全 文 ：中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月·1217·
蝉拟青霉总多糖对免疫抑制大鼠巨噬细胞激活作用的实验研究
金丽琴1，吕建新，杨介钻2，李东2，李安乐3
(1．温州医学院基础医学院生物化学教研室，浙江温州 325035；2．温州医学院检验医学院，
浙江温州 325035；3．温州医学院实验动物中心，浙江温州325035)
蝉拟青霉Paecilomycescicadidae(Miquel．)
Samson即我国传统中药蝉花L1’2]，与冬虫夏草的无
性型——中国拟青霉为同属真菌[2]，两者的化学成
分十分相似。虫草及其多糖的研究报道很多，但蝉拟
青霉及其多糖对正常及免疫抑制机体非特异性免疫
调节作用的研究国内外未见报道。本实验通过观察
蝉拟青霉总多糖(Paecilomycescicadidaepolysa—
ccharides，PCPS)对正常及环磷酰胺(cyt，．oxin
CTX)所致免疫抑制大鼠腹腔巨噬细胞(peritoneal
macrophages，PM①)、肺泡巨噬细胞(alveolar
macrophages，AM①)的吞噬功能、细胞转化功能及
其胞内和细胞培养液内酸性磷酸酶(acidphos—
phatase，ACP，EC3，1，3，2)和乳酸脱氢酶
(1actatedehydrogenase，LDH，EC1，1，1，27)活力
的调节作用以及对脾脏巨噬细胞形态结构的影响，
阐明PCPS对正常及CTX所致免疫抑制大鼠非特
异性免疫调节作用及其机制。
1材料
1．1 蝉拟青霉菌丝体：由浙江省科学院亚热带作物
研究所陈祝安研究员提供。
1．2 PCPS：制备见文献方法[3]。制备的总多糖用生
理盐水配制成50mg／mL溶液，用巴氏法消毒后分
装于10mL抗生素瓶冷冻(一20℃)保存备用。
1．3 主要试剂：噻唑蓝(MTT)Amresco分装；十
二烷基硫酸钠(SDS)Sigma公司产品；对硝基苯酚
磷酸酯，德国Merck公司；RPMI一1640美国
Gircobrl公司；植物血凝素(PHA)为上海伊华临
床医学科技公司产品。LDH测试盒由宁波慈城生化
试剂厂生产，批号为010415；ACP测试试剂为本室
自行配制；注射用CTX粉剂，上海华联制药有限公
司(批号为001206，200rag／瓶)，使用时以无菌注
射用水配成lOmg／mL。其余试剂均为国产分析纯。
1．4主要仪器：Hitach7170全自动生化分析仪；低
温离心机(Universal32R德国)；酶标仪∑960
(MetertechING)，LGJ0。5冷冻于燥器(北京四环
科学仪器厂)；H一600型透射电镜。
2 方法
2．1 实验动物分组及处理：清洁级(Ⅱ级)SD大
鼠由温州医学院实验动物中心提供。雄性SD大鼠
(6～7周龄，体重184～230g)24只，随机均分为4
组，每组6只，分笼饲养。NS对照组(sc2mL／kg)；
CTX组，se给药20mg／kg，第15天起改为SCNS；
CTX+PCPS组，后背部左侧SCCTX20mg／kg，第
8天起同时在后背部右侧SCPCPS(100mg／kg)，
于第15天起停用CTX，连续asPCPS至用药结束；
PCPS组(100mg／kg)。各组大鼠于同等条件下持
续给药3周。
2．2 AMO、PM中细胞灌洗与培养：方法及分装参
考文献方法[4]。但AM西、PM中浓度为2×106／mL。
2．3 AM西、PM中吞噬中性红试验：见参考文献方
法[4]。以A值表示M①摄取中性红的能力。
2．4 MTT比色法测定细胞转化率：方法见文献方
法[5]。在96孑L细胞培养板上，每组M中加10个复
孑L(100弘L／孑L)，其中8孑L每孑L再力口含PHA10弘g／
mL的RPMI一1640培养液100肚L为实验孑L，剩余
的两孔加不含PHA的RPMI一1640培养液为对照
孔。混匀后置37。C、5％CO：，孵育68h，取出培养
板，吸取每孔上清液100}￡L于EP管，然后加无菌
的MTT10gL／孑L(MTT，5mg／mL，用0．01mol／
L、pH7．4的磷酸盐缓冲液PBS配制)，混匀后继续
培养4h，培养结束时每孑L加10％SDS100弘L，充
分溶解静置10min后置酶标仪分别在波长570nm
和630nm下测定吸光度(A)值。以刺激指数
(stimulateind x，SI)判断细胞转化程度。
SI=(实验组以。一A。。。)／(对照组A。一A63。)
2．5 AM99和PM雪的破碎：参考文献方法[4]。制成
收稿日期：2006—11—23
基金项目：浙江省教育厅科研基金资助项目(20020471)；温州市“551”人才基金资助项目
作者简介：金丽琴(1963一)，女，浙江温州人，教授，硕士生导师，从事生化免疫药理学研究。
Tel：(0577)86689889E—mail：liqinjin@126．com
*通讯作者吕建新Tel／Fax：(0577)86689805E—mail：Ijx@wzmc．net
万方数据
·1218· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月
破碎的AMe#和PM①悬液，待测ACP、LDH活力。
2．6 ACP活力测定：参照文献方法[6]，酶活力单位
