全 文 :中草蒋 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月:· 887·
表明,虽然LC—MS等方法得到的测定结果不能用
于“中药色谱指纹图谱相似度软件2004A,B版”(原
始数据文件的输出格式必须为.aia),但通过夹角余
弦等计算方法可得到指纹图谱相似度.为中药材提
供质量上的技术监督手段。
3.5 本试验中选用紫外检测器(DAD)进行色谱
分析时,考察了254和316am波长的指纹图谱和
相似度评价,结果显示,316nm波长处得到的结果
与254nm和HPLC—MS的结论差别较大,相似度
在0.777一-..0.980。分析原因在316am测定时色谱
峰多,且基线不稳,噪音较大,说明用中药色谱指纹
图谱相似度评价系统2004A版软件对导入的图谱
条件是比较苛刻的,否则会影响到后来相似的计算
结果,建议选用LC—MS等专属性好的方法进行分
析,克服紫外检测法的缺点。
参考文献:
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(--)03.中药新药与临床药理,2006,17(1):40—42.
鲜品肉苁蓉渣和汁有效成分的比较
王丽楠1,陈 君1,杨美华1.,陈士林1,刘同宁2
(1.中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京 100193;2.宁夏永宁县肉苁蓉种植场,宁夏永宁750100)
摘要:目的鲜品肉苁蓉渣和汁有效成分量比较及其药用研究初探。方法采用硫酸一苯酚法测定肉苁蓉多糖的
量;采用大孑L树脂一紫外分光光度法测定了苯乙醇苷的量;采用《中国药典》肉苁蓉项下HPLC方法,测定了松果菊
苷和毛蕊花糖苷的量。结果 以肉苁蓉多糖、苯乙醇总苷、松果菊苷和毛蕊花糖苷主要有效成分的量为综合评价指
标,鲜品肉苁蓉渣中除多糖的量与汁中相差不明显,其余有效成分的量均明显高于其汁,最大相差依次为8、785、
230倍。鲜品肉苁蓉渣部分经冷冻后多糖的量显著升高,苯乙醇总苷的量明显下降。结论鲜品肉苁蓉渣部分与其
汁相比药用性更高,为鲜品肉苁蓉科学用药及其保健食品开发提供依据。同时,鲜品肉苁蓉渣部分经冷冻后有效成
分的量明显改变,为鲜品肉苁蓉的储存提供了参考。
关键词:肉苁蓉;多糖;苯乙醇总苷;松果菊苷;毛蕊花糖苷
中图分类号:R282.6 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2008)12—1887—03
肉苁蓉CistanchedesertiolaY.C.Ma为列当
科多年生寄生植物,为补肾壮阳、润肠通便之要药。
始载于《神农本草经》,列为上品,主治阳痿、不孕、腰
膝酸软、筋骨无力、肠燥便秘等,是临床常用中药之
一。因其生长在沙漠环境中,又具有沙漠“人参”的美
誉[1]。由于过度开发利用,野生资源濒临枯竭。肉苁
蓉及其寄主固沙植物梭梭已被列为国家二级保护植
物,并收入《国际野生植物保护名录》L2J。肉苁蓉中主
要活性成分是苯乙醇苷类化合物、肉苁蓉多糖等,其
苯乙醇苷的主要作用是调节内分泌,促进代谢和强
壮作用以及清除自由基和抗衰老作用;肉苁蓉多糖
可以增强机体的免疫功能【3“]。
本实验首次以肉苁蓉多糖、苯乙醇总苷、松果菊
苷和毛蕊花糖苷主要活性成分的量为综合评价指
标,比较鲜品肉苁蓉渣和汁部分的药用性。同时,考
察了鲜品肉苁蓉渣部分经冷冻后有效成分量的变
化,预期为鲜品肉苁蓉的储存及鲜品药用提供参考。
1仪器与试剂
UV一可视分光光度计(岛津2550型)。电热恒
温鼓风干燥箱(DHG一9143BS一11I,无锡市苏嘉实验
设备厂),TPl50超声清洗机(功率150W,频率40
kHz,北京天鹏新技术有限公司)。
D一101一I型大孑L树脂购于天津市海光化工有限
公司,松果菊苷对照品(批号:111670—200502,供定
量测定用)、毛蕊花糖苷对照品(批号:111530-
200404,供量的测定用)均购于中国药品生物制品检
定所。葡萄糖(分析纯)购于广州化学试剂厂。苯酚、
硫酸均为分析纯(北京化学试剂二厂)。甲醇、乙腈均
为色谱纯(FisherScientific公司)。
苯酚试剂:取AR级苯酚200g加铝片0.2g
收稿日期:2008—05—10
基金项目:宁夏自治区科技攻关计划项目(05GG一10807)
*通讯作者杨美华,女,研究员,博土,研究方向为中药质量分析及新药研究开发。
Tel:(010)62899730(0)13041071999E—mail:yangmeihual5@hotmail.com
万方数据
