全 文 :中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1199·
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黄蘑多糖对荷瘤小鼠化疗的减毒增效作用
马 岩1,张锐1,于小风2,曲绍春2,徐华丽2,睢大员2+
(1.吉林大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,吉林长春130021;
2.吉林大学药学院药理教研室.吉林长春130021)
摘要:目的研究黄蘑Hohenbueheliaserotina多糖对环磷酰胺(CTx)化疗H::荷瘤小鼠的减毒和增效作用。方
法建立小鼠体内移植性肝癌模型;小、中、大剂量治疗组分别ip黄蘑多糖提取物20、40、80mg/kg,连续给药10
d,测定荷瘤小鼠的生命延长率和化疗药物CTX的毒副作用以及黄蘑多糖对CTX的减毒和增效作用。同时检测黄
蘑多糖对淋巴细胞转化率、IL一2水平等免疫系统功能的影响。结果中、大剂量黄蘑多糖具有抑制肿瘤生长,延长
荷瘤小鼠的生存率的作用。与CTX伍用可发挥协同作用,提高抑瘤率(尸
关键词:黄蘑多糖;环磷酰胺;减毒;增效
中图分类号:R286.91 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2006)08—1199一04
Decreasingtoxicityandsynergisticeffe tsofHohenbueheliaserot napolysaccharideext acts
totumor-bearingmicetreatedbycytoxan
MAYanl,ZHANGRuil,YUXiao—fen92,QUShao—chun2,XUHua—li2,SUIDa—yuan2
(1.DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology,SchoolofBasicMedicalScience,JilinUniversity,Changchun
130021,China;2.DepartmentofPh macology,SchoolofPharmacy,JilinUn versity,Changchun130021,China)
Abstract:ObjectiveTostudythtoxicity—decreasingandsyner isticeffectofHohenbueheliaserot na
p01ysaccharidesonH22micetreatedbycytoxan(CTX).MethodsThetumor—bearingmicemodelswith
Hepatoma一22wereestablishedandividedintothreegroups.H.serotinapolysaccharidesextractsweread—
ministeredwithdosagesof20,40,and80mg/(kg·d)throughipfor10d,respectivelyoobserveth ir
lifeprolongabler tes,thesideandtoxicreactionsofCTX,lymphocytetransformations,andIL一2levels.
ResultsThegrouptreatedwithlargeandmediumdosagesshowedH.serotinapolysaccharidescouln—
hibitthetumordevelopmentwithi creasingthesurvivalrate,havegoodsynergismandattenuationoftox—
icitywithCTX,enhancetheinhibitionongrowthofHepatoma(P<0.05,0.01),increasetheweight,
WBCcount,andimmunesystemindexoftumor—bearingmice(尸<0.05,0.01),stimulatetheim ne
system,andimprovelymphocytetransformationandIL一2levels(P<0.05,0.01).ConclusionAsbio—
logicalresponsemodifier,H.serotinapolysaccharidesc nincreasetheactivityofbodyimmunity,improve
theanti~tumoreffectsofCTX。andattenuatetheoxicityofCTXaswell.Theyshouldbestudiedanex—
ploitedfurtherly.
Keywords:polysaccharidesofHohenbueheliaerotina(Schrad.)Sing.;cytoxan(CTX);decreasing
toxicity;synergisticeffect
收稿日期:2005—12-22
基金项目:吉林省科技发展计划项目资助课题(20020803)
作者简介:马岩(1952),女,吉林长春人,教授,主要从事多糖抗肿瘤作用及机制研究。
Tel:(0431)5621905E—mail:mayan@email.jlu.edu.en.
