全 文 ：·192· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月
制剂与质量
紫杉醇透明质酸冻干制剂的制备和药动学研究
殷殿书1，葛志强1，刘昌孝1’2，元英进”
(1．天津大学化工学院制药工程系，天津300072；2．天津药物研究院天津药代动力学与药效学动力学
省部共建国家重点实验室，天津300193)
摘 要：目的 以透明质酸为载体材料制备紫杉醇透明质酸冻干制剂，并考察冻干制剂在大鼠体内的药动学。方法
采用乳匀一冻干法制备冻干制剂；以透射电子显微镜观察其粒子形态；建立冻干制剂及其在血浆中紫杉醇的HPLC
分析方法；以紫杉醇注射剂为对照，测定冻干制剂10mg／kgiv给药后，大鼠体内的药动学参数。结果在冻干制剂
中，紫杉醇以球形包覆于透明质酸基质中；在溶液中，分散成平均粒径为80nm的包覆微球；大鼠iv冻干制剂和紫
杉醇注射剂的药物浓度一时间曲线符合二室模型，其药动学参数AUc分别为(37．68±6．36)pg·h／mL和(27．54
±5．88)pg·h／mL；CL分别为(o．26士0．04)h_1和(o．38±0．07)h～。结论透明质酸可能成为一种新的抗癌药
物载体。
关键词：紫杉醇；透明质酸；冻干制剂；药动学
中图分类号：R286．02 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2005)02—0192—04
Paclitaxellyophilizedpreparationwithhyaluronicacidasacarrieranditspharmacokinetics
YINDian—shul，GEZhi—qian91，LIUChang—xia01”，YUANYing—jinl
(1．DepartmentofPharmaceuticalEngineering，SchoolofChemicalEngineeringandTechnology，TianjinUn vers ty，
Tianjin300072，China；2．TianjinStateK yLaboratoriesofPharmacokineticsandPharmacodynamicsat
atTianjinInstituteofPharmaceuticalResearch，Tianjin300193，China)
Abstract：ObjectiveTopreparepaclitaxellyophilizedpreparationwithhyaluronicacidasacarrier
andinvestigateitspharmacokineticsinratsinvivo．MethodsThepreparationwaspreparedby mulsion—
homogenouslyophilization．Theparticlemorphologywasobservedbytransmissionelectronmicroscope
andtheHPLCanalysisforthepaclitaxelinlyophilizedpreparationndnplasmawasestablished．Taking
paclitaxelinjectionascontrol，theinvivopharmackineticsoflyophilizedpreparationbyivtoratsatadose
of10mg／kgwastudied．ResultsInlyophilizedpreparationthepaclitaxelparticlesw rewrapped
sphericallyinhyaluronicacidmatrixandweredispersedinwrapped-mierosphereinmeandiameterof80nm
insolution．Theconcentration—timecurveoflyophilizedpreparationndpaclitaxelinjectionbyivtorats
wasidenticalwiththetwo—compartmentmod landthepharmacokinetieparametersofAUCwere(37．68+
6．36)and(27．54土5．88)肛g·h／mLandCLwere(0．26±0．04)and(0．38±0．07)h～，respectively．
ConclusionHyaluronicacidmaybeusedasanovelandspecificcarrierofanti—tumordruginthefuture．
Keywords：paclitaxel；hyaluronicacid； yophilizedpreparation；pharmacokinetics
