全 文 :中草喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月·921-
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连翘果实干物质与有效成分积累规律研究
李卫建。2,李先恩”
(1,中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所,北京100094;2.农业鄢环境保护科研监测所.天津300191)
摘要:目的研究不同生长期连翘果实干物质及叶和果实中有效成分的积累规律。方法采用百果质量研究果
实干物质的积累,HPLC法测定连翘叶与果实中有效成分的量。结果5~7月是连翘果实干物质积累的重要时期。
在整个生长过程中,种子、叶和壳中连翘酯昔、连翘昔、芦丁的量均呈下降趋势。8月下甸至9月上甸,果实干物质积
累已趋缓,种子和壳中有效成分的量稳定,变异小。壳中有效成分的量经9~10月的快速下降后,lo月20日左右质
量分数趋于稳定且达最低。青翘中有效成分的量高于老翘,青翘中连翘酯苷、连翘苷与芦丁的比例与老翘存在显著
差异。结论在北京地区,8月下旬至9月上旬,为青翘最佳采收期;10月20日左右为老翘的最佳采收期。
关键词:连翘;干物质;连翘酯苷}连翘苷;芦丁
中圈分类号:R2^12 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2006)06092I一 4
Regulationofdrysubstancedactivecomponentsaccumulation
infruitofForsythiasuspensa
LIWet—jianl”.LIXian—enl
(InstituteofMedicinalPl nttChineseAcademyofMedicalScienesandPekingUnionMedicalCo lege,Beijing100094,
China;2.EnvironmentMonitorInstitute,MinistryofAgriculture.Tianjin300191.China)
Abstract:ObjectiveTostudythregulationofdrysubstancedactivecomponentsaccumulationin
thefruitofForsythiasuspensa.MethodsThedrysubstanceofthfruitwasanalyzedbythemethodof
hundredgrainmass.Thecontentsof heactivecomponentsinleaves,shucks,andseedswereanalyzedby
HPI。C.ResultsTheperiodforF.suspensatoaccumulatethedrysubstancewasmainlyMayandJuly.
Duringthewholegrowthphase,theactivecomponents,suchasforsythiaside,forsythin,andrutindif—
ferentparts,wered creasing.Fromthelastten—dayofAugusttothefirsttendayofSeptember.theaccu—
mulationofthedrysubstancecamtostabilityandthecontentsofactivecomponentsinshucksandseed
werestable-Thecont ntsofactivecomponentsinshucksdecreasedrapidlyfromSeptembertOOctober,
andthencametostabilityandthecontentsi shucksistheleastduringthelastten—dayofOctober.Sothe
contentsofactivecomponentsinyoungerF.suspensaarehigherthanthatinelderone,andtheproportion
amongforsythiaside,forsythins,andlutionisalsosignificantlydifferentfromelderseeds.ConclusionIt
ismorepreferabletopickyoungerF.suspensafromthelasten—dayofAugustto hefirstten—dayof
