全 文 ：中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月·17 5·
E2]
[3]
[4-I
[5]
[6]
[7]
CinatlJ．Glycyrrhizin，anactivecomponentofliquorice
roots，andreplicationofSARS—associatedoronavirus[J]．
Lancet，2003，361(9374)：2045．
ZhangPY，PengZX．Northwestliquorice：ar sourceplant
inthenorthwest[J]．LanzhouUnivJ(兰州大学学报)，
1960(1)：57-87．
QiuMX，LiuJQ．UtilityandprotectionofChineseliquorice
landresourceinaridarea[J]．JNatRes(自然资源学报)，
1993，9(4)：314—321．
FuKZ．TamedPlantingofChineseGlycyrrhizafromWild—
hess(中国甘草野生变家植)[M]．Harbin：Northeast
ForestryUniversityPress，1999．
QiaoSY，ChengSC，WangZB．GlycyrrhiazofChina(中
国甘草)[M]．Beijing：ChineseAgriculturalScienceand
TechnologyPress，2004．
WangWQ．StudiesonEcologicalCharactersofGlycyrrhiza
uralensisFi ch．andEffectsofEcologicalEnvironment0nIts
MedicinalMaterialQuality(甘草生态学特性及生态环境对
其药材质量影响的研究)[D]．Beijing：BeijingFor stryUn —
versity，2000．
[8]WangL，LiJH．Technicialsystemofartificialultivating
GlycyrrhizauralensisFisch．innorthwestr gion[J]．SciSil-
vaeSin(林业科学)，1999，35(1)：129—132．
[9]YuLQ，HeMT，WangZL．Studyontechniquesforapid
propagationoflicorice(Glycyrrhizauralens sFisch．)bytis—
sueculture[J]．GrasslandChina(中国草地)，1999，18(1)：
12一14．
[10]GuangG，ZhengN，GuGL．StudyonhairyootinGly—
cyrrhizauralensisFi ch．[J]．MedPlantCult(药用植物栽
培)，1992，15(10)：3-7．
[11]CengL，LouZC．QualityappreciationofGlycyrrhizaplant—
edinChina[J]．ActaPharraSin(药学学报)，1991，26
(10)：788—793．
[12]YangYX，BianRR，YaoXH．Selectionoff restgray
modelintheperiodofseedlings[J]．ForestRes(林业科学研
究)，1991，4(2)：211—216．
玻璃化法超低温保存怀山药种质的技术研究
洪森荣1’2，李明军1’3”
(1．河南师范大学生命科学学院，河南新乡453007；2．上饶师范学院生命科学系，江西上饶334001；
3．华中农业大学园艺植物生物学教育部重点实验室，湖北武汉430070)
摘要：目的研究怀山药种质资源的玻璃化超低温保存技术。方法 以B号怀山药带芽茎段为材料进行玻璃化
超低温保存，并采用培养法检测保存后材料的成活率，从而筛选出最佳的玻璃化超低温保存技术体系。结果B号
怀山药带芽茎段玻璃化超低温保存较佳的技术体系是继代生长60d的怀山药无菌苗置4℃冰箱低温锻炼7d；在
无菌条件下切取1～1．5em的带芽茎段，转至含5％蔗糖+3％甘露糖的培养基内，置4℃冰箱预培养2d；用60％
的PVS，(22％甘油+13％乙二醇+13％聚乙二醇+10％二甲基亚砜)在0C处理60min，再用100％的PVS。在0
C条件下处理60min，随即迅速投入液氮；保存24h后，在37℃水浴中快速化冻，用含7％蔗糖的MS培养液洗涤
4次，每次停留10min；转至再生培养基(MS+KT2mg／L+NAA0．02mg／L)再培养，成活率可达75％以上，再生
苗与常温苗形态指标差异不大。结论本试验成功地建立了怀山药种质资源玻璃化法超低温保存的技术体系，为
怀山药种质资源的长期保存提供了一条有效途径。
关键词：怀山药；种质资源；玻璃化法；超低温保存
中豳分类号：R282．4 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)11—1715一04