*通讯作者雎大员Tel:(0431)5778520E—mail:dayuansui@163.com
万方数据
·1200· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8,El
化学治疗是目前肿瘤综合治疗中必不可少的手
段之一,但单纯化疗常引起免疫抑制,导致恶性反复
感染,机体衰弱,预后不良而加速患者的死亡[1]。环
磷酰胺(CTX)作为临床常用的化疗药物,可干扰淋
巴细胞的增殖,抑制免疫系统。因此,抗癌药物的研
究要充分考虑到机体与肿瘤的关系,积极调动机体
的自身免疫功能。寻找新的高效低毒抗癌药物或抗
癌增效、减毒剂,探索抗肿瘤的天然活性成分是人类
战胜恶性肿瘤的可能途径之一[2]。黄蘑多糖提取物
具有免疫调节作用[3],对H。。、S㈣、艾氏腹水瘤等有
较强的抑制作用[4]。本实验通过建立小鼠体内移植
性肝癌模型,对黄蘑多糖水溶性提取物延长荷瘤小
鼠的生命率及与CTX联合应用的抗肿瘤作用进行
实验研究,为黄蘑多糖作为化疗辅助药的开发利用
提供科学依据。
1材料与方法
1.1动物:昆明种小鼠,6~8周龄,体重18~22g,
雌雄兼用(每批实验采用同一性别,实验前3d在
实验室常规饲养),由长春高新医学实验动物中心提
供,合格证号:10-5113。
1.2药物与仪器:黄蘑多糖为pD一葡聚糖蛋白,相
对分子质量22000,含总糖88.3%,含蛋白质
10.8%,葡萄糖为主要构成糖,比旋光度+14.0。,由
吉林大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
提供,日本静冈大学生化研究室河岸洋河教授鉴定;
注射用CTX:上海华联制药有限公司生产,批号
20040205,规格:每支200mg,以氯化钠注射液配成
不同质量浓度的溶液,现用现配;H。:瘤株由吉林省
肿瘤医院提供;Yac一1、L929、CTLL2由吉林大学基
础医学院免疫教研室提供;ConA为美国Sigma公
司产品;MTT为美国Amersco公司产品;RPMI一
1640为美国Gibeo公司产品;DMSO为北京益力精
细化学品有限公司产品;其他试剂均为国产分析纯;
MCO一17AIC二氧化碳培养箱为日本SANYO公
司产品;IX71倒置显微镜为日本Olympus公司产
品;Bio--Rad550酶标仪型为美国B.D公司产品。
1.3肿瘤动物模型的建立口]:取腹腔内传代7d的
肝癌H:。小鼠,脱臼处死小鼠,在无菌条件下抽取腹
腔内瘤细胞,并以生理盐水洗涤3次,2500r/min
离心3min,弃上清液,用无菌生理盐水调整瘤细胞
浓度为5×106/mL,接种于昆明种小鼠左侧腹股沟
皮下,每只小鼠接种0.2mL。
1.4 黄蘑多糖对H::荷瘤小鼠生命延长率的影
响[5]:于接种24h内随机分组给药。空白对照组给
予生理盐水;阳性对照组给予CTX30mg/kg;治疗
组分别给予黄蘑多糖20、40、80mg/kg。各组均每天
ip给药0.02mL/g,连续给药10d,停药后继续观
察35d,每天记录体重。若治疗期间对照组动物死
亡率≥20%或其20%存活时间长于4周以上,实
验均应作废,按公式计算生命延长率。
生命延长率一(治疗组平均存活时间/对照组平均存活
时间~1)×100%
1.5黄蘑多糖对CTX的增效作用实验[4]:用小鼠
肝癌H:。建立小鼠体内转移性肿瘤模型,接种方法
同I.3。于接种24h内随机分组给药。对照组给予
生理盐水;CTX小剂量对照组给予CTX10rag/
kg;黄蘑多糖组分别给予黄蘑多糖40和80mg/
kg;CTX小剂量+黄蘑多糖组分别给予CTX10
mg/kg+黄蘑多糖40mg/kg、CTX10mg/kg+黄
蘑多糖80mg/kg;CTX大剂量对照组给予CTX20
mg/kg;CTX大剂量+黄蘑多糖组给予CTX20
mg/kg+黄蘑多糖40mg/kg、CTX20mg/kg+黄
蘑多糖80mg/kg。以上各组均每天ip给药0.02
mL/g,连续给药10d,末次给药后24h脱臼处死荷
瘤小鼠,取瘤并称质量,比较单纯用CTX治疗组与
加用黄蘑多糖组间抑瘤率的差异,观察黄蘑多糖的
增效作用。
1.6黄蘑多糖对CTX的减毒作用实验口]:用小鼠
肝癌H。。建立小鼠体内转移性肿瘤模型,接种方法、
分组和给药同1.5。末次给药后24h脱臼处死荷瘤
小鼠,取瘤并称质量,比较单纯用CTX治疗组与加
用黄蘑多糖给药组间动物体重,计算脏器系数,按常
规方法计数外周血白细胞数目,观察黄蘑多糖的减
毒作用。
1.7 TT法检测黄蘑多糖对小鼠T淋巴细胞转
化功能的影响[2]:取昆明种小鼠按上述方法接种肝
癌H。。并分组给药,连续10d。无菌取脾脏制成单细