SeptemberandtopickelderF.suspensaduringlastendayofOctober.
Keywords:Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl;drysubstance‘forsythiaside;forsythin;rutin
连翘为木犀科植物连翘Forsythiasuspensa
(Thunb.)Vahl的干燥果实,具有清热解毒、消肿散
结之功效。连翘药材来源以野生资源为主,产区“采
青”时间过长,采收期混乱,是造成连翘品质差异的
收稿Et期:2005一1020
尊翥蒙菲筝焉鬟譬8。ii:器i晋菱薯嚣☆’现E主-m要ail从:x事ian药en用li植@s物in质a,量co控rn制和农产品质量安全研究。
万方数据
中草菊ChineseTraditionala dHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月
一个重要原因。本实验研究连翘在整个生长周期中,
连翘果实干物质、叶与果实中有效成分的积累规律,
为确定连翘合理采收期提供理论依据,将有助于连
翘及其制剂的质量控制。
1材料与方法
1.1材料:选中国医学科学院药用植物研究所植物
园种植的连翘为样株,从2004年4月2日至10月
20日,每隔20d左右采样一次,采收的部位为连翘
的叶、果实(表1)。随机选取100颗果实,分开种子
与壳,自然晾干后,称质量,重复3次。将干燥至恒重
的叶、种子和壳研成粉末,过40目筛,备用。
表1不同生长期样品采集情况
Table1 Samplecollectedinvariousgrowthtimes
编号 日期 材料 编号 日期 材料
csq1 0402 叶 csq7 07—06 叶果实
csq2 0409 叶 csq一8 07—25 叶果实
csq一3 04—20 叶 csq9 0818叶果实
csq4 0504 叶果宴 csql009—10 叶果实
csq5 05—25 叶果实 CSt[一儿 10-07叶果实
csq一6 0615 叶果宴 csql210-z0叶果实
连翘酯苷对照品由实验室自制,质量分数
96%;连翘苷、芦丁对照品购自中国药品生物制品检
验所,质量分数分别为98%、99%。
1.2仪器:Waters600高压液相色谱仪,Waters
2487紫外检测器,Empower色谱工作站。
1.3方法:连翘有效成分测定参考张文婷HPLC
指纹图谱法“]。
1.3.1色谱色件:色谱柱ZorbaxSB—C18柱(5“m,
250mmx4.6ram);流动相:A一1%醋酸溶液,B一甲
醇;B相洗脱梯度:0~25min,32%~36%;25~43
min,36%~41%;43~66rain,41%;60~65rain,
41%~32%;体积流量:1mL/min;紫外检测波长:
280nm。
1.3.2对照品溶液的制备:精密称取连翘苷、连翘酯
苷、芦丁对照品5.04、9.95、5.02mg置于10mL量瓶
中,用甲醇定容至刻度,置于冰箱中(4℃)保存备用。
1.3.3供试品溶液的制备:精密称取叶、种子或壳
的干燥粉末约1.000g置于具塞三角瓶中,精确加
入甲醇40mL。精密称质量,超声提取30mln后,用
甲醇补足质量,滤过,吸取上清液3mL于具塞试管
中,加2mL双蒸水,混匀,滤膜滤过,滤液作为各样
品供试液。
1.3.4标准曲线:对照品标准曲线的回归方程见表2。
2结果与分析
2.1连翘果实中干物质的积累动态:由图1可以看
出,5~7月,每百颗果实(壳)干质量由2.213g增加
至7.896g,增长了约2.6倍;种子干质量由0.645g
升至3.108g,增加了约3.8倍。7月后,壳和种子干
物质的积累减缓。7~10月,壳干质量由7.896g升
至8.345g,种子干质量由3.108g升至3.536g。因
此,5~7月是连翘果实干物质积累的重要时期。8月
底至9月初为青翘的采收期,10月中下旬为老翘采
收期,因此,青翘采收对连翘的总产量影响不大。
袭2对照品标准曲线回归方程
Table2 Regressiveequationofcalibrationcurve
ofreferencesubstance
魁
嚣
卜
圈1果实干物质积累动态
Fig.IAccumulationofdrysubstance
2.2不同部位有效成分积累动态研究:图2是不同
部位中连翘酯苷的量积累动态过程,可知5~7月种
子、叶和壳中连翘酯苷的量均呈不断下降的趋势。
7~9月,种子中连翘酯苷的量保持在1l%左右,叶
和壳中连翘酯苷的量稍有回升,但变化不大。9~10
月,壳中连翘酯苷的量急剧下降,由9.317%~