紫杉醇是一种含二萜环的天然抗癌成分，主要
用于乳腺癌和卵巢癌的治疗[1]。由于它的强疏水性，
所以原制剂用氢化蓖麻油和无水乙醇作为溶剂，该
处方在临床使用中往往引起严重的过敏反应。因此，
在使用前需进行抗过敏的预防治疗，这给临床用药
及病人带来了极大的不便和痛苦。针对现制剂的不
足，国内外开发了一系列新的制剂如脂质体o]、微
乳‘引、纳米微粒‘引、环糊精包合物‘引、PEG前药‘63等。
透明质酸(hyaluronieacid)是存在于人体内的一种
多糖类物质。它通过与细胞表面的粘附受体CD44
和RHAMM结合来调节细胞的各种生理作用Hj。近
年来的研究表明，在某些肿瘤细胞表面具有丰富的
CD44和RHAMM受体凹’9]。因此，利用透明质酸对
肿瘤细胞的亲合性质可以提高抗癌药物的疗效。在
以往的研究中，笔者对紫杉醇透明质酸冻干制剂的
药效学进行了研究，发现透明质酸对紫杉醇有良好
的增效作用。本实验考察了紫杉醇透明质酸冻干制
剂的形态，并以紫杉醇临床制剂为对照，比较了冻干
收稿日期：2004—07—08
作者简介：殷殿书(1965～)，男，河北省馆陶县人，高级工程师，博士，主要从事药物新型制剂的研究。E—mail：dsyin@eyou．corn
*通讯作者Tel：(022)27403888E—mail：yiyuan@tju．edu．all
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月·193·
制剂在大鼠体内的药动学行为。
1材料与仪器
紫杉醇注射剂(自制，批号：021220)，紫杉醇冻
干制剂(自制，批号：021221)，紫杉醇(自制，纯度不
低于98．5％)；CremophorEL@(BASF，Ger．)，透明
质酸(山东福瑞达生物化工有限公司)；乙腈、甲醇、
乙醚(色谱纯)；安定(北京制药厂)；Waters600高效
液相色谱仪；冻干机(ChristAlphal一2，Ger．)；
JEM--100CX1I型透射电子显微镜(Japan)；ESEM
XL一30型扫描电子显微镜(philip)；光子相关光谱
仪(PCS)(Brookhaven，USA)。SD大鼠，(220±10)
g，由中国医学科学院实验动物繁育中心提供。
2方法与结果
2．1 紫杉醇冻干制剂的制备[1⋯：于搅拌下，将透明
质酸溶于纯水中，使形成0．5％的水溶液，按1：5
的比例加入葡萄糖，充分溶解后，再加入紫杉醇微乳
液，于匀化器中充分匀化后，在一20℃下预冻24h，
再于一40～一45。C冷冻干燥36h，制成紫杉醇透明
质酸冻干制剂。
2．2 紫杉醇冻干制剂粒径分析和形态观察：取样品
适量，在扫描电子显微镜下观察冻干制剂的形态；另
取样品适量，用生理盐水溶解后于透射电子显微镜
下观察粒子的形态；取适量样品用生理盐水溶解后，
除尘，使用光子相关光谱仪测定粒径。使用BI一
9000AT相关器，BI一200SM光度计于514．5nm、
25℃下测定粒径，采用CONTIN数据进行处理，得
到分散粒子大小的分布。见图1。可以看出紫杉醇以
球形存在于透明质酸基质中，紫杉醇与透明质酸基
质以包覆的球形微粒存在于溶液中，冻干制剂在溶
液中的平均粒径为80nm。
100
80
七60
凝
№40
樊
20
O
0 200 400 600
粒子直径／m
图1冻干制剂的扫描电镜图(A，Bar10um)、透射电镜图(B，×105倍)和粒子大小及粒径分布图(C)
Fig．1Scanningelectronmicrograph(A，Bar10IJm)，transmissionelectrmicrograph(B，amplified×10s)，
andeterminedparticlesizeandistribution(C)oflyophilizedpreparation
2．3体内方法学研究
2．3．1 色谱条件：色谱柱为C，。柱(250mm×4．6
rnm，5牡m)，流动相为甲醇一乙腈一水(20：45：35)，
体积流量为1．0mL／min，紫外检测波长227nm，灵
敏度为0．02AUFS。
2．3．2血样预处理：精密吸取血浆样品150pL，准
确加入10,ug／mL安定内标液50肛L，涡旋振荡2
vain混匀后，加入乙醚2mL，涡旋振荡2vain。3000
r／min离心lOvain，取上层有机层，于40℃水浴中
氮气吹干。加人流动相150pL复溶，取50弘L采用
HPLC法测定。记录紫杉醇及安定的峰面积，计算两
者之比，计算血浆药物质量浓度。
2．3．3血浆中紫杉醇标准工作曲线的建立：取大鼠
空白血浆150pL，精密加入不同质量浓度的紫杉醇
溶液。再于各样品中精密加入安定内标液50肛L，如
前述血样预处理方法操作，记录紫杉醇及安定的峰
面积，计算两者之比，用质量浓度对峰面积比作线性
回归，得到测定血浆中紫杉醇的标准工作曲线。紫杉