胞悬液,离心洗涤,用含有10%FCS的RPMI一1640
培养液调整脾细胞浓度为1×107/mL。加入96孔培
养板,每孔100/xL,每只鼠设3个复孔。对照孔每孔
加100肛L的RPMI一1640,ConA刺激孔每孔加入
100肛LConA(终质量浓度为5/19/mL),37℃、5%
CO。孵箱培养24~48h,加入MTT(5mg/mL)每
孔10肛L,继续孵育4h。小心吸去上清液,加入
MTT溶解液DMSO,每孔100肛L,振荡10min,使
颗粒完全溶解后吹打均匀。在酶标仪上于570nm波
长处读取吸光度(A)值,计算刺激指数(SI)。
SI=ConA刺激孔A均值/对照孔A均值
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1201·
1.8黄蘑多糖对荷瘤小鼠IL一2水平的影响[2]:采
用依赖细胞株增殖测定法检测黄蘑多糖对荷瘤小鼠
IL~2活性的影响。制备ConA诱导的小鼠脾细胞
IL一2反应细胞。将IL一2标准品用培养液倍比稀释,
以3复孑L加入96孔板中,每孔i00/*L。将待测上清
液设1:2、1:4、1:8共3个稀释度,亦按3复孑L
加入到96孔板内。将生长状态良好的CTLL2配制
成5×105/mL浓度的细胞悬液,向每孔中加入100
弘L细胞悬液,置37℃、5%CO。孵箱孵育22h后,
各孑L加入MTT溶液(5mg/mL)10弘L,同样的条
件下继续孵育4h终止培养,小心吸弃孔内上清液,
每孔加入100tzLDMSO,振荡10min。用酶标仪在
570nm波长处测定A值。用稀释度的对数值(x)
和各稀释度对应的A值(y)作直线回归,分析计
算待测样品的IL一2水平。
1.9统计学处理:所有结果均采用Excel进行t检
验显著性差异检测,结果以z-4-5表示。
2 结果
2.1 黄蘑多糖对H:。荷瘤小鼠生命延长率的影响:
黄蘑多糖对腹水型的荷瘤小鼠的生存率与对照组和
阳性药组相比有显著的差异,结果见表1。对照组小
鼠逐渐行动迟缓,毛发不荣,饮食和饮水量减少,体
重增加缓慢,阳性对照组甚至在给药的过程中就已
经死亡,与之相比给药组小鼠活动较为灵活,毛色光
泽亮丽,体重增加较快,机体状态良好。生命延长率
的增加与给药剂量体现一定的量效关系。
表1 黄蘑多糖对H::荷瘤小鼠生命延长率的影响
Table1 EffectsofH.serotinapolysaccharides
onlifeprolongabler teinH22mice
;f11tl/ 动物/ 生存时间 生命延长率/%
组别(。g.矿)只 (7is)Id丐燕丽■而面
对照 一 21 26.30:k5.89 一 一
CTX 30 21 17.53±5.96’’ 一33.35 一
黄蘑多糖20 14 32.53±3.59。4。23.69 85.57
40 14 33.72±2.87。4“28.21 92.24
80 14 34.1414.64。+44 29.8l 94.75
与对照组比较:。P<0.05~P
结果的平均值进行统计分析,CTX10mg/kg剂量
组的平均抑瘤率为26.27%;单用黄蘑多糖(40、80
mg/kg)治疗组抑瘤率分别为37.71%和56.35%;
加用黄蘑多糖40和80mg/kg组的平均抑瘤率分
别为40.01%及46.19%,提高抑瘤率52.30%~
75.82%。CTX20mg/kg剂量组的平均抑瘤率为
59.75%,而加用黄蘑多糖40和80mg/kg组的平
均抑瘤率分别为69.92%和75.42%,提高抑瘤率
19.58%~28.99%。结果显示黄蘑多糖高剂量对肿
瘤生长有抑制作用,抑瘤率高于CTX10mg/kg
组,但不如CTX20mg/kg组抑瘤作用显著,两者
伍用,显示出协同抑瘤作用。提示黄蘑多糖对CTX
有明显的增效作用,结果见表2。
表2黄蘑多糖对CTX的增效作用(;±s,弗一12)
Table2 SynergisticeffectsofH.serotina
polysaccharidesonCTX(;±s,辟一12)
组别 ifl]I/(mg·kg_1)平均肿瘤质量/g 平均抑瘤率/%
与对照组比较:。.P
2.3 黄蘑多糖对CTX的减毒作用:在小鼠肝癌
H::体内模型中,CTX10及20mg/kg组抑制肿瘤
的同时,可使小鼠的体重、免疫器官及白细胞均明显
下降,有些在停药前就已经死亡。黄蘑多糖与CTX
合用可起到保护作用,能对抗CTX所致的体重、白
细胞下降及免疫器官萎缩。提高荷瘤小鼠胸腺和脾
脏质量,降低荷瘤小鼠死亡率,减轻CTX的毒性。
尤其以CTX小剂量与黄蘑多糖合用治疗组效果最
为明显。各组动物体重、脏器质量结果见表3。
2.4黄蘑多糖对荷瘤小鼠T淋巴细胞转化功能和