0.594%,下降了93.6%,种子中连翘酯苷的量由
10.999%降为5.745%,减少了l/2,叶中连翘酯苷
的量变化较小,保持在9.521%左右。10月中下旬,
种子、叶和壳中连翘酯苷的量趋于稳定,变化较小。
在整个生长期,连翘酯苷的量为种子>壳>叶。
图3是不同部位中连翘苷的量积累动态过程,
从图3可以看出,在整个生长过程中,叶中连翘苷的
量一直远高于种子和壳,4月9日,叶中连翘苷的量
最高为5.229%,其后开始下降,7月6日质量分数
达最低为1.308%,7月至8月质量分数略有回升后
继续下降,10月果实成熟期,量为1,372%。种子中
连翘苷的量最低,5月4日的量最高为1.094%,随
后种子中连翘苷的量呈不断下降趋势,10月20只
万方数据
中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月·923·
量达最低为0.039%。壳中连翘苷的量介于种子和
壳之间,5月4日量最高为2.162%,随后种子中连
翘苷的量呈不断下降趋势,10月20日量达最低为
0.089%。在整个生长过程中,种子、叶和壳中连翘苷
的量均呈下降趋势。
图4是不同部位芦丁积累动态过程,从图4可
以看出,7~10月,种子和叶中芦丁的量均较稳定,
变异小于10%。7~9月,壳中芦丁的量较稳定;9~
10月,果实成熟,壳逐渐黄化,壳中芦丁的量急剧下
降,由0.907%降为0.036%;10月中旬,壳中芦丁
的量趋于稳定,质量分数达最低0.035%。
图2不同部位中建翘酯苷的动态变化
圈3不同部位中连翘苷的动态变化
Fig.3Accumulationofforsythinind fferentpar s
LJ期
围4不同部位中芦丁的动态变化
Fig.4Accumulationofrutindifferentpar s
2.3同一部位不同有效成分的比例动态变化比较:
以各时期连翘酯苷的量为1,连翘苷、芦丁的相对于
连翘酯苷的比例作图,图5是种子中各有效成分比
例的动态变化,图6是壳中各有效成分间比例的动
态变化,图7是叶中有效成分比例的动态变化。从图
5~7可以看出,在整个生长过程中,种子、叶和壳中
连翘酯苷在3种有效成分中一直处于最高比例。比
较种子、叶和壳中连翘苷、芦丁的比例,壳介于种子
和叶之间,连翘苷和芦丁的比例种子中最低,叶最
高。8月20日至9月10日青翘采收期,种子中连翘
酯苷、连翘苷与芦丁比为1:0.012:0.011,呈“\,,
型分布;连翘苷和芦丁的比例达最低;壳中连翘酯
苷、连翘苷与芦丁比为1;0.063t 0.103,呈“V”型
分布;叶中连翘酯苷、连翘苷与芦丁为l:0.240:
0.206,呈“V型分布。10月20日左右老翘采收期,
壳中连翘酯苷、连翘苷与芦丁比为1:0.168:0.
066,呈“\,,型分布;种子中连翘酯苷、连翘苷与芦丁
比为1:0.008:0.033,呈“v”型分布;叶中连翘酯
苷、连翘苷与芦丁比为l;0.124:0.189,呈“V”型
分布。比较青翘采收期与老翘采收期连翘酯苷、连翘
苷、芦丁的比例关系,种子、叶和壳中3者的分布存
在明显的差异。
2
l o
08
萝06山
04
n2
o
日期
图S种子中各有效成分比例的动态变化
Fig.5Proportionofactivecomponentsinseeds
摇
妻蒌
0.02吼㈨
05-045—2506一1507_06H期07-25⋯8⋯O10-0710-20
U刑
围7叶中各有效成分比例的动态变化
Fig.7Proportionofactivecomponentsjnleaves
3讨论
3.1连翘为多年生灌木,3月气温回升,先叶开花,
5~9d花渐凋落,20d左右4月中旬幼果出现,叶
蒂形成;5月气温增高,展叶抽新枝,为来年的开花
结果准备;9~10月果实成熟,果壳开裂,种子脱落。
连翘酯苷与木质素具有共同的前体化合物[2],5~7
月连翘植株大量抽展新枝,大量合成木质素类物质,
从而影响了连翘酯苷的合成和积累,连翘酯苷的景
下降。9~10月,果实逐渐成熟,果壳黄化细胞死亡,
万方数据
·924· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月
影响了种子和壳中有效成分的合成和转运,种子和
壳中连翘酯苷、连翘苷和芦丁的量急剧下降;而叶仍
能正常生长,叶中有效成分变化较小。
3.2连翘分青翘和老翘(黄翘),青翘和老翘因采收
时间和加工方法不同而成。秋季果实初熟尚带绿色
时采收,除去杂质,蒸熟,晒干,习称“青翘”;果实熟
透时采收,晒干,除去杂质,习称“老翘”。连翘产区
“采青”时间过长,采收期混乱,造成连翘品质差异较
