全 文 ：·432· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月
3讨论
植物组织培养中常用的培养基主要区别在于无
机盐的种类和量。MS培养基无机盐量较高，微量元
素种类较全，质量浓度也较高，尤其是氮源质量浓度
较高，可以满足植物细胞的营养要求，广泛应用于植
物细胞、组织和原生质体培养，效果良好。LS培养基
是在MS培养基基础上演变而来的。Bs培养基主要
特点是铵的质量浓度较低，适用于双子叶植物特别是
木本植物的组织培养、细胞培养。SH培养基是矿质
盐质量浓度较高的培养基，其中铵和磷酸由
NH。H。PO。提供。white培养基无机盐较低，适用于
生根培养基[6]。本实验选用上述5种培养基悬浮培养
丹参不定根，结果表明MS培养基最利于丹参不定根
生长，SH培养基最利于次生代谢物合成，可能是该培
养基高质量浓度的矿质盐更能满足次生代谢物合成。
不同的盐强度改变培养物的离子强度和渗透
压。研究发现，渗透压改变导致细胞容积改变，从而
激活细胞膜上的离子通道，进而影响细胞增殖口]。本
实验通过改变培养基中无机盐强度调节培养基的渗
透压，以考察渗透压对丹参不定根生长和有效成分
量的影响，结果表明3／2MS培养基最适于不定根生
长，而低盐强度促进次生代谢物合成。
植物体在自然条件下，有机物成分是依靠自身
的代谢加以调节的，而培养的离体组织、细胞以及原
生质体虽能合成必需的维生素，但是数量上远远不
足。为了能使组织很好地生长，在培养基中必需补加
一种或几种维生素或氨基酸。一般认为VB。是一种
必需的成分[8]。本研究表明，不添加甘氨酸时，不定
根生长率低于对照组，说明甘氨酸在促进不定根生
长中起一定作用，但未能明显看出VB。的必需作
用。通过HPLC法i财定丹参酮IA和原儿茶醛，发现
甘氨酸能促进丹参酮IA的合成，培养基中缺少烟
酸明显促进原儿茶醛的合成，缺少肌醇显著抑制原
儿茶醛合成。
植物组织培养中，除了注意选择合适的有机物
类型外，有机物质量浓度也是值得注意的问题。笔者
将在以后的研究中重点探讨不同有机物质量浓度对
丹参不定根生长和有效成分量的影响，从而筛选最
佳的有机物类型及其质量浓度。
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半夏工厂化育苗技术体系研究初探
张晓伟1，王小峰1，周昌华2，张兴翠p
(1．西南大学农学与生命科学学院，重庆400716，2．西南大学科技处，重庆400716)
摘要：目的建立一套半夏工厂化育苗体系，实现半夏的快速繁殖，解决半夏生产因用种而造成的退化问题。方
法 探讨了外植体诱导、植物生长调节物质质量浓度、光照条件及继代周期对丛生芽增殖的影响。结果 外植体的
诱导以MS+6一BA(4～5)mg／L+NAA0．2mg／L培养基为宜。组织培养中生长调节物质质量浓度为NAA0．2
rag／L+6一BA2mg／L、转接时组织块带两个或两个以上芽时，半夏生长状况最好。结论采用工厂化育苗技术可进
行半夏的快速繁殖，为保护和持续利用这一重要药材资源提供有效途径。
收稿日期：2006—05—10
基金项目：重庆市科技计划项目(8024)
作者简介：张晓伟(1980一)，男，山西省晋城人，西南大学硕士研究生，研究方向为药用植物规范化生产．Telll3996269054
E—mail：zxw2004203@163．corn
*通讯作者张兴翠Tel：13637999712E—mail：zch001@swau．cq．cn
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月·433·
关键词：半夏，组织培养，T厂化育苗体系
中图分类号：R282．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)03—0432一04
PreliminaryresearchonindustrializedbreedingtechnologysystemofPinelliaternata
ZHANGXiao—weil，WANGXiao—fen91，ZHOUChang—hua2，ZHANGXing—cuil
(1．CollegeofAgronomyandLifeScience，SouthwestUniversity，Chongqing400716，China；2．Department
ofScienceandTechnology，SouthwestUniversity，Chongqing400716，China)
