全 文 :·614· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月
多糖类药物作用的受体及信号转导机制的研究进展
张群,雷林生,吴曙光
(第一军医大学药物研究所,广东广州 510515)
摘 要:肛葡聚糖通过补体3型受体(CR。)增强巨噬细胞、NK细胞、中性粒细胞的杀伤作用;多数多糖可通过Toll
样受体4(TLR4)或TLR2激活和增强巨噬细胞的吞噬功能,或诱导巨噬细胞合成包括肿瘤坏死因子a(TNF—a)在
内的多种细胞因子;也有报道p葡聚糖的主要受体是树突状细胞相关C型凝集素一1(dectin—1),而且介导了巨噬细
胞的生物功能。
关键词:多糖;受体;信号转导
中图分类号:R979.1;R979.5文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2005)04—0614—03
Receptorandsignaltransductionmechanisminvolved
inbiologicaleffectsofpolysaccharides
ZHANGQun,LEILin-sheng,WUShu—guang
(InstituteofPharmaceuticalScience,FirstMilitaryMedicalUniversity,Guangzhou510515,China)
Keywords:polysaccharide;receptor;signalt ansduction
多糖是多聚糖(polysaccharides)的简称,由10个以上的
单糖基通过糖苷键连接而成。2~9个单糖基通过糖苷键连
接而成的聚糖称作低聚糖或寡糖(oligosaccharides)。由一种
单糖组成的多糖称作均多糖(homosaceharide),由2种以上
单糖组成的多糖称作杂多糖(heterosaccharide)。多糖广泛存
在于生物体内,或以其本身或以糖蛋白或糖脂的形式存在。
其主要功能是形成生物的支持组织(如纤维素、甲壳素等)、
贮存养料(如淀粉、糖原等)、信息储存和信号识别(如组织生
长的调控、免疫调控)等。
20世纪50年代末发现真菌多糖具有抗肿瘤活性以后,
人们对各种多糖成分展开了广泛的研究。20世纪60年代以
来日本学者对许多不同来源的多糖类物质进行了抗肿瘤筛
选与结构研究,成功的例子有香菇多糖、裂褶菌多糖,它们被
开发为临床治疗肿瘤的辅助药物。20世纪80年代以后国内
学者也对多糖类成分展开了广泛的研究。灵芝多糖、云芝多
糖也广泛用作保健药品和辅助治疗药物。
免疫调节作用是多糖类物质最基本的作用,该调节方式
主要通过以下几个途径实现:直接或间接激活巨噬细胞
(M面)、NK细胞和T、B淋巴细胞;促进细胞因子的生成与
分泌;激活补体系统;促进抗体产生等。大部分多糖均有抗肿
瘤作用,目前认为以(1—3)一pD一葡聚糖和以(1--4)-pD一葡
聚糖占优势的多糖具有明显的抗肿瘤活性。至于多糖的抗肿
瘤机制一直认为是通过增强免疫功能而介导的,但其具体过
程并不清楚。除甘露聚糖作用于甘露糖受体以外,大多数多
糖作用的受体是什么也没有明确的答案。直至20世纪末期,
多糖的抗肿瘤机制及作用的受体才逐渐被揭示出来。
1多糖作用的主要受体
1.1 p葡聚糖作用于补体3型受体介导抗肿瘤效应:1999
年Yan等口3从受体水平揭开了酵母p葡聚糖抗肿瘤作用的
部分面纱。其作用机制简述如下:巨噬细胞、NK细胞、中性
粒细胞上存在补体3型受体(CR。),该受体含有两个功能结
构域(domain),其一与补体3裂解片断(iC3b)结合,称作
iC3b结合位点;另一结构域与B一葡聚糖结合,称作凝集素
(1ectin)结合位点。针对肿瘤特异性抗原或相关抗原的抗体
与肿瘤细胞结合后,暴露补体结合部位,从而激活补体经典
活化途径,补体3(C3)被裂解为C3a和C3b,后者进一步转
变为iC3b。此时,iC3b便附着在肿瘤细胞上,称作iC3b调理
的肿瘤细胞。巨噬细胞、NK细胞、中性粒细胞通过CRs的
iC3b结合位点与iC3b调理的肿瘤细胞结合,但此时并不能
杀伤肿瘤细胞;只有CR。的凝集素结合位点与p葡聚糖结
合后,再通过iC3b结合位点与iC3b调理的肿瘤细胞结合才
能杀伤肿瘤细胞(图1)。因此,认为p葡聚糖与CR。的凝集
素结合位点结合后使巨噬细胞、NK细胞、中性粒细胞处于
预激活化状态(primedstate),然后通过iC3b作为纽带,使效
应细胞和靶细胞结合在一起,从而杀伤靶细胞。其证据是:p
葡聚糖介导的细胞毒性可被抗CR。抗体抑制,而对缺乏CRs
受体的淋巴细胞不起作用,在加入多糖前,用抗CRs抗体处
理淋巴细胞,可阻止受体的激活;加入多糖后再加入抗CRa
抗体,则能阻止激活的CR。与iC3b靶细胞的结合。根据这一
