h，滤过，合
并滤液，回收乙醇，加水稀释至1000mL，即得。
2．5静态吸附试验：将0．200g湿树脂直接加入
i00mL具塞锥形瓶中，加入25mL供试品溶液，将
具塞锥形瓶放在298K恒温振荡器上振荡一定时
间，转速120r／min，吸附平衡后，取上清液测定喜树
碱和喜果苷的质量浓度。按下式计算平衡吸附量q。
(mg／g)。结果见表1。
吼一y(Co--C。)／m
式中y是供试品溶液的体积(L)，m是湿树脂的质量(g)，C。
是溶液中喜树碱和喜果苷的起始质量浓度(mg／L)
表1静态吸附结果
Table1 Resultsofstaticadsorption
型号
表面比表面积／吸附量／(mg·g-i)吸附率／％
性质(m2·g矗1)喜树碱喜果苷 喜树碱喜果苷
ME一1中极性350～4009．95 21．28 63-0845．52
ME一2非极性500～5509．47 27．87 50．7650．39
ME一3弱极性900～10012．65 36．16 85．9882．88
可以看出，随着比表面积的升高，树脂对喜树碱
和喜果苷的吸附总量增加。这是因为，3种树脂均为
弱极性或非极性树脂，主要以范德华力进行吸附，所
以比表面积成为了影响吸附的关键因素。而对喜树
碱的吸附，ME一1、ME一3的吸附量均高于ME一2，这
无法用比表面积的影响进行解释。这主要因为ME一
1、ME一3树脂在后交联过程中有羰基生成(gI外光
谱也证实了羰基的存在)，其表面的极性基团与喜树
碱分子之间增加了附加的静电亲和力，因而对喜树
碱的吸附量有所增加。综合吸附量和吸附率来考虑，
ME一3是一种较为理想的喜树碱和喜果苷分离介质。
2．6动态吸附和洗脱试验：7mLME一3湿球装入
内径0．9cm交换柱。样品液以约2BV／h上柱，进
样量为15BV，吸附结果后先用2BV的水洗柱，再
用50％乙醇溶液1BV／h进行洗脱，流出液分部收
集，同时对流份进行HPLC检测，结果见图1、2。
可以看出，ME一3对喜树碱和喜果苷均具有良
好的吸附性能，但洗脱性能却有着明显的差异，在以
50％乙醇作为洗脱溶剂的情况下，前15个床体积喜
果苷已经基本完全洗脱，而喜树碱才刚刚泄漏，如果
通过合适的溶剂选择，甚至可以使两种成分完全分
开，达到色谱分离的效果。
2．7提取物的质量分数：对ME一3树脂纯化、动态
吸附洗脱产物进行HPLC分析，喜树碱和喜果苷的
质量分数分别达到15．80％和67．16％。HPLC图谱
见图3。
l 0
O8
篓o6
“04
02
O．O
0lO 20 30 40 50 60 70
体积／BV
1一喜果苷2一喜树碱
1一vincoside—lactam2- amptothecine
图1喜树果提取物在ME一3上的动态吸附曲线
Fig．1DynamicadsorptioncurveonME一3resin
ofC．acuminatafruitextract
体积／BV
l一喜果苷2一喜树碱
1-vincoside—lactam2-camptothecine
图2喜树果提取物在ME一3上的动态洗脱曲线
Fig．2DynamicdesorptioncurveonME一3resin
ofC．acuminatafruitextract
1一喜树碱2一喜果苷
1-camptothecine2-vincoside—lactam
图3喜树果提取物(A)及其ME一3树脂处理
产物(B)的HPLC图谱
Fig．3HPLCchromatogramsfC． cuminata
fruitextract(A)anditsproducts
purifiedbyME-3resin(B)
3讨论
吸附容量、吸附选择性、洗脱性能是衡量一种树
脂吸附性能的主要指标，本实验对具有不同极性和
比表面积的几种树脂吸附性能进行了考察，发现比
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第6期2005年6月·851·
表面积是决定树脂对喜树碱和喜果苷吸附容量的关
键因素，极性基团(羰基)的引入，则有助于提高树脂
对喜树碱和喜果苷的吸附选择性，这是因为具有较
强接受质子能力的羰基和喜树碱分子上的胺基基团
形成了具有较高专一性氢键的缘故。通过对ME一1、
ME一2、ME一3树脂吸附性能的比较研究，发现具有
高比表面积的弱极性吸附树脂ME一3对喜树碱和喜
果苷具有更高的吸附选择性，并具一定的色谱分离
效果，是一种较为理想的喜树碱和喜果苷分离介质。