Abstract：ObjectiveIndustrializedbreedingtechnologysystemwillbeestablishedtoachieveth
rapidmultiplicationofPinelliaternatandtosettletheproblemofdegenerationcausedbyseeds．Methods
Explanti ductionandeffectsofplantgrowthregulatordosage，illumination，andsubculturecyclon
faseiculatedshootpropagationwerestudied．ResultsItisgoodforthe xplanti ductiononmedium
MS+6一BA(4—5)mg／L+NAAO．2mg／L．P．ternatagrowsellunderthecircumstanceofNAA
0．2mg／L+6一BA2mg／L，doubleormoreshoots．ConclusionIndustrializedbreedingtechnologysystem
ofP．ternatacanmakeitspropagationrapida dsupportaneffectivewayfor esourcespr ervingand
sustainableutilization．
Keywords：Pinelliat rnata(Thunb．)Breit．；tissuecul ure，industrializedbreedingsystem
半夏为天南星科多年生草本植物，历版《中国药
典》收载的半夏Pinelliaternata(Thunb．)Breit．以
干燥块茎入药，性温、味辛、有毒，是一种重要的中药
材。由于受生态变化及人为因素影响，其野生资源日
益减少。不能满足用药需求。人工栽培半夏用种量
大，需种用块茎高达1500kg／hm2[妇；产量低且极不
稳定，加之生产退化等问题均限制了半夏人工栽培
的发展，使半夏的供应长期处于紧缺状态。因此，对
半夏工厂化育苗技术体系的研究有着积极的意义。
近年来，半夏组织培养研究方面已有一些报道，
这些报道大多是理论方面的成果。如任家惠等[21以
叶片和叶柄为外植体获得再生植株，朱鹏飞等r33以
珠芽和块茎为外植体诱导出再生植株，韩献忠等[‘3
研究出了一次性成苗的方法，朱忠荣等[5]提出了半
夏组培育苗的可行性，但对试管苗移栽后的情况未
作报道。本实验对应用组织培养技术进行工厂化育
苗实践和种苗移栽后的生长发育情况进行了探讨。
1材料与方法
1．1实验材料：供试材料为重庆市中药研究院张明
老师采集到的天南星科半夏属半夏块茎。
1．2方法
1．2．1外植体诱导：取块茎洗净后先用75％乙醇
及0．1％升汞顺序消毒及用无菌水冲洗后，在无菌
条件下将块茎切成长0．5～1．0cm的立方体切块作
外植体用，基本培养基为MS培养基，含蔗糖3％，
卡拉胶0．46％，pH5．8～6．2。把切块接入不同生长
调节物质组合的培养基。采用完全随机设计(表1)，
共30种处理，每处理3瓶。在温度为(25±1)℃，每
天12h光照，光照强度约为1500lX的条件下进行
培养(培养条件下同)。
表1植物生长调节物质种类、比例及处理
Table1 Varietiesandproportionsofplant
growthregulatorsandtheirdisposal
NAA／(mg．L_1) !：坠!竺：兰二：1
1．0 3．0 4．0 5．0 7．0 10．0
0 (1) (2) (3) (4)． (5) (6)
0．2 (7) (8) (9) (10)(11)(12)
’0．5 (13)(14)(15)(16)(17)(18)
1．0 (19)(20)(21)(22 (23)(24)
2．0(25)(26)(27)(28 (29)(30)
1．2．2植物生长调节物质对半夏丛生芽增殖的影
响：将半夏组织块接人不同生长调节物质组合的培
养基中培养，共12种处理，每种处理3瓶，每瓶接半
夏组织块6个，每个组织块带3个芽。培养两周。
1．2．3光照条件对半夏丛生芽增殖的影响：用培养
基(8)转接半夏分别置于强光、半萌、遮光3种不同
的环境中，每种处理10瓶，每瓶接半夏组织块6个，
每个组织块带3个芽。组培室培养两周，统计芽增
殖，并观察其生长状况。 ．
1．2．4组织块大小对半夏丛生芽增殖的影响：用培
养基(8)接种3种不同大小的组织块，即组织块带单
个芽、双芽和3个芽，每种处理3瓶，每瓶接组织块
6个。组培室光照下培养两周。
1．2．5继代周期对半夏丛生芽增殖的影响：用培养