原理,Cheung等n1在裸鼠身上接种人神经母细胞瘤,然后用
收稿日期:2004—07—15
基金项目:广东省自然科学基金资助项目(032825)
作者简介:张群(1979一)女,上海人,2003年毕业于牡丹江医学院临床医学专业,现为第一军医大学药理学硕士研究生,主要从事免
疫药理学研究。Tel:(020)61648167E~mail:zql979@fimmu.com
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月·615·
抗神经节苷脂的抗体(iv)和大麦p葡聚糖(ig)进行联合治
疗。结果发现,抗神经节苷脂的抗体能明显增强大麦B一葡聚
糖的抗肿瘤作用。进一步研究发现[3],不管抗体针对何种抗
原(如神经节苷酯抗原GDz、GDs,分化抗原CD20,表皮生长
因子受体,HER2),不管接种何种肿瘤(如神经母细胞瘤、黑
色素瘤、淋巴癌、表皮样癌、乳腺癌),也不管接种在何处(皮
下、全身),p葡聚糖与抗体的协同抗肿瘤作用均存在,而且
(1—3),(1—4)一pD一葡聚糖的作用要优于(1—3),(1—6)一p
D一葡聚糖。如果小鼠白细胞上缺乏C3R[CDllb(一/一)],或
者小鼠缺乏C3成分,这种协同作用消失。值得注意的是,在
去除粒细胞的小鼠身上观察不到这种协同作用[4]。可见CR。
是p葡聚糖抗肿瘤的受体基础之一,而粒细胞是其效应细胞
之一。这些结果充分证明这一假说的普遍意义。
B一葡聚糖
图1 p一葡聚糖抗肿瘤作用机制示意图
Fig.1Illustrationofantitumormechanism
forp-glucan
1.2多糖作用于Toll样受体介导免疫效应:虽然以上提到
的p一葡聚糖的抗肿瘤机制是通过CR。介导的,但并不能认
为是唯一的机制,也不能排除免疫调节作用的参与。近年来,
有很多研究发现多糖的免疫调节作用与Toll样受体有关。
如桔梗根多糖通过Toll样受体4激活巨噬细胞口];刺五加
多糖通过Toll样受体激活B细胞和巨噬细胞[63;红花多糖
通过Toll样受体4激活转录因子NF—xB诱导巨噬细胞合成
细胞因子Hj。
Toll受体是在研究果蝇胚胎发育过程中发现的,与果蝇
的背腹侧分化有关。后来又发现Toll受体在果蝇抗真菌、细
菌等病原感染中亦发挥重要作用。以Toll受体的基因序列
为探针在高等动物及人类中也发现同源基因,命名为Toll
样受体(Toll—likereceptors,TLRs)。近年对TLRs的研究十
分广泛和深入,到目前为止TLRs家族至少有10名成员被
发现[8]。其中TLR2和TLR4与炎症及免疫调节关系密切。
TLR4的配体主要是细菌内毒素(LPS)中的类脂A和脂壁
酸(1ipoteichoica id)[93。TLR2的配体较广泛,包括肽聚糖、
脂蛋白、脂多肽、阿糖苷聚糖脂、酵母多糖等[1⋯。
人们之所以把多糖的抗肿瘤作用归结为其免疫调节作
用,其中的理由之一是多数多糖可以诱导和促进巨噬细胞分
泌肿瘤坏死因子a(TNF—a)。虽然发现多糖促进TNF—a的产
生与Toll样受体有关,但结论并不一致,如:酵母多糖通过
TLR2激活转录因子NF—KB,进而起动TNF—Gt基因转录,促
进TNF—a的产生;而红花多糖被证明是通过TLR4激活
NF—xB,最后促进TNF—Ct的产生;也有报道刺五加多糖既可
通过TLR2又可通过TLR4激活NF—KB。造成这些结果不一
致的原因之一可能是由于多糖本身结构的复杂性所致,不同
来源的多糖其单糖组成、糖苷键的连接均有细微的区别。
1.3 p葡聚糖作用于dectin一1介导免疫效应:最新报道p一
葡聚糖的主要受体是树突状细胞相关c型凝集素一1(den—
driticcell—associatedC—typel ctin一1,dectin—1)[113,而且介导
了巨噬细胞的生物功能,包括产生TNF—a[I“。Dectin一1是由
Ariizumi等[13]利用消减克隆策略(subtractivecloningstr t—
egy)从小鼠树突状细胞系XS52的总mRNA中克隆到的一
个新基因,其蛋白质产物主要表达在细胞膜上。按照基因核
苷酸推算,该蛋白含有244个氨基酸,由3部分组成,即胞浆
区(氨基酸编号1~44)、推定的跨膜区(氨基酸编号45~
68)、胞外区(氨基酸编号69~244),并推测在胞外区含有一
个碳水化合物识别结构域基序(carbohydraterecognition
domainmotif)(氨基酸编号119--244)。当初认为dectin一1主
要表达在树突状细胞上,后来研究发现在多种细胞上均有表
达,尤其是在单核/巨噬细胞、中性粒细胞、树突状细胞上表
达密度高,在一些T细胞亚类也有低水平的表达。人类
dectin一1基因位于第12号染色体p12.3~p13.2,与自然杀