CryopreserVationtechn queofDioscoreappositagermplasmbyvitrification
HONGSen—ron91”．LIMing—junl’3
(1．CollegeofLifeScience，HenanNormalUniversity，Xinxiang453007，China；2．DepartmentofLifeScience，
ShangraoNormalCo lege，Shangrao334001，China；3．KeyLaboratoryofHorticulturalPlantBiology，
MinistryofEducation，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China)
Abstract：ObjectiveTos udythecryopreservationtechniquefDioscoreappositagermplasmre—
sourcesbyvitrification．MethodsSt mswithbudsofB4D．oppositagermplasmwereusedasmaterials
forcryopreservationby i rificationandthesurvivalrateswereexaminedbyculturemethodinordertoop—
timizeacryopreseVationbyvi rificationtechnicalsystemforD．oppositagermplasm．ResultsAbestpro—
cedureofcryopresevationbyvi rificationwasasbelow：Atfirst，theas pticplantletsofstemswithbuds
ofB。D．oppositasubcuhuredinvitrof r60dweretreatedat4℃for7d．ThestemswithbudsofDop-
收稿日期：2006—03—08
基金项目：国家自然科学基金项目(30670208)}河南省重点科技攻关项目(0623030700)
作者简介：洪森荣(1974一)，男，江西永新人，讲师，硕士，主要从事细胞生物学和植物生物技术方面的教学、科研工作。
*通讯作者李明军Tel：(0373)3328189E—mail：limingjun2002@263．net
万方数据
·1716· 中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月
positaabout1—1．5cminlengthwerecUtandpreeulturedat4℃for2din5％sucroseand3％mannose
media，theyweredehydratedwith60％vitrificationsolution(PVSl：22％glycerol+13％glycol+13％
polyethyleneglycol+10％dimethylsulfoxide)a0‘Cfor60minandthendehydratedwith100％vitrifiea—
tionsolutionat0℃for60min．Atlast，thest mswereimmersedimmediatelyintoliquidnitrogendirectly
andconservedfor24h．Afterrapidlythawinginawaterbathat376C，thestemswerewashedfourtimes
withMSmediumsupplementedwith7％sucroseand10mineachtime，thentra sferredand —culturedon
theMSmediumsupplementedwithKT2mg／LandNAA0．02mg／L．Thesurvivalratewasupto75％．
TheregeneratedplantletsofD．oppositahowednomoredifferencethanthenormalplantletsinmorpholo—
gy．ConclusionThistestsetsupsuccessfullyacryopresevationbyvi rificationsystemtechniqueforD．
oppositagermplasm，whichprov desan ffectivewayforlong—lastingconservationinv troofD．opposita
germplasmresources．
Keywords：Dioscoreaopp sitaThunh．；germplasmresources；vitrification；cryopreserVation
怀山药DioscoreappositaThunb．又名薯蓣，
是薯蓣科薯蓣属多年生缠绕性藤本植物，主产于河
南省焦作市的温县、武陟、沁阳等地(古怀庆府所
