全 文 ：·1258· 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
黄丝郁金的栽培变种C．10ngaL．CV．chuanyujin。
2．5 白丝郁金与绿丝郁金：从SRAP研究结果可
见白丝郁金和绿丝郁金有很近的亲缘关系，在分类
阈值为0．22时，两个品种可以相互聚合。在生长环
境上白丝郁金常与绿丝郁金混生在一起。认为白丝
郁金可能为蓬莪术C．phaeocaulis即绿丝郁金的栽
培变种，暂定为自丝郁金C。phaeocaulisV l．CV．
baisi。
3讨论
SRAP技术是一种新型标记，现主要用在水稻、
油菜和大蒜等植物研究中。本文首次将该技术应用
到中药研究领域中来，研究中通过引物的筛选、反应
程序的优化，得到了较好的扩增效果，每个引物组合
平均产生14．7条多态性条带，最多可达25条。研究
证明，SRAP技术可用于郁金分子生物学的研究，本
研究从DNA分子水平上为郁金类药材原植物的分
类、遗传多样性和种质资源以及GAP研究提供了
参考依据，并且为中药研究领域提供了一个新的分
析方法。
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HPLC法研究雄、雌虎杖不同部位化学成分的变化
张须学1，李海霞2，刘延泽3
(1．南阳医学高等专科学校，河南南阳450004；2．郑州大学药学院，河南郑州450052；
3．河南中医学院，河南郑州450008)
虎杖在我国广泛分布，在美国东北部也有大量
分布。临床可用于痹痛，黄疸，经闭，烫伤，跌打损伤，
疮毒，咳嗽、痰多等症。现代药理研究表明虎杖中的
蒽醌类大黄素、大黄酸、大黄素甲醚有抗炎、抑菌、抗
病毒、抗肿瘤等作用[1]；芪类白藜芦醇、白藜芦醇苷
有抑制胃酸分泌、保肝、抗血栓、降血脂、预防动脉硬
化、对多种癌症发生阶段的抑制[2]、强心扩血管、镇
咳平喘[3]、改善微循环、提高烧伤动物存活率和存活
时间等作用[43；黄酮醇苷类槲皮素一3—0一葡萄糖苷、
槲皮素一3—0一阿拉伯糖苷有利尿作用口]；缩合鞣质有
抗肝脂质过氧化物[6]、降血糖[71等作用。虎杖为雌雄
异株植物，在生产、采集及使用中从未涉及到其性别
问题。尽管雌雄异株现象在植物中也常见到，但其化
学成分及药理作用有何异同引起了我们的兴趣。虽
然对虎杖的化学成分已有大量报道，但对其性别和
收稿日期：2005—11—12
部位间的差异目前尚未见文献报道；并且中药是整
体化学成分发挥作用，现有文献虽有大黄素、白藜芦
醇、白藜芦醇苷量的测定方法，但未见用HPLC一
次分析其尽可能多的化学成分的方法；而且《雷公炮
制论》记载“虎杖，采得后，细研，却用虎杖叶裹一夜，
出煞干用”，说明虎杖叶对其根及根茎的炮制有一定
作用，提示有必要研究虎杖不同部位化学成分的异
同。鉴于在我国及美国东北部地区具有十分丰富的
资源及巨大的开发潜力，因此，本试验用HPLC法
对我国及美国雌雄虎杖的不同部位进行化学成分变
化分析，为评价雌雄虎杖的品质及其合理化的采收、
加工、炮制、用药提供依据，并为进一步研究虎杖的
药理药效作用提供参考。
1仪器与试药
高效液相色谱仪：Waters1525HPLC泵，
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月·1259·
Waters2487双波长检测器。旋转蒸发仪；水为双重
蒸馏水，甲醇为色谱纯；丙酮、醋酸等其他试剂均为分
析纯。虎杖药材6批，来源见表1，经刘延泽教授及郑
州大学药学院潘成学老师鉴定为蓼科植物虎杖
PolygonumcuspidatumSieb．etZuce．相应的部位。
2方法与结果
2．1 色谱条件：YMCODS—AS一5120A色谱柱
(150ITIrll×4．6ram)；流动相：甲醇(A)，0．5％醋酸
水溶液(B)，梯度洗脱条件：o～40min，20％A一80％
B；40～50min，50oAA一50％B；50～90min，20％
A一80％B；体积流量：1．0mL／min；检测波长254
nlTl；柱温为室温；进样量：5肛L。
2．2供试品的制备
2．2．1虎杖叶：取一定量的雄株虎杖叶、雌株虎杖
叶，用70％含水丙酮溶液组织破碎提取，提取液减压
浓缩至于，得提取物，提取率分别为4．3％、9．8％。
2．2．2 虎杖花：取一定量的虎杖雄花、雌花，用
70％含水丙酮溶液组织破碎提取，提取液减压浓缩
至干，得提取物，提取率分别为4．8％、5．6％。
2．2．3虎杖根及根茎：取一定量的雄株虎杖根及根
茎、雌株虎杖根及根茎，用70％含水丙酮溶液组织
破碎提取，提取液减压浓缩至于，得提取物，提取率
为5．4％、8．2％。
2．3 供试品溶液的制备：精密称取各个提取物
40．0mg，用50％甲醇溶解并定容至100mL，摇匀，
再从中精密吸取1．0mL，置于10mL量瓶中，用
50％甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，0．45弘m微孑L滤
膜滤过，取续滤液，即得。
2．4检测波长的选择：以药材整体色谱图为准，重
点比较虎杖药材在254E8|、280E引、303[1⋯、306nm[11]
不同检测波长下的HPLC图谱，选取色谱峰信息较
多，色谱峰较为均匀，基线也较稳定，且各峰分离良
好的254nm为检测波长，以提供虎杖中更多化学
成分。
2．5流动相及洗脱梯度的选择：曾采用甲醇一0．1％
磷酸溶液(85：15)、甲醇一0．2％磷酸溶液(80：