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HPLC法测定养血清脑颗粒中马兜铃酸A
高 钧1，孙玉侠1，李 伟1，李德坤1，魏峰1，赵洪芝2
(1．天津天士力集团有限公司，天津300402；2．天津大学化工学院，天津300072)
摘要：目的 检测养血清脑颗粒中是否含有肾毒性成分马兜铃酸A。方法建立高效液相色谱法，采用Agilent
ZorbaxSB—C18色谱柱(250mm×4．6mm，5肛m)，以甲醇一1％冰醋酸水溶液(53：47)为流动相，体积流量为1．0
mL／min，检测波长为317am，测定20批养血清脑颗粒。结果回收率为97．7％，标准曲线为y一2．05X+0．205，
在5．2～68ng线性关系良好；20批养血清脑颗粒中均未检测到马兜铃酸A。结论养血清脑颗粒中不含有肾毒性
成分马兜铃酸A，是一种安全的中药。
关键词：养血清脑颗粒；马兜铃酸A；高效液相色谱
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)06—0851—02
Determinationofar stolochicacidAinYangxueQingnaoGranulabyHPLC
GAOJunl，SUNYu—xial，LIWeil，LIDe—kunl，WEIFen91，ZHAOHong—zhi2
(1．TianjinTaslyGroupCo．，Ltd．，Tianjin300402，China；2．CollegeofChemistry
andChemicalEngineeringofT anjinUniversity，Tianjin300072，China)
Keywords：YangxueQingnaoGranula；aristolochicacidA；HPLC
养血清脑颗粒由当归、川芎、熟地黄、白芍、钩
藤、鸡血藤、夏枯草、决明子、珍珠母、延胡索和细辛
11味中药组成，用于治疗血虚肝亢所致的头痛、眩
晕眼花、心烦易怒、失眠多梦等症。其处方中细辛占
处方量的1．35％。细辛为马兜铃科植物北细辛
AsarumheterotropoidesFr． Schmidtvar．
mandshuricum(Maxim．)Kitag．、汉城细辛A．
sieboldiiMiq．var．seoulenseNakai或华细辛A．
sieboldiiMiq．的干燥全草Ix]。细辛中含有微量的肾
毒性成分马兜铃酸A[2]。由于细辛在处方中的比重
小，且制剂提取过程中以水为溶剂，而马兜铃酸A
不易溶于水，因此，研究养血清脑颗粒中是否含马兜
铃酸A。本实验建立了HPLC法检测养血清脑颗粒
中的马兜铃酸A，以保证养血清脑颗粒的安全性。
1仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪，配置四元泵、二
极管阵列检测器、自动进样器、在线真空脱气机、柱
温箱、配置HPChemstation色谱工作站；Hitachi
收稿日期：2004—08—09
作者简介：高钧(1969一)，男，辽宁沈阳人，高级工程师，博士，1991年获西北大学药用植物学专业学士学位，2004年获沈阳药科大学
药物分析专业博士学位，研究方向：中药质量标准、指纹图谱研究，生物等效性研究，药动学研究，农药残留研究。
Tel：(022)26736533E—mail：gaojunl969@hotmail．corn
万方数据
大孔吸附树脂对喜树果中喜树碱和喜果苷的分离纯化研究
作者： 王瑞芳， 欧来良， 孔德领， 史作清， WANG Rui-fang， OU Lai-liang， KONG De-ling
， SHI Zuo-qing
作者单位： 王瑞芳,史作清,WANG Rui-fang,SHI Zuo-qing(南开大学,高分子化学研究所,天津,300071)
， 欧来良,孔德领,OU Lai-liang,KONG De-ling(南开大学,生物活性教育部重点实验室分子
生物学研究所,天津,300071)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(6)
被引用次数： 7次

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7.曲丽萍 淡豆豉异黄酮提取物的分离、分析及其体内代谢研究[学位论文]硕士 2006


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