辖)，药食兼优。人药，具有健脾、补脾、固肾、益精、助
五脏、强筋骨、益气力之功效口3；食用，营养价值高，
为滋补佳品，故素有“怀参”之称，其产品不仅畅销国
内各地，还远销港澳地区和东南亚以及欧、美等地。
目前对怀山药主要开展了栽培管理、组织培养、药用
成分、加工工艺、药理作用以及病毒病和脱毒快繁等
一系列研究工作，而关于种质资源则主要采用田间
保存法，不仅需要大量的人力、物力和财力，而且还
不可避免地受到病虫害和各种自然灾害的影响。因
此，进行怀山药种质资源的离体保存研究就具有十
分重要的意义。
玻璃化法超低温保存是植物细胞和组织长期稳
定保存的较好方法，可以节省空间，避免继代、病虫
害和气候等因素造成的种质丢失，并且设备简单，操
作简便，已经成功地应用于苹果[2]、什薯[3]、紫罗
兰[43等植物种质资源的保存。有关山约的超低温保
存国外已有研究[5]，近年来本研究室对怀山药种质
资源的超低温保存也进行了系统的研究[6]，本实验
报道该研究的部分内容。
1材料与方法
1．1 材料：试验材料为河南师范大学“四大怀药”组
织培养室继代培养的B号怀山药无菌苗。
1．2方法：以怀山药带芽茎段为材料进行玻璃化法
超低温保存，并采用培养法检测保存后材料的成活
率，从而筛选出最佳的玻璃化法超低温保存技术体
系。该方法包括以下程序。
1．2．1低温锻炼：继代生长60d的怀山药的试管
苗分别置于4、7、9℃冰箱中低温锻炼o～30d。
1．2．2预培养：在无菌条件下切取1～1．5cm的带
芽茎段，转至含5％蔗糖+3％甘露糖的培养基内，
置4℃冰箱预培养2d。
1．2．3玻璃化保护剂处理：本实验采用的玻璃化保
护剂(PVS)是参考刘云国瞳]对苹果茎尖进行玻璃化
超低温保存的方法设置的PVS，。其主要成分为
22％甘油+13％乙二醇+13％聚乙二醇+10％二甲
基亚砜。预培养后的茎段先用60％的PVS。在0’C
下处理60min，再用100％的PVS。在0℃下处理
60min，～
1．2．4材料的冷冻保存：将玻璃化保护剂处理过的
材料迅速放人液氮中，保存24h。
1．2。5材料的化冻洗涤：将材料从液氮中取出，采
用37℃水浴快速化冻，化冻后用含1％～10％蔗糖
的MS培养液洗涤4次，每次停留0-30min。
1．2．6成活率检测：将玻璃化超低温保存化冻洗涤
后的怀山药茎段接种到再生培养基上进行培养，记
录成活率及恢复生长的时间，并在60d时测定超低
温保存后的再生苗与常温保存试管苗的各项形态指
标和生理指标。
成活率=玻璃化超低温保存后成活的茎段数／保存的总
茎段数×100％
本试验均为单因子试验，每次处理25个带芽茎
段，实验重复4次。试验结果应用SPSSl0．0统计软
件进行Dunnett法数据分析。实验中所使用的培养
基均为MS+KT2mg／L+NAA0．02mg／L+3％
蔗糖+0．5％琼脂，培养温度为(25士2)℃，光照
14h／d。
2结果与分析
2．1 低温锻炼温度和低温锻炼时间对怀山药玻璃化
超低温保存的影响：取继代培养60d的B号怀山药，
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月·17 7·
在4、7、9℃的低温条件下分别锻炼0、1、3、5、7、10、
15、30d后，投入液氮保存，其冻后成活率见表1。
从表1可以看出：(1)怀山药茎段经过一定时间
的低温锻炼，其冻后成活率都比对照要高，并且随着
低温锻炼时间的延长，其成活率也得到不同程度的
提高，当低温锻炼时间达到7d时，成活率都达到最
大。但当低温锻炼超过7d时，其成活率开始下降。
可见，怀山药茎段的低温锻炼时间以7d为好；(2)
低温锻炼温度对怀山药茎段冻后成活率也有显著影
响，在4℃低温下进行锻炼后，怀山药茎段的成活率
都高于在7和9℃低温下锻炼的效果，而7℃低温
锻炼的效果又优于9℃低温锻炼的效果。在进行怀
山药茎段的玻璃化超低温保存时，试管苗应先在4
、C低温下锻炼7d，这样可获得较高的成活率。
2．2洗涤液蔗糖质量分数和洗涤时间对怀山药玻
璃化超低温保存的影响：玻璃化超低温保存后的材
料，用MS附加1％～10％蔗糖的洗涤液洗涤4次，
裹1低沮锻炼沮度和低疆锻炼时间对B号怀山药茎段
玻璃化法超低汪保存的影响
Table1 Effectof emperaturendtimeoflowtemper—
aturecultureoncryopeservationofB4
D．oppositatemsbyvitrification
低温锻炼 不同低温锻炼温度冻后成活率／Z
时间／d 4℃ 7℃ 9 C
与对照组比较：一P。。P每次洗涤0、1、3、5、7、10、15、30min，其洗涤后成活
率见表2。
从表2可以看出：(1)洗涤液蔗糖质量分数对怀
表2洗涤液蔗糖质量分数和洗涤时间对B号怀山药茎段玻璃化法超低温保存的影响
Table2 EffectofsucroseconcentrationandwashingtimeoncryopreservationofB。D． ppositastemsbyvitrification
与对照组比较：一P’。P山药的玻璃化超低温保存有显著影响。怀山药茎段
