全 文 ：中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月·1059·
表6鄂西素对小鼠腹水型HCA的作用(；土s)
Table6 EffectofhenryinonascitiesHCAinmice(j土s)
与模型组比较；～P<0．01
。。P<0．01口smodelgroup
表7鄂西素对DNCB诱导的小鼠迟发性超敏反应的
影响。土S，疗一8)
Table7 EffectsofhenryinondelayedhypersensitiVe
testinmiceinducedbyDNCB(j土s，n一8)
与对照组比较：。P
的生命延长率，其抗肿瘤作用的强弱呈剂量依赖性。
本实验设有12．5、25．0mg／kg两个剂量组，其中以
25．0mg／kg剂量作用为好。鄂西素小剂量有一定的
抑瘤作用，而高剂量组则有明显的抗肿瘤作用，与模
型组相比差异有显著性，而与阳性对照组相比则差
异无显著性。机体免疫功能影响的实验结果证明，鄂
西素对小鼠细胞免疫无影响，在25．0mg／kg剂量时
溶血素水平有较轻微抑制，表明在该剂量时，本品对
小鼠的体液免疫有轻微影响。但与阳性对照组相比差
异显著。5-Fu作为本实验阳性对照药对小鼠各瘤珠
有明显的抑制作用，其抑瘤率与模型组相比均有明显
差异，但免疫实验结果表明，5一Fu对机体免疫亦呈明
显抑制作用，这样就限制了其在临床上的应用。
鄂西素的抗肿瘤作用虽然稍逊于5一Fu，但仍显
． 示出较强的抗肿瘤作用，而免疫实验结果又表明，其
对机体免疫功能没有明显影响。鄂西素是由鄂西香
茶菜中提取分离而得的有效成分，鄂西香茶菜资源
丰富，表明鄂西素具有较好的临床应用价值，可作为
一种有较好前景的抗肿瘤药物，值得进一步深入研
究与开发。
References：
[1]LiTC，LiuCJ，AnXZ．Thestructureofh nryin[J3．
ActaBotYunnan(云南植物研究)，1984，6(4)：453—456．
[2]LiJC，YangLJ．StudyonantitumoreffectofLushan
rubesensin口]．ChinTraditHerbDrugs(中草药)，2005，
36(Suppl)：142—144．
[3]XuSY，BianRL，ChenX．MethodologyinPharmacological
Experiment(药理实验方法)EM]．Beijing：People’SMedical
PublishingHouse，1982．
“
松针油体外抗腺病毒作用研究
魏风香，商 蕾，曲章义+，陈 晶，高 虹，王鹏，张鸿彦
(哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生微生物学教研室，黑龙江哈尔滨150081)
腺病毒是引起人类呼吸道和消化道感染的重要
病原之一。腺病毒感染人类可引起许多疾病，如急性
上、下呼吸道感染，暴发性眼结膜炎，急性出血性膀
胱炎，风湿性关节炎，免疫缺损疾病，脑炎，脑膜炎以
及婴幼儿胃肠炎等，而其中呼吸道疾病的发病率是
最高的。腺病毒以其型别多、致病范围广而越来越受
到关注。在5岁以下儿童的急性呼吸道疾病中，大约
5％是由腺病毒引起的‘¨，在3岁以下儿童还易引
起急性肺炎‘引，腺病毒不仅可以引起致命的肺炎，而
且还能留下远期肺部损害‘3|。目前尚无有效预防腺
收稿日期：2006—12—13
基金项目：哈尔滨医科大学医学基础学科科学基金资助课题}黑龙江省卫生厅科技项目(2006—296)资助
作者简介：魏凤香(1974一)，女，黑龙江省佳木斯市人，讲师，在读博士研究生，主要从事呼吸道病毒分子生物学研究。
Tel：(0451)81161590
*通讯作者 曲章义E—mail：qurainbow@yahoo．com．an
万方数据
·1060· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月
病毒感染的疫苗和临床治疗药物，因此，筛选及开发
抗腺病毒药物具有重要的社会意义和经济价值。现
代研究表明，松针具有镇痛、抗炎、镇咳、祛痰、抗突
