全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月·1l·
致谢：沈阳药科大学代测核磁共振谱，辽宁中医
药大学药学院中心实验室和有机教研室代测紫外和
熔点。
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海藻海蒿子褐藻糖胶的分离与组成分析
魏晓蕾，王长云+，刘 斌，方玉春，顾谦群，张姗姗，康凯
(海洋药物教育部重点实验室中国海洋大学海洋药物研究所，山东青岛 266003)
摘要：目的 以海藻海蒿子为原料制备褐藻糖胶，并对不同的提取、分离方法进行比较，对多糖的组成和结构进
行初步分析。方法海蒿子脱脂干粉分别经水提取和酸提取以获得粗多糖，粗多糖分别经乙醇沉淀法和CaClz沉
淀法进行纯化。选取多糖组分F4用Q—SepharoseFastFlow和SephadexG一200凝胶柱进行分级分离，高效凝胶渗
透色谱法(HPGPC)鉴定纯度及相对分子质量，气相色谱分析多糖的中性单糖组成。结果F4经分级分离得到3个
级分：P1、P2和P3。P1、P2和P3均为均一组分，相对分子质量分别为：494400、61500和167600；Pl由岩藻糖、木
糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖构成，摩尔百分比43．4：33．3：6．2：4．3：12．8；P2由岩藻糖、木糖、甘露糖和半乳糖
构成，摩尔百分比44．4：15．1：23．8：16．7；P3由岩藻糖、木糖和半乳糖构成，摩尔百分比68．9：3．7：27．4。结论
P1、P2和P3的单糖含量均以岩藻糖为主，但其他单糖组成有较大差别。
关键词：海藻；海蒿子；褐藻糖胶
中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)01—0011一04
IsolationandcompositionanalysisoffucoidanfromalgaeSargassumpallidum
WEIXiao—lei．WANGChang—yun，LIUBin，FANGYu—chun，GUQian—qun，
ZHANGShan—shan，KANGKai
’
(KeyLaboratoryofMarineDrugs，MinistryofEducation，InstituteofMarineDrugs·Ocean
Universityo±China·Qingdao266003，China)
Abstract：ObjectiveFu o dansfromalgaeSargassumpallidumwerepreparedandthecomposition
andstructureofthDolvsaccharideswe eelucidated．MethodsFucoidanswereextractedandpurifiedby
differentm hods．ThepolysaccharideF4was paratedbychromatographyonaQ—SepharoseFastFlow
columnandaSephadexG一200column．Thepurityandmolecularweightofpolysaccharideswe eidentified
byHPGPC．Themonosaccharidecompositionin hepolysaeeharidesw sanalyzedbyGC．ResultsThree
polysaecharidefractionsP1，P2，andP3wereobtainedfromF4．ThemolecularweightofP1，P2，andP3
were49400，61500，and167600，respectively．GCAna sisshowedthatalIthecontentofmonosaccha—
rideoffucoseinP1，P2，andP3werethehighest．P1wascomposedoffucose，xylose，mannose，glucose，
收稿日期：2006—04—13
基金项目：国家自然科学基金(30572314)；山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(03BSl09)
作者简介：魏晓蕾(1981一)，女，硕士研究生。