醇在0．1～100pg／mL时，质量浓度(C)与峰面积之
比(R)线性关系良好，C=8．3679R一0．415，r一
0．9994(n一5)。
2．3．4方法回收率的测定：取空白大鼠血浆150
弘L，精密加入不同量的紫杉醇甲醇溶液，使其质量
浓度分别为1、8、80弘g／mL。按前述血样预处理方法
操作处理后，采用HPLC法测定紫杉醇的峰面积
(A，)；另配制等质量浓度的紫杉醇甲醇溶液直接采
用HPLC法测定紫杉醇的峰面积(A：)。计算A。／
A。，得方法回收率。紫杉醇3个质量浓度(1、8、80
pg／mL)的回收率分别为94．37％、97．85％、
98．52％。
2．3．5 方法精密度的测定：取空白大鼠血浆150
弘L，精密加入不同量的紫杉醇甲醇溶液，使其质量
万方数据
·194· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月
浓度分别为1、8、80／-tg／mL。按前述血样预处理方法
操作处理后。采用HPLC法于1d内测定5份样品
和5d连续进行紫杉醇的测定，计算出日内和日间
RSD分别为2．32％、2．18％、1．85％和2．76％、
1．87％、2．42％。
体内药物浓度分析结果显示，建立的大鼠血浆
中紫杉醇质量浓度的测定方法专属性较好，血浆中
杂质及制剂辅料对测定没有影响(图2)。紫杉醇的
保留时间约为10．1min，安定的保留时间约为9．2
min，最低检测质量浓度为0．04ttg／mL。
9】86 9203
1一安定2一紫杉醇
1-Diazepam2-paclitaxel
图2空白血浆(A)、给药紫杉醇注射液(B)、
冻干制剂(C)大鼠血浆的HPLC图谱
Fig．2HPLCchromatogramsfbl nkplasma(A)，
ratplasmawithpaclitaxelinjection(B)，
andwithlyophilizedpreparation(C)
2．4药动学研究：SD大鼠10只随机分成两组，每
组5只，两组大鼠以10mg／kg的剂量分别iv紫杉
醇注射剂和冻干制剂。分别于0、0．25、0．5、1、2、4、
6、8、10、12、14h于眼眶取血，置于肝素化的试管
中，4000r／min离心10min，取血浆于冰箱中冷冻
保存。按前述血样预处理方法处理样品，采用HPLC
法测定紫杉醇的血药浓度。实验数据以z±s表示。
组间差异用t检验进行统计分析。紫杉醇注射剂和
紫杉醇冻干制剂以10mg／kg剂量iv给予大鼠体后
的血药浓度一时间曲线见图3。全部数据经3P97处
理后，进行曲线拟合，两者均符合二室模型[1¨，两种
制剂的药动学参数比较见表1。可以看出紫杉醇冻
干制剂的AUC大于紫杉醇注射剂，而CL小于紫杉
醇注射剂，两者具有统计学差异(P<0．05)。
3讨论
透明质酸是人体内的一种内源性多糖，本研究
利用透明质酸在溶液中呈螺旋状构型，使紫杉醇微
乳嵌合到网状结构中，对药物起到了增效和缓释作
100
f
名10
矗
三
＼
谧
羚l
蒜
0 ’2 4 6 8 10 12 14 16
时间柏
1一冻干制剂 z一紫杉醇注射剂
1-1yophilizedpreparation2-paclitaxelinjection
图3 iv紫杉醇注射剂和冻干制剂后紫杉醇
在大鼠体内的平均血药浓度一时闻曲线
Fig．3Meanbloodconcentration-timecurveinrat
invivoofpaclitaxelafterivpaclitaxel
injectionandlyophilizedpreparation
表1 SD大鼠iv紫杉醇注射剂和冻干制剂的药动学
参数(z士s，n一5)
Table1 Pharmacokineticparametersofivpaclitaxel
injectionandlyophilizedpreparationtoSD
rats(；±s，n=5)
与注射剂比。．P’P用。紫杉醇注射剂中的聚氧乙烯蓖麻油Cremophor
EL是引起制剂严重过敏反应的主要原因。本实验
中制备的透明质酸包合紫杉醇冻干制剂，由于透明
质酸在药物表面形成了一层薄膜，使药物在体内的
输送过程中泄漏很少，又可以使药物通过透明质酸
的亲合介导作用富集在靶向细胞周围，使药效提高
30％以上。
对紫杉醇透明质酸冻干制剂的药动学研究表
明，冻干制剂的AUC大于注射剂，而CL小于注射
剂，均说明在同样剂量条件下，冻干制剂在体内消除
速度较慢并保持较高的血药浓度，从而提高药物的
疗效。这与药效学实验结果相一致。冻干制剂的药
n
25ljii。j=：㈠!¨f，8，_
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月·195·
动学特点可能与该制剂本身性质有关。一方面该冻
干制剂形成了粒径很小的药物微粒，有利于提高药