基(8)培养半夏组织块，每个组织块带3个芽，分别
万方数据
·434· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月
培养2、3、4周后转接，观察其生长情况和增殖倍数。
1．2．6过渡移栽：当试管苗高达3～5cm，长出发
达根系时，打开瓶塞，炼苗2～3d后取出试管苗，洗
去根部培养基后准备移栽。
在温度15-一20℃温室中将试管苗移到装有锯
末和砂的塑料网筛中，保持土壤湿润，栽后观察其成
活及生长情况。
2结果与分析
2．1外植体的诱导：两周后观察半夏组织的诱导情
况发现，各种培养基中的半夏组织块均能诱导产生
愈伤组织，但愈伤组织的质地各不相同，大多为不规
则的松散型，少数为表面光滑的致密型。其中培养基
(9)MS+6一BA4mg／L+NAA0．2mg／L和培养基
(10)MS+6-BA5mg／L+NAA0．2mg／L诱导效果
最好。培养大约一个月后愈伤组织表面产生淡绿色
球状体，继续培养球状体上方会生出绿色丛芽。
2．2’植物生长调节物质不同质量浓度对半夏丛生
芽的增殖的影响：比较12种NAA+6-BA配比对半
夏组织块芽增殖个数的影响(表2)，结果发现总体
趋势是附加低质量浓度植物生长调节物质的培养基
中半夏芽健壮，数量少，易分辨；高质量浓度下形成
的愈伤组织块较大，多为丛生芽，芽多但不健壮，难
以分辨。
裘2植物生长调节物质不同质量浓度对半夏丛
生芽增殖的影响
Table2 Effectofvariousplantgrowthregulatordosageon
propagationoffasciculatedshootsofP．ternata
表3的方差分析结果表明，不同的培养基之间，
半夏组织块芽增殖数在1％水平下，达极显著差异，
对数据进行多重比较可知，处理(16)与(8)，(7)与
(4)，(31)、(35)与(32)、(33)之间无显著差异，其余
处理间均存在显著差异。其中处理(22)、(8)、(28)、
(7)、(35)、(34)间的差异达到了极显著水平。试验中
处理(8)、(16)和(22)半夏长势相对较好，但处理(8)
激素用量少，结合成本考虑宜选用此培养基。即较适
宜的植物生长调节物质质量浓度为NAA
0．2mg／L+6一BA2mg／L。
2．3光照条件对半夏丛生芽增殖的影响：对3种光
照处理半夏组织芽增殖数(表4)数据进行方差分析
和多重比较(表5)可以看出，组织块的芽增殖数有
显著差异，且强光与遮光条件下芽的增殖数差异达
显著水平。在强光和半荫条件下，半夏芽多且比较健
壮，长势好。而遮光不利于半夏的生长，芽多丛生，不
易分辨，叶片长势弱。由于缺乏光照，芽和愈伤组织
白化，芽尖普遍枯死。
表3方差分析表
Table3 Analysisofvariance
Fo．05(11，24)；2．22，Fo．01(11，24)=3．09
表4不同光照条件对半夏丛生芽增殖的影响
Table4 Effectofvariousilluminationsonpropagation
offasciculatedshootsofP．ternota
变异来源 平方和 自由度 均方 F值 显著水平
Fo．05(Z，27)=3．35’Fo．01(Z，27)=5．49
2．4组织块大小对半夏丛生芽增殖的影响：不同大
小组织块接种的芽增殖数和叶长情况及方差分析结
果见表6～9，两种接种方式芽增殖数和叶片长度的
方差分析结果表明，组织块大小不同对芽增殖数和
叶片长度有着显著影响。对统计数据分别作多重比
较可知(表7，表9)，带3个芽的组织块在芽增殖数
方面与双芽和单芽都存在显著的差异，其中3个芽
与单芽之间的差异达到了极显著水平。但单芽的叶
长显著长于3个芽和双芽。总体上，3个芽、双芽组
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第3期2007年3月·435·
织块的长势比单芽好。综合考虑，转接时组织块大小
应选带两个或两个以上芽。
衰6不同大小组织块接种对芽增殖的影响
Table6 Effectofinoculabtingwithvariousblock
oftissueonproliferationofbuds
变异来源 平方和 自由度 均方 F值 显著水平
F0．05(2，6)=5．14，Fo．01(2，6)=10．92
表8不同大小组织块接种对半夏叶长的影响
Table8 Effectofinoculabtingwithvariousblock
oftissueonP·ternataleaveslength
銮墨圭望 兰查塑 宴虫室 望查 墨堕 星茎查!