冻后的成活率随蔗糖质量分数的增大而增大，当蔗
糖质量分数为7％时，成活率达到最大。但当蔗糖质
量分数超过7％时，其成活率则开始下降。可见，怀
山药茎段超低温保存最佳的洗涤液以MS+7％蔗糖
为好；(2)洗涤时间对怀山药冻后成活率也有显著影
响，其中以每次洗涤10min的效果最好，怀山药茎
段成活率可达76．99％。可见，在进行怀山药茎段的
玻璃化超低温保存时，应用MS十7％蔗糖洗涤4
次，每次洗涤10min，这样可获得较高的成活率。
2．3玻璃化超低温保存后怀山药再生苗与常温保
存苗形态指标的比较：将经过玻璃化超低温保存后
的怀山药带芽茎段与常温保存的怀山药带芽茎段同
时接种到培养基上，前者10d开始恢复生长，15d
茎段开始长出新芽，20d长出新叶，而后者7d即可
恢复生长，13d长出新芽，18d长出新叶。60d时测
定再生苗的形态指标，结果见表3。
从表3可以看出，超低温再生苗与常温苗的形
态指标基本一样，经Dunnett法检验，其株高、叶片
数、芽数和茎节长虽有差异，但未达显著水平。
衷3怀山药超低温保存后再生苗与常温保存
苗形态指标的比较(60d)
Table3 ComparisonofmOrphOlOgicaIindexesofD．
oppositaregeneratedplantletsaf ercryo—
preservationbyv trificationwi hn rmal
plantlets(culturedfor60d)
方法 嚣饼翟兹
超低温保存后再生苗7．034-0．166．06-{-0．173．73-1-0．101 81士0．08
堂墨堡壹苎!曼坠! !：!!圭!：!!!：!!圭!：!!!：!!圭!：!!!：!!圭!：!1
2．4玻璃化超低温保存后怀山药再生苗与常温菌
生理生化指标的比较：将经过玻璃化超低温保存后
的B号怀山药带芽茎段与常温保存的B号怀山药
万方数据
·1718· 中革115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月
带芽茎段同时接种到培养基上。60d时测定再生苗
和常温苗的生理生化指标，结果见表4。
从表4可以看出，B号怀山药超低温再生苗与
检验，其叶绿素和可溶性蛋白的量以及POD活力虽
有差异，但未达到显著性水平。结合表3可以知道，
玻璃化超低温保存技术用来保存怀山药种质资源是
其常温苗的生理生化指标基本一样，经Dunnett法合适的，能够保证遗传资源的稳定性。
表4怀山药玻璃化法超低温保存后再生苗与常温苗生理生化指标的比较(60d)
Table4 ComparisonofphysiologicalandbiochemicalcharactersofD·oppositaregeneratedplantletsafter
cryopreservationby i rificationwi hn rmalplantlets(culturedfor60d)
3讨论
在植物种质资源超低温保存过程中，低温锻炼
和预培养是保证成活率的重要步骤。低温锻炼可提
高植物体内脯氨酸、多胺的量及胞液的渗透势等，从
而增加植物的抗冻性。本实验发现，在怀山药茎段的
玻璃化超低温保存中，4 C低温处理效果最好。可
见，低温锻炼可以提高怀山药带芽茎段的耐冻力。刘
云国等[21将培养60d的苹果无菌苗分别转入0～7
C下，培养1～42d，发现，随着低温锻炼时间延长，
存活率增加，但28d之后存活率基本保持不变，不
同的低温(0--7C)处理中，4C处理得到最高的存
活率；周小梅等[71将玉米幼胚在4C冰箱中放置7d
也获得较好的效果，玻璃化超低温保存后能诱导出
良好的愈伤组织；赵艳华等[81认为马哈利樱桃离体
茎尖随低温处理时间的延长，其冻后存活率逐渐提
高，与CK相比，处理90d的材料玻璃化超低温保
存后茎尖存活率提高了60．8％。
对于玻璃化超低温保存材料，化冻后的洗涤被
认为很重要，这一过程不仅可除去高含量玻璃化保
护剂对细胞的毒性，而且也是一个后过渡，以防渗透
损伤，影响材料恢复和继续生长，因此需要除去玻璃
化保护剂。陈勇等[93发现，用含1．2mol／L山梨醇的
MS培养基对胡萝b悬浮培养细胞和原生质体进行
洗涤能减轻细胞的复水损伤，提高其存活率。本实验
也表明，怀山药茎段经玻璃化超低温保存后，用
MS+7％蔗糖的培养液洗涤4次，每次洗涤10
min，存活率显著提高，达75％～77％。这是因为蔗
糖质量分数过低、洗涤时间过短或不洗涤，容易导致
玻璃化保护剂对怀山药茎段细胞的伤害，而蔗糖质
量分数过高或洗涤时间过长，则容易损伤细胞，这可
能与质壁分离和溶质平衡失调有关。但在某些材料
研究中发现，玻璃化超低温保存后的材料不经洗涤
直接转入再生培养基，数天后即可恢复生长，洗涤反
而有害‘10]。可见，在玻璃化超低温保存中，洗涤与否
以及洗涤液的质量分数和洗涤时间的长短必须依保
存材料的种类和特性而定。
本试验为怀山药玻璃化法超低温保存提供了一
个较佳的技术体系，不仅保持了较高的成活率，而且
设备简单、操作简便、节省空间和遗传变异机率极
小，是怀山药种质资源离体保存的一条有效途径。
