全 文 ：中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月· 735·
3讨论
石斛的多糖类成分是石斛中具有免疫促进和抗
肿瘤作用的活性成分，常以其量的高低来判断某一
类石斛类药材的质量好坏。因此本实验以多糖作为
测定指标，来研究美花石斛药材的适宜产地和采收
时间。
由不同产地的美花石斛药材的多糖量结果看
出，贵州所产美花石斛药材的多糖量最高，其次是越
南、广西，云南最低。所比较的产地均为美花石斛的
主要产地，因此笔者可以推出美花石斛的适宜产地
是贵州。这一结果可能与各产地的地理经纬度和海
拔高度等影响因素有关，贵州两地的经度和纬度都
在105。和25。左右，但云南和广西的经度分别为104。
和109。，纬度为23。和21。左右，越南和广西的海拔较
贵州和云南的低，而且其余各产地的年均温度比贵
州两地的年均温度高3～6℃，这一原因与聚类结果
相符，它们都可能对药材的生长和有效成分的积累
带来一定的影响。
不同采收期的美花石斛多糖成分量有明显差
别，从采收年限上看，因为美花石斛药材现多为仿野
生和移栽药材，所以不考虑1年生药材，而4年生药
材茎多干枯，不做药用，因此只比较2年生和3年生
药材。从结果可以看出，2年生药材的多糖量高于3
年生药材，因此建议美花石斛药材采收应该安排在
第2年的生长期结束时比较合适。
不同采收时期美花石斛从采收的不同月份来
看，总体上讲多糖量在春季(2～4月)最低，秋冬季
(9～12月)量相对较高，所以美花石斛的采收季节
可定为9月至次年1月(即秋季和冬末春初)，由此可
以看出传统上石斛药材的采收时间定于秋冬季是有
科学道理的。
由于美花石斛中还含有其他有效成分，因此确
定最终的最佳产地和采收时间还要结合其他有效成
分的量和产地的地理气候因素，本实验通过多糖量
的差异进行比较初步确定药材的适宜产地和采收时
间，为今后继续研究美花石斛药材的有效成分和采
收时间提供基础。
参考文献：
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不同产地短瓣金莲花中黄酮苷的测定
周 欣1，范国荣矿 ．
(1．南京军区福州总医院药学科，福建福州 350025，2．第二军医大学药物分析教研室，上海200433)
摘要：目的考察不同产地短瓣金莲花药材中3种黄酮苷的量。方法采用HPLC同时测定短瓣金莲花中槲皮
素一3．O一新橙皮糖苷、荭草苷及牡荆苷的量。结果 不同产地短瓣金莲花药材中槲皮素一3一o-新橙皮糖苷和荭草苷的
量有较大差异。结论所建立的分析方法准确可靠，可用于短瓣金莲花药材质量控制。本研究为短瓣金莲花的资源
利用及质量控制提供了一定的科学依据。
关键词：短瓣金莲花，黄酮苷，HPLC
中图分类号：R282．6 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1735一03
短瓣金莲花TrolliusledebouriReichb．为毛茛
科金莲花属植物的干燥花，属野生的多年生草本植
物，主要分布于黑龙江及内蒙古东北部等地区‘1．z]，
具有抑菌和抗病毒等功效。现代药理研究表明黄酮
类化合物为金莲花属植物主要有效成分，生药鉴别
和药品质量评价也均以黄酮为指标‘3~6]，金莲花属
植物已知成分的定量测定多采用高效液相色谱法、
薄层扫描色谱法、分光光度法等方法，目前所报道的
收稿日期：2008一Ol一04
作者简介：周欣(1977一)，女，江西人．硕士研究生，目前研究方向为中药质量控制。
Tel：(0591)833737554E—mail：zibaihuamao@yahoo．tom．cn
·通讯作者范国荣Tel：(021)25070388E—mail：Guorfan@yahoo．com．cn
万方数据
·1736· 中草葛ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
研究仅定量荭草苷或牡荆苷[7’8]。本实验首次建立了
高效液相色谱同时测定短瓣金莲花中3种指标性成
分(槲皮素一3—0一新橙皮糖苷、荭草苷及牡荆苷)的定