处理间0．86 2 0．43 7．92 。P<0．05
处理内0．33， 6 0．05
璺錾墨 !：!! !
Fo．05(2，6)=5．14，Fo．Ol(2，6)一10·92
2．5继代周期对半夏丛生芽增殖的影响：用MS+
6-BA3mg／L+NAA0．2mg／L培养基培养半夏组
织块，每个组织块带3个芽，分别培养2、3、4周后转
接，观察其生长情况和增殖倍数。观察3种不同继代
周期半夏小块茎的增殖倍数可知，半夏小块茎在3
周内继代增殖倍数高，生长旺盛。3周以后继代半夏
生长缓慢且增殖倍数低。
2．6过渡移栽及温(网)室栽培：温(网)室中移栽的
半夏组培苗成活率在95％以上，生长旺盛，植株高
大。移栽的组培苗当年即可收获，但所结块茎比较
小，整体商品率不高。试验中发现在适度遮荫的条件
下，无菌组织培养苗第l、2年的4～10月间均未见
倒苗，只是在每年的8月中、下旬出现新老叶交替现
象，但在第3年4月出苗，5月初就全部倒苗。，收获
的无菌珠芽还可作大田栽培用种。用组培苗作种能
否解决倒苗问题还需作进一步探讨。
3结论与讨论
3．1 本研究初步建立起工厂化育苗体系：块茎外植
体一愈伤诱导一球状体一丛芽增殖一试管壮苗一炼
苗、温室移栽。运用这一技术体系生产半夏种苗具有
生产周期短，繁殖系数高，种苗不带菌等优点，同时
组培苗还可以延迟倒苗时间，延长有效生育期，提高
产量。
3．2在半夏工厂化育苗过程中，以块茎为外植体诱
导出愈伤组织同时分化出丛生芽，以MS+6-BA
(4～5)mg／L+NAA0．2mg／L培养基诱导效果为
好。在丛芽增殖过程中，附加NAA0．2mg／L、6一BA
2mg／L的MS培养基最好，将丛生芽分割转入该培
养基中进行继代培养，以带两个或两个以上芽的组
织块为宜。理想的继代周期为两周左右，时间过短或
过长，继代增殖的倍数都达不到最佳。光照是半夏组
培中一个有利因素，适度的光照可使半夏生长繁茂。
这与徐萍等哺]的报道相一致。
3．3温(网)室基质栽培清洁卫生，组培苗移栽后成
活率高，第1、2年的4---10月问均未见倒苗，只是在
8月中、下旬出现新老叶交替现象，这一发现为生产
中解决倒苗问题提供了思路。
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万方数据
半夏工厂化育苗技术体系研究初探
作者： 张晓伟， 王小峰， 周昌华， 张兴翠， ZHANG Xiao-wei， WANG Xiao-feng， ZHOU
Chang-hua， ZHANG Xing-cui
作者单位： 张晓伟,王小峰,张兴翠,ZHANG Xiao-wei,WANG Xiao-feng,ZHANG Xing-cui(西南大学农学与
生命科学学院,重庆,400716)， 周昌华,ZHOU Chang-hua(西南大学科技处,重庆,400716)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(3)
被引用次数： 4次

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