变、调血脂、降血压、抑菌等作用[4]，其药用价值日益
受到重视。松针油抗病毒研究国内外未见报道，本实
验初步研究松针油抗人腺病毒3型(Adenovirus
type3，ADV3)的作用效果。
1材料
1．1 病毒株和细胞株：ADV由本教研室保存；
HeLa细胞株为武汉大学典型培养物保藏中心提
供，常规方法传代培养。
1．2药品与试剂：松针叶采于黑龙江省伊春市林
场；对照组药物病毒唑注射液，山东益康药业有限公
司产品，50mg／mL，批号200211061；新生牛血清
(杭州四季青生物公司)；RPMI一1640培养液(美国
Gibco公司)；MTT(美国Sigma公司)；二甲基亚
砜(DMS0，上海菲达有限公司)。
1．3仪器：HP6890GC／5975MSD气质联用仪(美
国)，蒸馏装置(自制)，CO。培养箱(北京利康仪器
发展有限公司)，550型微孔板酶标仪(美国BIO—
RAD公司)。
2方法
2．1松针油提取：采用水蒸气蒸馏法。松树叶在实
验室阴干后切成小于2cm的小段，取针叶100g加
到1000mL的圆底烧瓶中，加入750mL蒸馏水，
置于水蒸气蒸馏装置中进行提取，蒸馏4h，取上层
精油，用无水乙醚溶解，无水硫酸钠脱水，得到淡黄
色油状液体，冷藏备用。用气相色谱一质谱联用仪分
析，测得松针油中含柠檬烯32．23％、乙酸龙脑酯
24．01％、莰烯18．04％、a一蒎烯15．88％、B一蒎烯
3．16％。
2．2 药物配制：用RPMI一1640培养液将松针油
(1．05g／mL)按1：100、1：200、1：400、1：800、
1：1600、1：3200、1：6400、1：12800、1：
25600、1：512000、1：1024000比例进行稀释，其
药液质量浓度分别为10．5、5．25、2．625、1．31、
0．656、0．328、0．164、0．08、0．04、0．02、0．01
mg／mL。
2．3 病毒毒力测定：以50％组织培养感染量
(TCID。。)表示病毒毒力。将病毒培养液做10倍系列
稀释从10叫至10叫o。将各稀释度的病毒液接种于单
层HeLa细胞中，每一稀释度8个复孔，同时设阴性
对照，37℃培养3～5d，观察细胞病变(cytopathic
effect，CPE)。用Reed—Munch法求出TCID50。
2．4松针油细胞毒性测定：将细胞维持液稀释的不
同质量浓度松针油分别加入HeLa细胞已长成单层
的96孔细胞培养板中，每个浓度重复8个复孔，同
时设立正常细胞对照，置于37℃、5％co：培养箱
内培养，连续观察3d，记录细胞形态变化。培养结
束前4h，吸弃培养板中液体，PBS冲洗3次，每孔
加入MTT(5mg／mL)20弘L，于37℃培养箱中
培养4h，去上清后每孔加DMSO200肛L，微量振
荡器振荡5min，酶标读数仪(波长492nm)测吸
光度(A)值。实验重复3次。
2．5松针油在HeLa细胞内抗ADV3实验
2．5．1 对病毒的直接灭活作用：在药物无毒范围
内，不同浓度的含药维持液分别与100TClD；。腺病
毒液等量混合，37℃作用2h后，将其接种在
HeLa细胞已长成单层的96孔细胞培养板中，37℃
吸附2h后，弃上清，加维持液200fzL，每一浓度设
8个复孔，实验同时设细胞对照、病毒对照和病毒唑
(50／zg／mL)对照，置于5％CO。、37℃培养箱培
养。每日观察CPE。当病毒对照CPE达75％以上，
MTT法检测细胞存活率。实验重复3次。
2．5．2对病毒复制增殖的抑制作用：在长成单层的
HeLa细胞的96孔板上，每孔接种20肛L的
100TCID。。腺病毒液，37℃吸附2h，弃病毒液。在
药物无毒范围内加入不同浓度的含药维持液，每孔
200弘L，每一浓度设8个复孔，实验同时设细胞对
照、病毒对照和病毒唑(50／Mg／mL)对照，余方法同
2．5．1项。
2．5．3对病毒吸附的作用：在药物无毒范围内，不
同浓度的含药维持液分别与IOOTICD。。腺病毒液等
量混合后，立即加到已长成单层HeLa细胞的96孔
细胞培养板中，37℃吸附2h后，弃去96孔板中液
体，加维持液200弘L，每一浓度设8个复孔，实验同