量测定方法，并考察了不同产地短瓣金莲花药材中3
种单体的量，为该药材的质量控制建立切实可行的
分析方法。
1材料及仪器
1．1 材料及试剂：短瓣金莲花药材(河北鹿泉、河北
承德、石家庄、哈尔滨、沈阳、北京、内蒙古、青海、济
南9个产地)购白药材市场或当地药店，经第二军医
大学生药教研室秦路平教授鉴定。
乙腈、磷酸、异丙醇、四氢呋哺为色谱纯(Merck
公司)，甲醇、二甲基亚砜等试剂为分析纯。荭草苷、
牡荆苷及槲皮素一3一。一新橙皮糖苷对照品为本实验
室自制，质量分数均高于98．5％。
1．2 仪器：LC一10AT泵，SIL一10AD自动进样
器，CT0—10AS柱温箱检测器，SPD一10A紫外检
测器，N2000色谱工作站。
2方法与结果
2．1 色谱条件与系统适用性试验：采用反相高效液
相色谱C。8柱(200mm×4．6mm，5t-tm)为大连伊利
特有限公司，流动相为0．5o．4醋酸水溶液一异丙醇一四
氢呋喃一乙腈(450l 20l 30l 30)；检测波长为340
nm；柱温为25℃；进样量20弘L，体积流量为0．6
mL／min。理论塔板数按荭草苷峰计算应不低
于4000。
2．2供试品溶液的制备：称取干燥药材约0．5g，精
密称定，加入60％甲醇10mL，超声提取30min，滤
过，滤液用60％甲醇定容于25mL量瓶中，摇匀。用
0．45／．tm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2．3线性考察：分别精密称取五氧化二磷减压干燥
24h的荭草苷对照品10．04mg、槲皮素一3—0一新橙皮
糖苷对照品9．98mg置于10mL量瓶中，加1．0mL
二甲基亚砜超声溶解，再用60％甲醇稀释至刻度，摇
匀，配制成含荭草苷、槲皮素一3—0一新橙皮糖苷约1．0
mg／mL的溶液，分别精密量取0．1、0．2、0．4、0．6、
0．8、1．0mL于10mL量瓶中，用60％甲醇定容至刻
度，摇匀，得10～100pg／mL系列质量浓度溶液。各
进样20弘L，记录荭草苷、槲皮素一3一O一新橙皮糖苷峰
面积。
精密称取五氧化二磷减压干燥24h的牡荆苷
对照品10．05mg置于10mL量瓶中，加1．0mL二
甲基亚砜超声溶解，再用60％甲醇稀释至刻度，摇
匀，配制成含牡荆苷1．0mg／mL的溶液，分别精密
量取20、40、60、80、100、120弘L于i0mL量瓶中，用
30％甲醇定容至刻度，摇匀，得2．O～12．0pg／mL系
列质量浓度溶液。各进样20pL，记录牡荆苷峰面积。
以样品质量浓度(tug／mL)为横坐标，峰面积为纵坐
标做标准曲线，结果见表1，3种黄酮苷对照品色谱
图见图1。
裹1 3种黄酮苷标准曲线测定结果
TableStandardcurveofthreekinds
offlavonoidglycosides
化合物 回归方程
线性范围／
r
(flg·mL．1)
荭覃霄 A=33685C-I-288710．9998 10．04～100．4
槲皮素一3—口新橙皮糖苷A=22568C+126090．9998 9．98～99．80
牡荆苷 A=14702C+4273．30．9999 2．01～12．06
2．4精密度试验：取上述标准曲线制备项下槲皮
素一3一O一新橙皮糖苷、荭草苷对照品溶液(约40
弘g／mL)，牡荆苷对照品溶液(约8弘g／mL)，连续重
复进样6次。结果荭草苷峰面积的RSD为0．44％，槲
皮素一3一O一新橙皮糖苷峰面积的RSD为0．06％，牡荆
苷峰面积的RSD为0．20％，表明本法精密度良好。
2．5重现性试验：将同一产地药材(内蒙古)平行制
备供试品溶液6份，按上述色谱条件测定，考察金莲
花提取物中荭草苷、牡荆苷及槲皮素一3一O一新橙皮糖
苷色谱峰面积的重现性，结果荭草苷的RSD为
0．42％，槲皮素一3—0一新橙皮糖苷的RSD为0．20％，
牡荆苷的RSD为0．33％，结果表明本测定方法重现
性良好。
2．6 稳定性试验：取同一产地金莲花药材(内蒙
古)，制备供试品溶液，间隔一定时间进样(O、2、4、6、