*通讯作者王长云Tel：(0532)82031503E—mail：changyun@OUC．edu．an
万方数据
·12· 中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月
andgalactosewithamolarpercentageratioof43．4：33．3：6．2：4．3：12．8；P2wascomposedoffucose，
xylose，mannose，andgalactosewitharatioof44．4：15．1：23．8：16．7；andP3wascomposedoffucose，
xylose，andg lactosewitharatioof68．9：3．7：27．4．ConclusionThethreepolysaccharidesaremainly
composedoffucose，whilet eothermonosaccharidesareveryifferent．
Keywords：algae；Sargassump llidum(Turn．)C．Ag．；fucoidan
海藻海蒿子Sargassumpallidum(Turn．)C．
Ag．是生长在暖温带水域的褐藻门(Brownalgae)马
尾藻科(Sargassaceae)植物，主产于辽宁、山东沿海。
《中华本草》[1]中记载，海蒿子性“苦、咸、寒”，归“肝、
胃、肾”经，具“软坚散结，消痰利水”之功效，有很高的
药用价值。海蒿子中的褐藻糖胶是主要的活性成分之
一。现代研究表明，褐藻糖胶具有抗肿瘤、抗病毒、抗
血栓、抗氧化、调节血脂、抗辐射和抑制补体激活等多
种生理功能[2]。复方海藻制剂是用海藻等传统中药，
依据中医药组方原理制成的抗肿瘤复方制剂。临床应
用显示，该复方可有效配合放疗和化疗治疗肺癌、消
化道癌[3]。本实验对该复方中君药海藻海蒿子的褐藻
糖胶进行分离鉴定，试为海蒿子褐藻糖胶构效关系以
及复方物质基础的研究提供参考。
1仪器、试剂及材料
高效液相色谱仪(美国安捷伦1100series型)；
气相色谱仪(美国HP5890SERIESII型)；AKTA
FPLC全自动液相色谱仪(瑞典PharmaciaBiotech
公司)。
单糖标准品：鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、甘露
糖、木糖、半乳糖、葡萄糖均为Sigma公司产品；
Dextran系列标准品(相对分子质量分别为5900、
11800、22800、47300、112000、212000、404000、
80000)，Q—SepharoseF stFlow阴离子交换柱和
SephadexG一200均为瑞典PharmaciaBiotech公司
产品；其他试剂为国产AR级：
海藻海蒿子购自山东鲁南制药厂，产地为威海
近海区，经临沂市药品检验所鉴定为马尾藻科植物
海蒿子S．pallidum(Turn．)C．Ag．。
2方法
2．1褐藻糖胶的制备[4]
2．1．1酸提法：海蒿子干粉经90％乙醇回流脱脂3
次，干燥后得到脱脂藻粉。脱脂藻粉经0．17mol／L
稀盐酸(1：10)于70℃提取2h，重复3次；离心得
水提取液，加乙醇至70％醇沉，4℃静置过夜；离心
得沉淀，依次用无水乙醇和丙酮冲洗脱水得粗多糖。
粗多糖分别经乙醇沉淀法和CaCl。沉淀法纯化。乙
醇沉淀法：粗多糖配成5％水溶液，加乙醇至30％，
离心得上清液；加乙醇至70％，4℃静置过夜，离心
得沉淀，依次用无水乙醇、丙酮冲洗脱水得多糖。
CaCl。沉淀法：粗多糖配成2．5％水溶液，加CaCl。至
3mol／L，离心得上清液，余下步骤同乙醇沉淀法。
2．1．2水提法：脱脂藻粉经热水(1：10)于70℃提
取2h，重复3次，余下步骤同酸提法。水提粗多糖分
别经乙醇沉淀法和CaCl。沉淀法进行纯化，方法同
酸提法。
2。2褐藻糖胶的分级分离
2．2．1 离子交换色谱分离：多糖样品用Q—
SepharoseFa tFlow凝胶柱(20cm×5cm，V。=
300mL)色谱分离，依次以0．6、1．2、2．0mol／L
NaCI溶液梯度洗脱，苯酚一硫酸法跟踪检测，分部收
集，透析，浓缩冻干。
2．2．2凝胶渗透色谱分离：多糖样品用Sephadex
G一200凝胶柱(100cm×3．0em)色谱分离，0．2
mol／LNaCI溶液为洗脱液，苯酚一硫酸法跟踪检测，
分别收集主峰，透析，浓缩冻干。
2．3高效凝胶渗透色谱法测定纯度与相对分子质