时设细胞对照 病毒对照和病毒唑(50肛g／mL)对
照，余方法同2．5．1项。
2．5．4对腺病毒侵入细胞的阻断作用：在药物无毒
范围内，每孔细胞预先加入不同浓度的含药维持液
20 弘L，作用4h后用PBS洗涤3次，每孔再加入
IOOTCID。。腺病毒，吸附2h，弃病毒上清，加维持液
200弘L，每一浓度设8个复孔，实验同时设细胞对
照、病毒对照和病毒唑(50／tg／mL)对照，余方法同
2．5．1项。
2．6数据处理：用SPSSll．5软件处理。用Linear—
Regression方法计算药物半数中毒浓度(TC；。)、半
数有效浓度(IC 。)和对药物剂量与其产生的细胞
万方数据
中草喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月·1061·
效应(细胞存活率、抑制率)进行相关性分析，判断
是否存在量效关系。组间比较采用方差分析。HeLa
细胞存活率=药物组A值／细胞对照组A值×
100％，抑制率=1一存活率。病毒抑制率=(药物组
A值一病毒对照组A值)／(细胞对照组A值一病毒
对照组A值)×100％。治疗指数(TI)=TC。。／IC。。。
3结果
3．1 病毒毒力测定：采用Reed—Munch法计算
ADV3在HeLa细胞中的TCID。。为104’75，实验中
病毒攻击量为100TCID。。／lootLL。
3．2松针油对HeLa细胞的毒性作用：松针油对
HeLa细胞的毒性作用表现为细胞增殖缓慢、颗粒
较多、折光性强、形态改变、部分细胞破碎脱落。松针
油对细胞的毒性作用随着药物质量浓度的降低而降
低，细胞存活率逐渐增加。MTT结果表明，松针油
对HeLa细胞的毒性作用TC。。值为2．3mg／mL，最
大无毒浓度(TC。)为0．706mg／mL。
3．3松针油在HeLa细胞内抗ADV3实验结果
3．3．1对病毒的直接灭活作用：腺病毒感染所致的
HeLa细胞CPE特征为细胞肿胀、变圆、细胞间融
合、脱落、碎裂细胞呈典型葡萄串状。在松针油无毒
范围内，随质量浓度增加，腺病毒所致的CPE程度
降低，病毒抑制率与质量浓度呈正相关(见表1和
2)，抑制效果好于病毒唑(P
o．08mg／mL，TI为26．8。
表1松针油对ADV3的抑制作用
Table1 Inhibitionofessentialo lextracted
frompineneedlesonADV3
P／ 病毒抑制率／％
组别
⋯
．——_——————二—÷：-=’二二二————————-——一
(mg·mL_1)直接灭活复制增殖 吸附
松针捆0．656 81·4 72．9 67
0．328 71．7 59．6 49
0．164 60 58．8 34
0．08 48．8 58．6 31
0．04 39．4 52．2 22
0．02 19．6 48．1 6
0．01 5 38 Z
痘壹些 !：!§ !i i§ 2
3．3．2对病毒复制增殖的抑制作用：实验结果表
明，松针油能明显抑制腺病毒生物合成，表现在随着
松针油质量浓度的增加，细胞肿胀、变圆等典型
CPE特征逐渐减弱，细胞存活率明显升高，松针油
抑制CPE的作用随着质量浓度的增加而增强，抑制
效果优于病毒唑(P
表2松针油对ADV3CPE的影响
Table2 Effectofessentialo lextractedfrompine
needlesonCPEofADV3
“一”表不元细胞病变；“+”表不有Z5％细胞发生病变；“++”
表示有50％细胞发生病变；“+++”表示有75％细胞发生病变；
“++++”表示有100％细胞发生病变
Ⅳ一”indicatesnocellesion；”+”indicates25％celllesion；
”++“indicates50％cellesion|”+++”indicates75％cell
lesion；”++++”indicates100％ elllesion
3．3．3对病毒吸附的作用：每日观察CPE情况，随
着松针油质量浓度的增加，典型的CPE表现逐渐下
降，MTT结果显示抑制病毒增殖，抑制效果优于病
毒唑(P<0．01)，其对腺病毒的IC。。为0．23mg／
mL，TI为9．7。