伤细胞基因复合体(NKgenecomplex:12p13.1tOp13.2)
相郊,与小鼠dectin一1的区别在于前者有2个剪接变异体
(splicevariant),而且主要在白细胞群体上表达口4““。
2多糖作用的信号转导机制
除了多糖作用的受体是近年研究的热点外,多糖作用的
细胞后信号转导机制亦是众多学者关注的问题。一般只是粗
略地观察多糖作用后哪些信号分子发生了改变,如:香菇多
糖升高脾细胞内的Ca2+浓度、cAMP、cGMP[1⋯,灵芝多糖诱
导巨噬细胞内蛋白激酶A的活性[181等,而系统研究多糖受
体相关的或功能相关的信号转导机制的报道较少。最近,台
湾学者报道了灵芝多糖促进中性粒细胞吞噬和趋化作用的
信号转导机制[1⋯,证明与肌醇磷脂3激酶(phosphatidy—
linositol3-kinase)、Src家族酪氨酸激酶(Src—familytyroine
kinase)、蛋白激酶C(PKc)、p38丝裂原激活的蛋白激酶
(p38MAPK)等有关,但并没阐明是通过何种受体介导的。
以细菌脂多糖(LPS)作为配体研究Toll样受体的信号
转导机制比较深入,已有多篇综述文章进行了详细介
绍[io,203。LPS通过TLR4介导的TNF—a的合成主要通过以
下机制实现:LPS—LBP—CDl4复合物与人单核吞噬细胞
TLR4结合触发胞内级联信号转导反应,首先TLR4胞浆区
段与一个叫做衔接子(adapter)的蛋白MyD88相互作用,依
次激活IL一1受体相关激酶(IRAK)、肿瘤坏死因子受体相关
因子一6(TRAF一6)、NF—KB诱导激酶(NIK)和a阻IeB激酶,最
终使I”B磷酸化而降解,激活的NF一”B移位入核内,启动免
疫反应基因转录激活,其中包括TNF—a基因。
3结语
虽然从目前研究的报道看,有关多糖作用的受体主要有
万方数据
·616· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第4期2005年4月
CRs、TLR2、TLR4、Dectin一1、甘露糖受体,但是由于多糖结
构的多样性和复杂性,可以想象,多糖受体也是多样的,今后
还会有更多的多糖受体被揭示。
多糖作用的信号转导机制也是今后研究的重要课题,其
研究策略将是以作用的受体为信号传人的起始点,以某种细
胞效应(如吞噬、趋化、合成或分泌细胞因子)为终点观测指
标,确定其中的信号转导通路。通过研究有望发现新的药物
作用靶点,为建立新的药物筛选模型提供信息。
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人参属药用植物组织和细胞培养的研究进展
陈巍1,高文远¨,贾伟2,段宏泉1,肖培根3
(1.天津大学药物科学与技术学院,天津300072;2.上海交通大学药学院,上海200030;
3.中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所,北京 100094)
摘 要:从愈伤组织的诱导及培养、试管苗再生、悬浮培养、反应器培养及转基因器官培养等5个方面介绍了人参
属药用植物组织与细胞培养的研究进展。日本和韩国已经分别实现了人参悬浮细胞和不定根培养的工业化;我国
尽管已经开发了人参愈伤组织的一些产品,但在人参属药用植物组织和细胞培养的工业化方面还有一段路要走。
关键词:人参属;组织培养;细胞培养;生物反应器
中图分类号:R282.21 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2005)04—0616—05
Advancesinstudiesontissueandcellcultureinmedicinalpl ntsofPanaxL.
CHENWeil,GAOWen—yuanl,JIAWei2,DUANHong—quanl,XIAOPei—gen3
(1.CollegeofPharmaceuticalScienceandTechnology,TianjinUn versity,Tianjin300072,China;2.SchoolofPharmacy,
收稿Et期:2004—06—11
*通讯作者Tel:(022)87401895E—mail:pharmgao@tju.edu.cn
万方数据
多糖类药物作用的受体及信号转导机制的研究进展
作者: 张群, 雷林生, 吴曙光, ZHANG Qun, LEI Lin-sheng, WU Shu-guang
作者单位: 第一军医大学药物研究所,广东,广州,510515
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2005,36(4)
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