量[5’6]：多糖样品用ShodexOHpakSB一804HQ柱进
行分析，0．025％NaN。为流动相，柱温45℃，体积
流量0．5mL／min，示差检测。用Dextran系列标准
品标定色谱柱，作标准曲线，用公式logMr=(y。一
V。)／(y。一y。)计算相对分子质量。Mr：相对1分子质
量；y。：洗脱体积；y。：柱空体积；y。：柱总体积。
2．4气相色谱法分析中性单糖组成：多糖样品5
mg，用2mol／L三氟乙酸2mL，105℃水解4hE7|，
得完全酸水解样品；经糖腈乙酸酯衍生化‘83后，进行
气相色谱分析。单糖标准品同法衍生化并气相色谱
分析。HP5890SERIESII型气相色谱仪；FusedSili—
caCapillaryColumn30SerialNo．QC3AC225色谱
柱；柱温210℃；进样口温度250℃；检测器温度：
250℃；氢火焰离子化检测器(FID)；载气：氮气。
2．5其他分析方法：苯酚一硫酸法口3测定总糖质量
分数；Lowry法[9]测定蛋白质质量分数；硫酸钡比浊
法[7]测定硫酸基质量分数。
3结果与讨论
3．1海蒿子褐藻糖胶的制备和分级分离：褐藻糖胶
万方数据
中草芮 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月·13·
是一种水溶性多糖，提取方法主要有酸提法和水提
法[4]。本实验用这两种方法提取海蒿子褐藻糖胶，分
别得到粗多糖C1和C2。C1分别经乙醇沉淀法和
CaCl。沉淀法纯化得到糖组分F1和F2；C2同法得
到F3和F4。F4经离子交换色谱分离，得3个级分
R1、R2和R3，分别经凝胶柱色谱再次分离纯化，得
到组分P1、P1和P3(图1)。
淀法
图1褐藻糖胶制备和分级分离流程图
Fig．1Preparationndseparationprocessingchart
offucoidansfromS．pallidum
酸提法粗多糖Cl得率6．15％(相对于干藻
粉)，水提法粗多糖C2得率7．08％。酸提法粗多糖
C1的总糖量较水提法粗多糖C2略高，但蛋白量也
较高(表1)。纯化后获得的多糖样品F1～F4的总糖
量显著提高，蛋白质量有所降低(表1)。其中，F1与
F2的蛋白质量相近，而F1较F2总糖量高，表明对
酸提法粗多糖宜采用乙醇沉淀法进行纯化；F3与
F4的蛋白质量相近，而F4较F3总糖量高，表明对
水提法粗多糖宜采用CaCl。沉淀法进行纯化。由于
水提多糖的蛋白量较低，选择组分F4进行进一步
的分级分离。
1 6
1·2
飞
篓o8
督
O4
O
表1多糖样品总糖和聋白质量分析
Table1 Analysisoftotalsugarndprotein
contentsinp0Iysaccharides
F4经离子交换色谱分离，其Q—SepharoseFast
Flow柱色谱图显示3个级分R1、R2和R3(图2)；
分别经SephadexG一200柱色谱再次分离纯化，得到
组分P1、P2和P3(图3)。P1、P2和P3的总糖量均
显著提高，蛋白质的量进一步降低(表1)。硫酸基质
量分数分析显示，P1硫酸基量最低，为4．78％；P2
较高，为15．34％；P3最高，达18．71％。
0．4
飞0．3
篓02
餐
O1
O
R1
： 氏
R3
▲JlL1● 。 ￡么～
O 500 l 000 l 50020002500
V／mI。
图2 F4的离子交换色谱图(Q—SepharoseFastFlow)
Fig．2ChromatogramofF4onQ—SepharoseFastFlow
0 100200300400500 0 1002003004005000
V／mL
图3 P1、P2和P3的凝胶色谱图(490nm)
Fig．3ChromatogramofP1，P2，andP3(490nm)
3．2相对分子质量与单糖组成分析
3．2．1相对分子质量测定：经高效凝胶渗透色谱法
检测，P1、P2和P3均呈单一对称峰，表明3者纯度
较高；由葡聚糖标准曲线求得相对分子质量分别为
49400、61500、167600。
3．2．2中性单糖组成分析：多糖P1、P2和P3先经
完全酸水解，经糖腈乙酸酯衍生化后进行气相色谱
分析。结果表明，3者的岩藻糖量均为最高。其中，P1
由岩藻糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖构成，以岩
藻糖和木糖为主，摩尔百分比43．4：33．3：6．2：