References：
r1]NieGH．Advancesofr searchofDioscoreappositaThunb．
[J3．ChinTraditHerbDrugs(中草药)，1993，24(3)：158—
160．
E2]LiuYG，WangXY．Studyofcyropreservationtechniqueof
applegermplasmbyvitrification[J]．．，ShandongAgric
Univ：NatSci(山东农业大学学报：自然科学版)，2002，33
(1)：32—36．
[3]HiraiD，SakaiA．Cryopreservationofshootpsfrominvit—
roplantsofsweetpotato[Ipomoeabotatas(L．)Lam．]by
vitrification口]．PlantCellReports，2003，19(7)：733—737．
[4]ShibliRA，MogesAD，KaramNS． cryopreservationof
Africaviolet(Saintp uliaIonanthawendl．)shoottips[J]．
jnVitroCeUDevBiolPlant，2004，40(4)：389—395．
[5]LeunufinaS，KellerERJ．Investigatinganewcryopreser—
vationprotocolforyams(Dioscoreaspp．)[J]．PlantCe lRe-
ports，2003，21(12)：1159—1166．
[6]LiMJ，HongsR，XuX，ela1．cryopreservationtechnique
ofDioscoreappositaThunb．germplasmresourcesbyvitrifi—
cationI-J]．ActagronomicaSin(作物学报)，2006，32(2)：
288—292．
[7]ZhouXM，WangGY，AoGM，eta1．Cryopreservationof
maizeimmatureembryos，embryogeniccallusandcellSUS—
pensionculturesbyvitrification[J]．JAgricBiotechnol(农
业生物技术学报)，2001，9(4)：355—358．
[8]ZhaoYH，WuYJ，ZhouMD．Cryopreservationofinvi ro
culturedshoottipsofPrunusmahaleb[J]．ActaHorticSin
(园艺学报)，1999，26(6)：402—403．
[9]ChenY，WangJH，HuangCN．cryopreservationbyvitrifi—
cationofcarrot(DaucuscarotaL．)suspensioncellsandpro—
toplasts[J]．JZhejiangUniv：SciEd(浙江大学学报：理学
版)，2002，29(1)：94—98．
Do]ZhengJw，YiGJ，ZhangQM，ela1．Advancesinre—
searchofinvitroconservationoffruitgermplasm[J]．J
FruitSci(果树学报)，2002，19(5)：302—306．
万方数据
玻璃化法超低温保存怀山药种质的技术研究
作者： 洪森荣， 李明军， HONG Sen-rong， LI Ming-jun
作者单位： 洪森荣,HONG Sen-rong(河南师范大学生命科学学院,河南,新乡,453007;上饶师范学院,生命
科学系,江西,上饶,334001)， 李明军,LI Ming-jun(河南师范大学生命科学学院,河南,新乡
,453007;华中农业大学,园艺植物生物学教育部重点实验室,湖北,武汉,430070)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(11)
被引用次数： 3次

参考文献(10条)
1.Nie G H Advances of research of Dioscorea opposita Thunb 1993(03)
2.Liu Y G;Wang X Y Study of cyropreservation technique of apple germplasm by vitrification[期刊论文]
-山东农业大学学报(自然科学版) 2002(01)
3.Hirai D;Sakai A Cryopreservation of shoot tips from in vitro plants of sweet potato[Ipomoea
botatas (L.) Lam.] by vitrification[外文期刊] 2003(07)
4.Shibli R A;Moges A D;Karam N S Cryopreservation of Africa violet (Sain tpaulia Ionantha wendl.)