3．3．4对腺病毒侵入细胞的阻断作用：松针油不同
质量浓度组均出现典型的CPE，MTT结果显示病
毒抑制率与病毒对照组差异无显著性(P>o．05)，
说明松针油对病毒侵入细胞均无阻断作用，对腺病
毒感染无预防作用。
4讨论
腺病毒是双链DNA病毒，感染十分普遍，引起
多种疾病，是儿童呼吸道感染的主要病原之一，个别
型别的腺病毒还会引起细胞转化，甚至致癌[s]。腺病
毒的传染性很强，尤其是在人口密集的地方，对免疫
力低下的患者(如老年人、骨髓移植患者、白血病、艾
滋病患者等)通过飞沫和接触传染，在同一时期可造
成区域性流行或暴发流行邙]。虽然人工自动免疫是
一种很好的预防措施，由于用作疫苗的某些常用腺
病毒能使动物转化，对人有致癌的潜在危险[7]，所以
推广减毒活疫苗受到很大的限制。病毒唑作为广谱
抗病毒药，被用于治疗腺病毒感染，但临床实际应用
中效果并不理想，由于目前尚无有效疫苗用于预防，
针对抗腺病毒的特异性药物还有待开发[8]。寻找一
种高效、安全、副作用少的抗病毒药物的研究势在必
行。目前的抗病毒化学合成药物由于在体内的毒性
和长期应用耐药性而限制了其临床应用。传统中药 万方数据
·1062· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第7期2007年7月
具有不良反应小、药源丰富、价格低廉、多靶点作用
机制、能调节机体免疫功能、抑制病毒复制、阻止病
毒致细胞病变、改善临床症状，在治疗病毒感染性疾
病上应用广泛，显示出了独特的优势和较好的应用
前景，筛选高效低毒的抗病毒中药是当前抗病毒研
究热点之一[9|。
松针为松科松属植物的叶，用药历史悠久，在古
代我国就已利用松针来治疗疾病。中医认为松针味
苦，性温，无毒，有祛风、活血、明目、安神、解毒、止
痒、去疲劳等功效。主治流行性感冒、风湿关节痛、跌
打肿痛、夜盲症、高血压、神经衰弱、冻疮、慢性支气
管炎等疾病。
本实验初步研究了松针油抗腺病毒ADV3的
作用效果。松针油对HeLa细胞的TC。。为2．3rag／
mL，TC。为0．706mg／mL，表明对细胞无明显的毒
性作用。MTT结果显示，松针油对ADV3有直接灭
活作用，而且随着质量浓度的升高，灭活作用增强，
说明药物可能具有直接杀伤病毒的作用，或者药物
中的某一天然化合物在体表能与腺病毒表面的某个
特征性部位相结合，使腺病毒很难进入细胞进行复
制。同时，松针油对抑制腺病毒在细胞内增殖有明显
的作用，而且优于对照组药物病毒唑，其作用机制可
能是抑制病毒核酸复制或阻止病毒蛋白合成。松针
油在病毒对细胞的吸附阶段也起到一定作用，可能
是腺病毒的纤突被破坏，阻止了病毒的吸附，使病毒
不能进入细胞内复制。松针油对病毒侵入细胞均无
阻断作用，说明松针油不能与细胞表面受体结合，从
而不能预防病毒的感染。松针油抗腺病毒作用机制
还有待进一步研究。
References：
[1]LenaertsL，NaesensL．Antiviraltherapyforadenovirus
infections[J]．AntiviralRes，2006，71：172—180．
E2]ZhengHX，LiuYG，QuZY，ela1．Purificationand
antigenicitydetection6frecombinanthexonfhumantype3
adenovirusEJ]．JHaer&nMedUniv(哈尔滨医科大学学
报)，2005，39(6)：471—478．
[3]Castro—RodriguezJA，DaszeniesC，GarciaM，eta1．
Adenoviruspneumoniininfantsandfactorsfordeveloping
bronchiolitisobl terans：a5-ye rfollow～upEJ]．Pediatr
Pulmonol，2006，41(10)：947—953．
E4]LiP，LiuYP．Theprogressofpineneedles口]．JChengdu
UnivTraditChinMed(成都中医药大学学报)，2001，24
(3)：49．