·1888· , 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月
和碳酸氢钠0.1g,蒸馏,收集182℃馏份,称取10
g于棕色瓶内,加水150mL溶解,置冰箱中备用。
鲜品肉苁蓉药材采于宁夏永宁县肉苁蓉种植
场。于4月份采挖5批药材,每批药材粉碎压汁,渣
和汁分别保存。每批药材渣部分分为3组,见表l。
表1鲜品肉苁蓉渣部分样品分组情况
Table1 GroupsoffreshC.desertiolasap
分组 加工及处理方法
①组 直接粉碎压汁后的渣部分
②组 渣部分40C干燥。粉碎
③组 渣部分一20+C冷冻保存7个月后,40C干燥,粉碎
2方法与结果
2.1 肉苁蓉多糖测定:采用硫酸一苯酚法测定肉苁
蓉多糖的量L5]。
2.1.1对照品溶液的制备:精密称取干燥至恒重的
葡萄糖对照品5mg,用水定容于50mL量瓶中,得
质量浓度为0.1mg/mL的对照品溶液。
2.1.2供试品溶液的制备:鲜品肉苁蓉①组、②组、
③组渣部分各取1g,精密称定。加入80%乙醇回
流提取1h(2次,50mI。/次),滤过,弃去滤液,滤渣
待挥干乙醇后,加水煎煮2h(2次,50mL/次),滤
过,合并2次滤液,反复洗至100mI.量瓶中,定容,
摇匀,再精密吸取1mL置10mI。量瓶中,加水稀
释并定容至10mL,摇匀,即得供试品溶液。
取鲜品肉苁蓉汁5mL,精密称定,摇匀,静置,
取上清液滤过,取续滤液即得。
2.1.3样品测定:精密吸取对照品溶液和样品溶液
各1.0mL,分别置干燥试管中,加水至2.0mL,再
分别加入苯酚试剂1.0mL,摇匀;迅速加入浓硫酸
5.0mL,并在刻度试管中定容至8.0mL,振摇5
rain,沸水浴加热15rain,放冷,同时做一空白,在
490rim处测定吸光度,结果分别见表2、5。
表2鲜品肉苁蓉①组渣和汁部分多糖测定结果
Table2 Determinationofpolysaccharidesinsap①
andjuiceoffreshC.desertiola
2.2苯乙醇总苷量测定:本实验采用大孔树脂一紫
外分光光度法测定肉苁蓉中苯乙醇总苷的量嘲。
2.2.1对照品溶液的制备:精密称取苯乙醇总苷对
照品4mg,用甲醇定容于10mL量瓶中,得质量浓
度为0.4mg/mL的对照品溶液。
2.2.2供试品溶液的制备:鲜品肉苁蓉①组、②组、
⑧组渣部分各取2.5g,精密称定,精密加入50%乙
醇50mL,密塞,称定质量,回流提取5h,取出,放
冷,再次称定质量,用50%乙醇补足减失质量,摇
匀,滤过,精密量取续滤液25mL,置水浴上蒸至近
干,残渣加水10mL使溶解,放冷,通过D—101一I型大
孔树脂柱(柱长20cm,内径2cm),以水50mL洗
脱,弃去水液,再用20%乙醇50mL洗脱,弃去洗脱
液,继用70%乙醇80mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,用
甲醇溶解并转移至10mL量瓶中,精密量取0.5mL
置10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
取鲜品肉苁蓉汁部分,离心,取上清液滤过,取
续滤液10mL,精密称定,上D一101一I型大孔树脂
柱。其余操作同上。
2.2.3样品测定:分别取苯乙醇总苷对照品与供试
品溶液,以甲醇为对照品,在333nm处测定吸光
度。结果分别见表3、5。
表3鲜品肉苁蓉①组渣和汁部分苯乙醇总苷测定结果
Table3 DeterminationofphenyIethanOjdglycosides
insap①andjuiceoffreshC.desertiola
苯乙醇总苷/%批号——
①组渣部分 汁部分
2.3松果菊苷和毛蕊花糖苷:按2005年版《中国药
典》一部肉苁蓉项下HPI。C法,测定肉苁蓉样品中
松果菊苷和毛蕊花糖苷的量。
2.3.1色谱条件:色谱柱为KromasilC18(250mm×
4.6mm,5肛m)(中国科学院大连化学物理研究所
国家色谱中心),流动相:乙腈一甲醇一1%醋酸(10:
15:75),检测波长:333am,进样量:10弘I。,体积流
量1mL/min,柱温:25C。在此条件下,样品中松果
菊苷和毛蕊花糖苷与其他相关峰均能达到基线分
离,见图1。
2.3.2对照品溶液的制备:分别精密称取松果菊苷
和毛蕊花糖苷对照品各5mg,用流动相定容于
50mL量瓶中,得0.1mg/mL松果菊苷对照品溶
液及0.1mg/mL毛蕊花糖苷对照品溶液。
2.3.3供试品溶液的制备:取鲜品肉苁蓉①组渣部
分2g.精密称定,置50mL棕色量瓶中,精密加入
流动相25mL,称定质量,浸泡0.5h,超声处理