大,质量不稳定,严重影响了连翘及以连翘为原料的
制剂的进一步开发和利用。本实验研究表明,8月下
旬至9月上旬,果实的干物质趋于稳定,种子和壳中
连翘酯苷的量接近,且种子和壳中连翘酯苷、连翘苷
和芦丁的量较稳定,波动小,此时采收青翘质量较稳
定,有利于青翘的质量控制,且不会影响连翘的总产
量。壳中连翘酯苷、连翘苷、芦丁的量经9~10月质
量分数快速下降后,10月20日左右有效成分的量
趋于稳定并达最低,果实黄化并开裂,种子脱落,此
时采收老翘品质较好,且有助于老翘的质量控制。
3.3青翘为连翘的整个果实,包含种子和壳,老翘
为种子脱落后的果壳,研究表明,青翘中连翘酯苷的
量约是老翘的20倍,连翘苷的量是老翘的4倍,芦
丁的量是老翘的3倍;且青翘中连翘酯苷、连翘苷和
芦丁的相对质量分数连翘酯苷>连翘苷>芦丁,而
老翘中连翘酯苷>芦丁>连翘苷,青翘和老翘有效
成分问的比例差异较大。药材中不同有效成分之间
的量及其比例是药材药效好坏的决定因子,因此青
翘和老翘应该进行区别使用,传统中医一般以老翘
人药。文献报道,就抗菌效价而言青翘优于老翘,关
于青翘与老翘的药效差异,有待于进一步研究。
3.4叶中有效成分的种类与种子和壳相似;叶中连
翘酯苷的量低于种子和壳,连翘苷和芦丁的量高于
种子和壳,且在整个生长过程中,变化较小。叶是否
可替代果实入药,有待进一步研究。
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黄芩愈伤组织培养及黄芩苷合成调控的研究
王梦亮1,任振兴2,黄登宁2,刘滇生1
(1.山西大学现代化学研究所,山西太原030006}2.山西大学生命科学与技术学院,山西太原030006)
摘 要:目的 研究黄芩愈伤组织培养和黄芩苷台成调控的规律。方法 采用植物细胞培养技术诱导愈伤组织;
HPLC法测定黄芩苷的量。结果黄芩愈伤组织生长和黄芩苷积累的优势培养条件为:在基本培养基MS中氨源
浓度为60mmol/L(NH‘+;N03为1:1),KH2P04浓度0.5~1.5mmol/L,附加80g/L蔗糖.0.3mg/LIAA,2
mg/L6BA和200mg/L蛋白胨,温度:(25士1)℃.暗培养。培养40d后收获愈伤组织.生物量达28.7g/L,黄芩
苷为167.4mg/g,明显高于野生黄芩的最高量。结论黄芩愈伤组织的生长和黄芩苷的积累并不同步,而是先生长
后台成。蔗糖对黄芩苷的合成具有明显的调节作用,在蔗糖质量浓度小于3%时,能有效促进愈伤组织的生长,但对
黄芩苷的合成没有刺激作用;当蔗糖质量浓度在3%--8%时,愈伤组织表现出明显的生长和次生代谢功能,黄芩愈
伤组织的生长及黄芩苷合成明显增加;当蔗糖质量浓度在8%时.两者均达到最大值。
关键词:黄芩;黄芩苷;愈伤组织培养}HPLC
中图分类号:R282.6 文献标识码;A 文章编号:0253—2670(2006)06092405
RegulationofcalluscultureandbaicalinsynthesisinScutellariab ic lensis
WANGMeng—lian91,RENZhen—xin92,HUANGDeng—yu2,LIUDianshen91
(1.InstituteofModernChemistry+ShanxiUnivers ty,Taiyuan030006,China;2.InstituteofLifeScience
andTechnology,ShanxiUnivers ty,Taiyuan030006,China)
Abstract:ObjectiveTostudythruleofcalluscultureandbaicalinsynthesisinScutellariab ic len一
鉴量品智:笛蔷吾譬姿项目。。。,。。。。,
作者筒介。圭蕹亨u鬻I盘暑;毙黑焉产金:盘罾盎盖翌慧羔麓耋要掣所长’硕士生导师,从事中草药的研究开发、生物化工等的科研
万方数据
连翘果实干物质与有效成分积累规律研究
作者: 李卫建, 李先恩, LI Wei-jian, LI Xian-en
作者单位: 李卫建,LI Wei-jian(中国医学科学院,中国协和医科大学药用植物研究所,北京,100094;农
业部环境保护科研监测所,天津,300191), 李先恩,LI Xian-en(中国医学科学院,中国协和
医科大学药用植物研究所,北京,100094)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2006,37(6)
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