[5]AkaluA，LiebermannH．TheSubgenus—specificC—terminal
regionofproteinIX is locatedonthesurfaceof the
adenoviruseapsidEJ]．JVirol，1999，7：6182—6187．
[6]FraneisciD，MarroniM，MorosiS，eta1．Fatalh emolytic
uraemicsyndromeinanAIDSpatientwithdisseminated
adenovirusandcytomegalovirusCO—infection[J]．InfezMed，
2006，14(1)：37—40．
[7]NevelsM，TauberB，SprussT，eta1．Hit—and—runtrans—
formationbyadenovirusoncogenes[J]．JVirol，2001，75
(3)：89．
[8]ZarubaevVV，SlitaAV，KriviskayaVZ，et1．Direct
antiviraleffectofcyeloferon(10-carboxymethl一9一acridanone)
againstadenovirustype6 invitro[J]．AntiviralRes，2003，
58(2)：131．
E9]FangJG，TangJ．EffectofRadixIsatidisagainstherpes
simplexvirustypeIinvitro[J]．ChinTraditHerbDrugs
(中草药)，2005，36(2)：242—244．
金莲花醇提物体内抗病毒作用的实验研究
苏连杰，田鹤一，马英丽+
(黑龙江中医药大学药学院，黑龙江哈尔滨150040)
金莲花TrolliuschinensisBunge为毛茛科多年
生草本植物，以花入药，有清热解毒、抗菌消炎作用。
民间用以治疗扁桃体炎、急性中耳炎、急性结膜炎、
急性淋巴管炎等。近代药理研究表明，金莲花对绿脓
杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌等均有明显的抑制
作用。本实验研究金莲花醇提物对流感病毒感染小鼠
的保护作用，观察金莲花醇提物的体内抗病毒作用。
1材料
1．1 动物：NIH系小鼠，体重为13～15g，由黑龙
江中医药大学动物室提供。
1．2药品、试剂及仪器：受试药物为金莲花醇提物，
含总黄酮60％(UV)，使用时以蒸馏水配成所需浓
度。阳性对照药物为清热消炎宁胶囊[广州敬修堂
(药业)股份有限公司产品，批号010815]；病毒唑
收稿日期：2007—01—15
基金项目：黑龙江省科委攻关项目(G00C202302)；哈尔滨市科技攻关计划项目(2004AA3CSl70--1)
作者简介：苏连杰(1963一)，女，博士，教授，硕士研究生导师，主要从事中药药效学及质量标准的研究。E—mail：jimozheren@163．com
*通讯作者马英丽
**黑龙江中医药大学2004级硕士研究生
万方数据
松针油体外抗腺病毒作用研究
作者： 魏风香， 商蕾， 曲章义， 陈晶， 高虹， 王鹏， 张鸿彦
作者单位： 哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生微生物学教研室,黑龙江,哈尔滨,150081
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(7)
被引用次数： 5次
参考文献(9条)
1.Lenaerts L;Naesens L Antiviral therapy for adenovirus infections[外文期刊] 2006(2/3)
2.Zheng H X;Liu Y G;Qu Z Y Purification and antigenicity detection of recombinant hexon of human
type3 adenovirus[期刊论文]-哈尔滨医科大学学报 2005(06)