shoot tips[外文期刊] 2004(04)
5.Leunufina S;Keller E R J Investigating a new cryopreservation protocol for yams (Dioscorea spp.)
[外文期刊] 2003(12)
6.Li M J;Hongs R;Xu X Cryopreservation technique of Dioscorea opposita Thunb.germplasm resources by
vitrification[期刊论文]-作物学报 2006(02)
7.Zhou X M;Wang G Y;Ao G M Cryopreservation of maize immature embryos,embryogenic callus and cell
suspension cultures by vitrification[期刊论文]-农业生物技术学报 2001(04)
8.Zhao Y H;Wu Y J;Zhou M D Cryopreservation of in vitro cultured shoot tips of Prunus mahaleb[期刊论
文]-园艺学报 1999(06)
9.Chen Y;Wang J H;Huang C N Cryopreservation by vitrification of carrot (Daucus carota L.)
suspension cells and protoplasts[期刊论文]-浙江大学学报(理学版) 2002(01)
10.Zheng J W;Yi G J;Zhang Q M Advances in research of in vitro conservation of fruit germplasm[期刊
论文]-果树学报 2002(05)

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1. 艾鹏飞.卢利平.AI Peng-Fei.LU Li-ping 桔梗试管苗茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生[期刊论文]-中草药
2006,37(9)
2. 李海兵.周娜.赵姣.李翔.冯秋妍.赵喜亭.李明军.Haibing Li.Na Zhou.Jiao Zhao.Xiang Li.Qiuyan Feng.
Xiting Zhao.Mingjun Li 怀山药种质资源的包埋玻璃化超低温保存与植株再生[期刊论文]-植物学报2010,45(3)
3. 席世丽.冯斗.潘玲华.XI Shi-li.FENG Dou.PAN Ling-hua 木薯花药愈伤组织诱导初步研究[期刊论文]-广西农
业科学2009,40(2)
4. 李明军.洪森荣.徐鑫.张晓丽.刘欣英.柳俊.谢从华.LI Ming-Jun.HONG Sen-Rong.XU Xin.ZHANG Xiao-Li.LIU
Xin-Ying.LIU Jun.XIE Cong-Hua 怀山药种质资源的玻璃化法超低温保存[期刊论文]-作物学报2006,32(2)
5. 洪森荣 山药种质资源离体保存技术的研究[学位论文]2005
6. 王玉萍.张峰.王蒂 马铃薯花粉的超低温保存研究[期刊论文]-园艺学报2003,30(6)
7. 陈志林.陆柳英.李开绵 木薯茎尖包埋—玻璃化法超低温保存及植株再生[期刊论文]-广西热带农业2007(4)
8. 陈明霞.郭君丽.李明军.刘萍 怀山药脱分化过程中的生理生化变化的研究[期刊论文]-河南师范大学学报(自然
科学版)2003,31(1)
9. 陈明霞.李明军.郭君丽.张峰.张嘉宝 怀山药叶片脱分化过程中细胞早期变化的研究[期刊论文]-吉林农业大学
学报2003,25(5)
10. 郭君丽.李明军.张嘉宝 光质和NAA组合对怀山药叶片脱分化的效应[期刊论文]-浙江万里学院学报2002,15(1)

引证文献(3条)
1.洪森荣.尹明华.邵兴华 野葛种质的超低温保存研究[期刊论文]-江西农业大学学报 2007(4)
2.刘华英.覃灵华 罗汉果试管苗茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生[期刊论文]-中草药 2009(2)
3.覃灵华.刘华英 玻璃化法超低温保存植物种质资源及其研究进展[期刊论文]-作物杂志 2008(3)


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