8、10、12h)，观察其峰面积的变化，结果荭草苷的
RSD为0．46％，槲皮素一3—0一新橙皮糖苷的RSD为
0．61％，牡荆苷的RSD为0．62％，表明样品溶液在
12h内稳定。
2．7 回收率试验：采用加样回收法，分别称取已测
定的同一产地金莲花药材(内蒙古)2g，共6份，分
别精密加入定量的3种黄酮苷对照品溶液，制备供
试品溶液，按上述色谱条件测定3次，计算回收率。
结果荭草苷的平均回收率为99．12％，RSD为
0．96％，槲皮素一3一。一新橙皮糖苷的平均回收率为
98．80％，RSD为1．60％，牡荆苷的平均回收率为
102．66％，RSD2．62％。试验结果表明，各黄酮苷的
回收率均符合要求。
2．8 检测限试验：取3种黄酮苷贮备液，用60％甲
醇依次稀释制成不同质量浓度的样品液，取20弘L
万方数据
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注入液相色谱仪测定最小检测量。以信噪比大于3
估算3种黄酮苷的最小检测量约为0．05pg／mL。
2．9样品测定：取不同产地(河北鹿泉、河北承德、
石家庄、哈尔滨、沈阳、北京、内蒙古、青海、济南)短
瓣金莲花药材制备供试品溶液，计算供试品中3种
黄酮苷量，色谱图见图1。结果见表2。
0 5 lO 15 20 25 30 35 40
t／min
峰1．2，3分别为槲皮素一3—o-新橙皮糖苷、荭草苷及牡荆苷
peaks1，Z，and3 respecttoquercetin-3-O-neohesperidoside，
orientin，andvitexin
图l 3种黄酮苷对照品(A)及短瓣金莲花药材(B)
HPLC色谱圈
Fig．1HPLCChromatogramsfthreeflavonoidglycosides
(A)andsampleofT．1edebouri(B)
裹2不同产地短瓣金莲花3种黄酮苷■比较(辟=3)
Table2 Comparisonofthreeflavonoidglycosides
tnT．1edebourifromdifferenthabitats(辟一3)
产地 槲皮素一3—0一新橙皮糖苷／％荭草苷／％牡荆苷／％
3讨论
本实验首次建立了高效液相色谱法同时测定短
瓣金莲花药材中槲皮素一3一。一新橙皮糖苷、荭草苷及
牡荆苷等3种黄酮苷的定量方法。在预实验中，曾尝
试不同比例甲醇一醋酸水溶液、乙腈一醋酸水溶液流
动相系统，但其分离效果均欠佳。最后确定0．5％醋
酸水溶液一异丙醇一四氢呋喃一乙腈(450：20。30：
30)体系为流动相可较好分离各黄酮苷，且重现性良
好，结果令人满意。研究中对3种对照品进行了紫外
扫描，结果发现它们在340nm波长处有最大或较强
吸收，因此本实验中选择340nm作为检测波长。
本研究首次考察了不同产地短瓣金莲花药材3
种黄酮苷的量，结果表明各产地药材中荭草苷及槲
皮素一3—0一新橙皮糖苷的量均相对较高，牡荆苷的量
较低。产地不同，其3种黄酮苷的量也均有差异，特
别是荭草苷及槲皮素一3一。一新橙皮糖苷因产地不同
量差异很大。除济南产药材外，发现各产地药材中荭
草苷及槲皮素一3一D一新橙皮糖苷的量虽高低不同，但
其两者质量分数之和却基本相同(1．48％～1．67％，
济南产为1．27％)。此结果对短瓣金莲花药用资源开
发具一定提示作用，在短瓣金莲花总黄酮及其黄酮
苷单体的分离纯化及药效研究中应注意因产地不同
而导致的差异。
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万方数据
不同产地短瓣金莲花中黄酮苷的测定
作者： 周欣， 范国荣
作者单位： 周欣(南京军区福州总医院,药学科,福建,福州,350025)， 范国荣(第二军医大学,药物分析
教研室,上海,200433)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(11)

参考文献(8条)
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