万方数据
中草嚆 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第12期2008年12月·1889·
10 20 30 40 50
lO 20 30 40 50
t|mill
1一松果菊苷2一毛蕊花糖苷
1-echinacoside2一verbascoside
圈1对照品(A)和样品(B)HPLC色谱图
Fig.1Chromatogramofreferencesubstance(A)
andsample(B)
40min,放冷,再称定质量,用流动相补足损失的质
量,摇匀,离心,静置。取上清液滤过,取续滤液即得。
取鲜品肉苁蓉汁5mL,精密称定,摇匀,离心,
静置,取上清液滤过,取续滤液即得。
2.3.4样品测定:分别精密吸取对照品溶液与供试
品溶液各10弘L,注入液相色谱仪测定,结果见表4。
表4鲜品肉苁蓉①组渣和汁部分松果菊苷及
毛蕊花糖苷测定结果
Table4 Determinationofechi acosideandverbascoside
glycosidesinsap①andjuiceoffreshC.desertiola
①组渣部分 汁部分
批号————————————————-—一————————————————__
松果菊苷/%毛蕊花糖苷/% 松果菊苷/%毛蕊花糖苷/%
2.4鲜品肉苁蓉渣部分经冷冻后主要活性成分量
比较:将鲜品肉苁蓉②组、③组渣部分,即冷冻前后
的渣部分定量测定结果进行比较,结果见表5。
表5鲜晶肉苁蓉②组、③组渣部分测定结果
Table5 Comparisonbetweensap②andsap③
offreshC.desertiola
多糖/% 苯乙醇总苷/%批号————
冷冻前(②组)冷冻后(③组)冷冻前(②组)冷冻后(③组)
3讨论
3.1根据笔者已发表的相关研究文献吲,考虑肉苁
蓉中苯乙醇苷的量与多糖量以40‘C为最适初加工
温度,故本实验②组、⑨组渣部分采用此干燥方法。
3.2关于肉苁蓉药用记载已有2000多年的历史,
《神农本草经》、《本草经疏》、《本草汇言》、《本草求
真》、《本草正义》等诸多古医籍中多有论述。实验表
明,除多糖外,鲜品肉苁蓉渣部分苯乙醇总苷、松果
菊苷及毛蕊花糖苷的量均高于汁。多糖的量没有明
显差距可能与其水溶性较好有关。其中主要有效成
分松果菊苷,渣中与汁中最高相差785倍。另外,苯
乙醇总苷最高相差7倍;毛蕊花糖苷最高相差230
倍。本实验证明鲜品肉苁蓉药材大部分有效成分在
其渣中,并非汁液中,为其鲜品科学用药及保健品开
发提供了依据。
3.3从表5可看出,同批样品冷冻前与冷冻后多糖
量显著升高,苯乙醇总苷的量明显下降。冷冻后样品
多糖的量最高能达到冷冻前的22倍,冷冻后苯乙醇
总苷的量大大减少,最大相差6倍。这可能与苷类物
质的酶催化水解有关。雷厉等[7]对苯乙醇苷类化合
物在狗胃肠道内的代谢规律进行了研究,结果表明
苯乙醇总苷代谢主要发生在大肠,以厌氧菌引发的
还原反应及水解反应为主。松果菊苷在大肠内微生
物酶的影响下发生水解反应,脱去一分子葡萄糖转
化为类叶升麻苷。
在植物中苷和能水解该苷的酶往往是共存的,
由于它们不在同一个位置,故无法发生水解[8]。本实
验采用的样品经粉碎挤压,酶和苷相遇,进而可能发
生水解,这也许是样品成分发生明显变化的一个主
要原因。另一种可能是存在低温微生物,即在低温环
境下生长的微生物。本实验的样品是在一20℃冷冻
保存,由于这种低温微生物中酶的作用而可能使样
品有效成分的量发生变化。
3.4 本实验首次采用多成分综合评价方式,对鲜品肉
苁蓉渣和汁部分有效成分的量及鲜品药用进行了初步
探讨,为鲜品肉苁蓉的药用及储存提供了科学依据。
参考文献:
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万方数据
鲜品肉苁蓉渣和汁有效成分的比较
作者: 王丽楠, 陈君, 杨美华, 陈士林, 刘同宁
作者单位: 王丽楠,陈君,杨美华,陈士林(中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京
,100193), 刘同宁(宁夏永宁县肉苁蓉种植场,宁夏,永宁,750100)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2008,39(12)
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本文链接:http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200812044.aspx