20)[8]，乙腈一水(15：85，48：52)[10．11|，1％HAc—
H。0与1％HAc—CH。CN梯度洗脱[91等为流动相，
发现存在出峰快，色谱峰重叠或峰数少，峰行不好等
情况。经试验采用甲醇一0．5％醋酸水溶液系统作为
流动相，梯度洗脱得到的信息量较丰富，各成分峰形
尖锐且分离度较好。
2．6稳定性试验：取同一虎杖供试品溶液分别在
0、2、4、8、12、16、24h不同时间点进样。
各主要色谱峰相对保留时间和相对峰面积的
RSD均低于3％。
2．7精密度试验：取同一虎杖供试品溶液，连续进
样5次，各色谱蜂相对保留时间和相对峰面积的
RSD均低于2％。
2．8重现性试验：取同一批虎杖药材分成5份，分
别按同样的方法提取、制备供试品溶液，分别进样，
同法测定，各色谱峰相对保留时间和相对峰面积的
RSD均低于3％。
2．9样品分析：精密吸取供试品溶液，进样5肛L，
采集90min的HPLC图谱，不同性别、不同部位虎
杖70％含水丙酮提取物化学成分的色谱图见图1。
不同来源虎杖的化学成分色谱图经“计算机辅助相
似度评价系统”进行数据处理。即从各样本图谱中综
合比较生成对照模式色谱图，并以此模式为基准，计
算每个色谱图与之比较的相似度。数据处理结果见
表l。
0 10203040506070800 1020304050607080
图1虎杖雄叶(A)、雌叶(B)、雄花(C)、雌花(D)、
雄根及茎(E)、雌根及茎(F)的HPLC图谱
Fig．1HPLCChromatogramsfP．cu pidatum
frommaleleaves(A)，femaleleaves(B)，
maleflower(C)，femaleflowers(D)，
malerootsandstem(E)，andfemale
footandstem(F)
3讨论
3．1提取：考虑到虎杖所含蒽醌类、芪类、黄酮类、
鞣质类成分大部分均为多元酚类，易被氧化[10’11]，
所以采用组织破碎法提取并减压浓缩提取液，以达
到快速、完全和不破坏化学成分的目的。
3．2虎杖各个提取物以相同的浓度进样，而不是以
相同剂量的药材得到的提取液进样，是为了避免雌、
雄虎杖各个部位所含化学成分量少时受仪器检出限
万方数据
·1260· 中草．鸯 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第8期2006年8月
表1 6批不同来源虎杖相似度评价结果(一一3)
Table1 SimilarityofsixbatchesofP·cuspidatum
fromvarioushibitats(一一3)
的干扰，使结果更有可比性。
3．3表1的评价结果表明，不同来源(特别是来自
美国和中国两个国家)雄株虎杖的花、叶、根及根茎
相似度较高，同样，雌株虎杖的花、叶、根及根茎相似
度也较高，提示不同来源不影响雌或雄虎杖相同部
位的化学成分，各地雌或雄虎杖相同部位的质量相
差不大。
3．4不同部位化学成分变化的比较：70％丙酮提取
时，雌、雄虎杖相应部位(如均为花或叶、或根及根
茎)的主要化学成分差别不大，但相应叶、根及根茎
化学成分的相对质量分数差别较大：雄叶与雌叶比
较增加了一些非主要化学成分，并且14．689rain的
成分由5．O％增加到29．7％，54．322rain由73．4％
减少到48．6％；雄花与雌花比较化学成分与化学成
分所占相对质量分数差异均不大；雄根及根茎与雌
根及根茎比较化学成分差别不大，但雌根及根茎
38．918rain的成分由36．2％减少到26．9％，
69．860rain的成分由3．2％增加到13．4％。雄花与
雌花化学成分相差不大的例外，可能是由于所采雄
花、雌花大部分为花被片，没有只单独采集雄蕊、雌
蕊的原因。中药的疗效不仅与所含化学成分有关，而
且与所含物质的量有关，雌、雄虎杖根及根茎化学成
分量的差别，提示雌、雄虎杖应分别入药，或用于治
疗不同的病症，或用于同样病症时应调整剂量；并且
提示如提取69．860min的成分时应以雌根及根茎
为原料(并且雌根及根茎提取率8．2％高于雄根及
根茎的5．4％)。由结果还不难看出，虎杖不同部位
的化学成分差异较大：叶与花的不同主要在于增加
了14．689rain的成分，根及根茎与花、叶的成分明
显不同。
3．5虎杖叶与根及根茎所含化学成分的明显不同，
说明古人用叶裹根及根茎的炮制方法有一定科学道
理，经过如此炮制可能使各自的有效成分互为补充，
起到增加药效的目的，这提示除了研究虎杖现有的
生品、盐炙品、酒炙品、醋炙品炮制品之外，还应研究
叶炙品。
3．6 由虎杖根及根茎的HPLC图谱可见色谱峰信
息较多，各峰分离较好，故本方法尚可用于虎杖药材
的质量评价；虎杖化学成分明显不同的部分，如有相
关的药理药效学试验与其对应，将使研究更有意义。
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万方数据
HPLC法研究雄、雌虎杖不同部位化学成分的变化
作者： 张须学， 李海霞， 刘延泽
作者单位： 张须学(南阳医学高等专科学校,河南,南阳,450004)， 李海霞(郑州大学药学院,河南,郑州
,450052)， 刘延泽(河南中医学院,河南,郑州,450008)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(8)
被引用次数： 1次

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