3.Castro-Rodriguez J A;Daszenies C;Garcia M Adenovirus pneumoni in infants and factors for
developing bronchiolitis obliterans:a 5-year follow～up[外文期刊] 2006(10)
4.Li P;Liu Y P The progress of pine needles 2001(03)
5.Akalu A;Liebermann H The Subgenus-specific C-terminalregion of protein Ⅸ is located on the
surface of the adenovirus capsid 1999
6.Francisci D;Marroni M;Morosi S Fatal haemolytic uraemic syndrome in an AIDS patient with
disseminated adenovirus and cytomegalovirus co-infection 2006(01)
7.Nevels M;Tauber B;Spruss T Hit-and-run transformation by adenovirus onco genes[外文期刊] 2001(03)
8.Zarubaev V V;Slita A V;Kriviskaya V Z Direct antiviral effect of cycloferon(10-carboxymethl-9-
acridanone)against adenovirus type 6 in vitro[外文期刊] 2003(02)
9.Fang J G;Tang J Effect of Radix Isatidis against herpes simplex virus type Ⅰ in vitro[期刊论文]-
中草药 2005(02)
本文读者也读过(10条)
1. 陈四文.汪受传.王文革.许冬青.王明艳 清肺口服液对腺病毒3I、7d诱导细胞凋亡调控作用研究[期刊论文]-中
医药信息2005,22(5)
2. 幸建华.杨占秋.邱国福.肖红 苦瓜提取液体外抗腺病毒的作用[期刊论文]-武汉大学学报(医学版)2004,25(6)
3. 陈四文.汪受传.王文革 清肺口服液多途径给药体外抗腺病毒3I 7b作用研究[期刊论文]-中医药学刊2005,23(9)
4. 王丽明.叶静.张广庆 耳尖放血疗法治疗流行性出血性结膜炎110例临床观察[期刊论文]-新中医2003,35(6)
5. 李慧娴.黄照国.凌俊 双黄连治疗流行性出血性结膜炎51例效果观察[期刊论文]-右江民族医学院学报
2009,31(1)
6. 孙宏昌 耳穴治疗流行性出血性结膜炎56例体会[期刊论文]-针灸临床杂志2001,17(1)
7. 段宣初.崔娟莲 全面认识红眼病[期刊论文]-中国药店2002(10)
8. 朱名树.孙长喜 竹山县擂鼓镇中学暴发急性出血性结膜炎的调查处理报告[期刊论文]-中国初级卫生保健
2004,18(5)
9. 张亚萍 清开灵注射液治疗流行性出血性结膜炎62例观察--附西药治疗58例对照[期刊论文]-浙江中医杂志
2003,38(6)
10. 刘晓红.邬靖.徐海滨 两起临时旅客列车急性出血性结膜炎的暴发调查[期刊论文]-疾病监测2008,23(3)
引证文献(5条)
1.张志琴.肖培云.刘光明 松针的化学成分和药理活性研究进展[期刊论文]-现代药物与临床 2011(4)
2.田玉红.李梓.梁才 拉雅松和细叶云南松松针挥发油的化学成分[期刊论文]-中国实验方剂学杂志 2012(1)
3.商蕾.曲章义.魏凤香.鲁伟君 中药及其活性成分抗腺病毒研究进展[期刊论文]-中草药 2012(10)
4.李聪.李鹏.李志浩.朱雪松.杨丽花 马尾松松针的研究概况[期刊论文]-国际中医中药杂志 2013(8)
5.刘东彦.石晓峰 药用松针的研究进展[期刊论文]-中药材 2012(10)
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200707037.aspx