4．3：12．8；与P1相比，P2不含葡萄糖，以岩藻糖和
甘露糖为主，岩藻糖、木糖、甘露糖和半乳糖摩尔百
分比44．4：15．1：23．8：16．7；P3不含葡萄糖和
甘露糖，以岩藻糖和半乳糖为主，岩藻糖、木糖和半
万方数据
·14· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第1期2007年1月
乳糖摩尔百分比68．9：3．7：27．4(表2)。
文献报道[1⋯，褐藻S．stenophyllum中的褐藻糖
胶主要成分为岩藻糖，其次还伴有半乳糖、甘露糖、
木糖和少量葡萄糖，其主链为1—6连接的半乳糖和
1—2连接的甘露糖，分支以1—3或1—4连接的岩
藻糖为主，并伴有1—4连接的葡萄糖。本研究发现
海蒿子中褐藻糖胶的单糖组成与文献报道[10]相似，
但相对比值不同。
表2 PI、P2和P3的单糖组成分析
Table2 MonosaccharidecompositioninPI，P2，andP3
海蒿子是历代沿用的传统中药材海藻的一种，
是目前《中国药典》收载的少数几种海洋中药材之
一。从海蒿子中分离鉴定褐藻糖胶，对阐明海藻药用
作用基础具有重要的学术价值。本实验所得褐藻糖
胶的精细结构与生物活性正在测定中。
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狗肝菜的化学成分研究
高毓涛，杨秀伟，艾铁民+
(北京大学药学院，北京100083)
摘 要：目的 对狗肝菜11clipterachinensis全草的化学成分进行研究。方法采用硅胶柱色谱和制备性薄层色谱
进行分离、纯化，IR、NMR和MS等方法进行结构鉴定。结果从环己烷萃取部分得到13个化合物，分别鉴定为正
三十六烷醇(I)、硬脂酸(Ⅱ)、羽扇烯酮(11I)、羽扇豆醇(Ⅳ)、谷甾烷一4一烯一3一酮(V)、豆甾烷一5一烯一7一酮一3p棕橱酸
酯(Ⅵ)、口一谷甾醇(Ⅶ)、齐墩果酸(Ⅶ)、36，6p豆甾烷一4一烯一3，6-二醇(IX)、6p羟基一豆甾烷一4一烯一3一酮(X)、3p羟基一
豆甾烷一5一烯一7一酮(Ⅺ)、去氢催叶萝芙叶醇(X1I)和催叶萝芙叶醇(xⅢ)。结论除化合物Ⅱ和Ⅶ外，皆为首次从该
属植物中发现。
关键词：狗肝菜；三萜；甾醇
中图分类号：R284．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)01—0014—04
Chemicalconstituentsofwholeh rbofDiclipterachinensis
GAOYU—tao，YANGXiu—wei，AITie—min
(SchoolfPharmaceuticalSciences，PekingUniversity，Beijing100083，China)
Abstract：ObjectiveTos udythechemicalconstituentsinthewholeh rbofDiclipterachinensis．
MethodsSeparationandpurificationwereconductedbysilicagelcolumnchromatographicandpreparative
TLCmethods，thestructureswereidentifiedbyIR，NMR，andMS．ResultsThirteencompoundswere
收稿日期：2006—07—30
作者简介：高毓涛(1979一)，男，辽宁丹东人，北京大学2002级硕士研究生，主要研究方向为天然药物化学。
*通讯作者艾铁民Tel：(010)82802685Fax：(010)82802685E—mail：atmin@mail．bjmu．edu．ca
万方数据
海藻海蒿子褐藻糖胶的分离与组成分析
作者： 魏晓蕾， 王长云， 刘斌， 方玉春， 顾谦群， 张姗姗， 康凯， WEI Xiao-lei， WANG
Chang-yun， LIU Bin， FANG Yu-chun， GU Qian-qun， ZHANG Shan-shan， KANG Kai
作者单位： 海洋药物教育部重点实验室,中国海洋大学海洋药物研究所,山东,青岛,266003
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
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