IL一2水平的影响:黄蘑多糖小、中、大剂量ip给药
10d后,ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖反应明显
提高,同时CTLL2诱导荷瘤小鼠产生的IL一2的量
明显增加,且显示小剂量黄蘑多糖即可产生明显的
免疫调节作用。结果表明,黄蘑多糖有良好的促进荷
瘤小鼠T淋巴细胞增殖转化和提高IL一2水平的作
用,见表4。
3讨论
肿瘤的发生、发展与机体的免疫水平下降有关,
有效的化疗可减轻患者的痛苦,改善临床症状,提高
生存质量及延长生命∞]。如何提高肿瘤对化疗药物
万方数据
·1202· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
表3黄蘑多糖对CTX的减毒作用(;±s,n一12)
Table3 Toxicity—decreasingeffectsofH.serotinapolysaccharidesonCTX(;士s,一一12)
与对照组比较:’P
4P
。P<0.05一P<0.01UScontrolgroup;4P
表4黄蘑多糖对H::荷瘤小鼠T淋巴细胞转化功能和IL一2水平的影响(j±s,n一3)
Table4 EffectsofH.serotinapolysaccharidesonTlymphocytetransformationandIL一2levelinH22mice(i±s,辟一3)
与对照组比较:’尸<0·05一P<0.01;与CTX组比较:”P<0·05““P
疗领域中越来越引起人们重视并值得探讨的问题。 力,辅助化疗药物增强CTX的抗肿瘤作用,同时减
减毒是指减轻病人在化疗中的不良反应;增效是指 轻CTX的毒性,是临床肿瘤综合治疗较为理想的
在化疗期间增强肿瘤对化疗药物的敏感性并提高其 减毒增效剂,具有广泛的应用前景。
治疗效果。对化疗中的减毒、增效作用不能孤立的 References:
看,而要将两者有机的结合起来使之相辅相成。一方 [1]T8ke4aK’.s鼍71h
M
J,,c?‘n。yE,曩a1..C.ritica,.1‘ole.forj“一
面减毒有利于增效,即在减毒作用的同时提高患者 mun。。。一illanceagainsttumordevelopment[J].JExp
的免疫力,增强其免疫杀伤能力,有利于杀伤癌细
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与单纯使用化疗药物相比,与生物反应调节剂合用 :慧篙弯姜Z器舅1茏兕毫;簇n学ol学og报ica:l医fu学nc版tio)n,
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增强抑瘤效果,保证化疗顺利完成。本实验通过研究 [4|C。a.。黑,M.8Y’M。izunoT.:,C:。曼沁墨c,o.nstitu。e.nts,笔8。h.eat-.
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白细胞降低、胸腺和脾脏等免疫器官萎缩和骨髓抑 一m。磊。。d。。t。。t。。i。。fm。urine。。1。。。。through。。一
制等毒性反应,提高CTX的抗肿瘤效果。实验药物 ::怒。n。a蹦turrioal-“岩莩譬=oPx^ic。i,t。y岂嚣‘2yo02’acid-2c50n(j7u)g:at8e6芏
的抗肝癌作用机制主要是通过增强机体免疫力,提866.
高T淋巴细胞增殖、IL一2等起作用嘲,这也可能是 ET]怒j二’竺丧1盅:竺蜀}三:f髦:冀≥恶o;者‘;嚣:
其减毒、增效的机制之一。总之,黄蘑多糖提取物作totherRes,2002,16(2):117—121·
万方数据
黄蘑多糖对荷瘤小鼠化疗的减毒增效作用
作者: 马岩, 张锐, 于小风, 曲绍春, 徐华丽, 睢大员, MA Yan, ZHANG Rui, YU Xiao-
feng, QU Shao-chun, XU Hua-li, SUI Da-yuan
作者单位: 马岩,张锐,MA Yan,ZHANG Rui(吉林大学基础医学院,生物化学与分子生物学教研室,吉林,长
春,130021), 于小风,曲绍春,徐华丽,睢大员,YU Xiao-feng,QU Shao-chun,XU Hua-li,SUI
Da-yuan(吉林大学药学院,药理教研室,吉林,长春,130021)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2006,37(8)
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