物在体内的循环和吸收，另一方面透明质酸在粒子
表面形成一层膜，使药物在体内的释放减慢，消除速
度变小，这有利于提高药物的疗效。具体机制有待进
一步研究。
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温里药配伍对口服赤芍小鼠血浆中芍药苷的影响
杨祖贻1，裴瑾2，刘荣敏1，程佳1，万德光2，胡荣2
(1．四川省肿瘤研究所，四川成都610041；2．成都中医药大学药学院，四川成都610075)
摘要：目的建立适用于7种温里药分别与活血药赤芍配伍后芍药苷血药浓度的RP—HPLC检测方法。探讨活血
温里复方的药物配伍机制。方法将胡椒、肉桂、小茴香、吴茱萸、花椒、丁香、干姜分别与赤芍配伍后ig小鼠，采用
HPLC法测定各复方在小鼠血浆中芍药苷血药浓度。结果胡椒、肉桂、吴茱萸、小茴香、花椒均能不同程度地提高
芍药苷的血药浓度(P萸、花椒与活血药赤芍配伍均能提高赤芍主要有效成分芍药苷的血药浓度。
关键词：赤芍；芍药苷；温里药；血药浓度；高效液相色谱
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)02一0195一04
Effectofcompatibilityw thwarming—insidedrugsonpaeoniflorininmouseplasma
YANGZu—yil，PEIJin2，LIURong—minl，CHENGJial，WANDe—guan92，HURon92
(1．SichuanCancerInstitute，Chengdu610041，China；2．CollegeofPharmacy，ChengduUniversity
ofTraditionalChineseMedicine，Chengdu610075，China)
Abstract：ObjectiveToestablisha RP—HPLCmethodforthedeterminationof heblood
concentrationofpae iflorinwhichwasproducedbysevenkindsofwarming—insidedrugs(WID)being
usedwiththepromoting—blooddrugs(PBD)individuallyandtoexplorethmechanismofPBDandWID
compoundprescription．MethodsThebl odconcentrationofpeaoniflorininmouseplasmaw s
determinedbyHPLCafterigsevenkindsofWIDbeingcompatiblewithRadixPaeoniaeRubra(RPR)to
miceseparately．ResultsFructuPiperis(FP)，CortexCinnamoni(CC)，FructusEvodiae(FE)，Fructus
FoPniculi(FF)，andPeric rpiumZanthoxyli(PZ)compoundprescri tiowithRPRcanincreasetheblood
concentrationofpaeoniflorinindifferentd grees(P<0．01)．ButF肠sCaryoph3’lii(FC)andRhizoma
Zingiberis(RZ)hadobscureeffectonit．ConclusionFP，CC，FF，FE，andPZcompoundprescription
withRPRseparatelycanincreasethbloodconcentrationofpea iflorin．
收稿日期：2004～08—20
基金项目：国家中医药管理局科研基金资助项目(02—03ZP50)；四川省中医管理局科研基金资助项目(200217)
万方数据
紫杉醇透明质酸冻干制剂的制备和药动学研究
作者： 殷殿书， 葛志强， 刘昌孝， 元英进， YIN Dian-shu， GE Zhi-qiang， LIU Chang-xiao
， YUAN Ying-jin
作者单位： 殷殿书,葛志强,元英进,YIN Dian-shu,GE Zhi-qiang,YUAN Ying-jin(天津大学化工学院,制
药工程系,天津,300072)， 刘昌孝,LIU Chang-xiao(天津大学化工学院,制药工程系,天津
,300072;天津药物研究院,天津药代动力学与药效学动力学省部共建国家重点实验室,天津
,300193)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(2)
被引用次数： 6次

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