采用国际单位(U)。Mep悬液(含2×109／L)或细
胞培养上清液中ACP活力单位定义为：每升破碎
的MO悬液或细胞培养上清液在37℃、pH5．0条
件下每分钟水解1tzmol对硝基苯酚磷酸酯为对硝
基酚所需的酶量为1U。
2．7 LDH活力测定：按试剂盒说明书操作。M中悬
液或细胞培养上清液中LDH活力单位规定为：每
升破碎的M①悬液(含2×109个细胞)或细胞培养
上清液在37℃、每分钟使1／-mol乳酸转化为丙酮
酸所需的酶量为1U。
2．8细胞电镜检查：大鼠股动脉放血处死，取脾脏
组织，于2．5％戊二醛固定液中固定(o～4℃)，电
镜检测脾脏巨噬细胞。
2．9 统计学处理：数据用z4-s表示，采用SPSS
10．0的方差分析(One—WayAVONA)作总体差异
显著性分析，各组间两两比较采用方差分析下的
LSD法；两组间比较采用t检验。
3 结果
3．1 PCPS对免疫抑制大鼠AMO和PM①吞噬功
能的影响：各组大鼠AM西、PMO的吞噬功能用摄
取中性红的吸光度(A)值表示，见表1。CTX组大
鼠AM垂、PMq5的A值均显著低于对照组(P<
0．01)；PCPS组大鼠AMgP、PM①的A值均显示高
于对照组(P<0．05、0．01)；CTX+PCPS组大鼠
AM①、PM①的A值显著高于CTX组(P<0．01)，
与对照组比较差异无显著性(P>0．05)。提示
PCPS具有增强正常及CTX所致免疫抑制大鼠
AM垂和PM中吞噬功能的作用。
表1 PCPS对正常及免疫抑制大鼠AM垂和PM垂
吞噬功能的影响(；±s，露一6)
Table1 EffectofPCPSonphagocytosisofAM垂
andPM中innormalandimmune—
depressedrats(；±s，n一6)
组别
剂量／ A(540nm)
(mg·kg一1) AMe9 PMO
与对照组比较：’P<0．05～P
SI为指标，判断AM①、PMq5转化程度，各组大鼠
AM中、PM①的SI变化见表2。CTX组大鼠AM①、
PM①的SI均显著小于对照组(P<0．01)；PCPS
组大鼠AM中、PM∞的SI值均显著大于对照组
(P<0．01)；CTX+PCPS组大鼠AM中、PM中的SI
值均显著高于CTX组(P
常及CTX所致免疫抑制大鼠AMcb和PM①的转
化程度的作用。
表2各组大鼠AM雪和PM∞的SI(工±s，n一6)
Table2 SIofAM面andPM①ofrats(；±s，n一6)
剂量／ SI组别——
(mg·kg一1) AM西 PM垂
与对照组比较：一P
3．3 PCPS对免疫抑制大鼠巨噬细胞胞内酶活力
的影响：各组大鼠AM垂、PM圣中的ACP、LDH活
性，见表3。无论是AMcb还是PM①，CTX组ACP
和LDH活力均显著低于对照组(P<0．01、0．05、
0．01、0．01)；PCPS组ACP和LDH活力均显著高
于对照组(P<0．01、0．01、0．01、0．05)；CTX+
PCPS组ACP和LDH活力均高于CTX组(P<
0．01、0．05、0．01、0．01)；与对照组比较，CTX+
PCPS组ACP活力显著增高(P<0．01)，LDH活
力没有显著改变(P>o．05)。提示PCPS具有增强
正常及CTX所致免疫抑制大鼠AMcb、PMq5内的
ACP、LDH活力的作用。
3．4 PCPS对免疫抑制大鼠巨噬细胞培养液中酶
活力的影响：各组大鼠的AM雪、PM①在培养68h
后，细胞培养液上清液中ACP、LDH活力的变化见
表4。CTX组大鼠AMcb、PM①的细胞培养液中
ACP、LDH的活力均显著低于对照组(P<0．01)；
PCPS组AM垂、PM①的细胞培养液中ACP、LDH
的活力均显著高于对照组(P<0．01)；CTX+
PCPS组大鼠AMO、PM①细胞培养液中ACP、
LDH活力均显著高于CTX组(P
疫抑制大鼠AM中、PMq)细胞培养上清液中的
ACP、LDH活力的作用。
3．5 PCPS对免疫抑制大鼠脾脏巨噬细胞形态结
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月·1219·
表3各组大鼠AM雪和PM雪内ACP、LDH的活性(x±s，n=8)
Table3 ACPandLDHactivitiesinAM①andPM西ofratsineverygroups(；±s，辟一8)
与对照组比较：+P
Table4 ACPandLDHactivitiesinAM雪andPM∞culturalfluidofrats(x_s，n=8)
与对照组比较：一P
构正常，胞质内溶酶体较少，免疫细胞内粗面型内质
网丰富且扩张；CTX组大鼠脾脏M垂核膜局灶性扩
张，且轻度水肿、胞质淡染，细胞处于静息状态；
CTX+PCPS组与CTX比较，大鼠脾淋巴细胞内线
粒体轻度扩张、数量增多，淋巴细胞胞体增大、核膜
完整，可见免疫母细胞增生；PCPS组大鼠脾免疫细
胞增生，免疫母细胞核大、核仁明显，胞质内多数游
离核糖体，且数量增多，细胞大多呈激活状态。结果
提示PCPS能保护免疫抑制状态大鼠脾脏M①形
态结构及细胞器结构的完整性；对正常免疫功能的
大鼠脾内免疫细胞具有激活作用。
4讨论
M中是一种具有多种功能的免疫细胞。正常情
况下，Mep处于休眠状态。M中的激活是M①实现其
抑制肿瘤、胞内杀菌、胞外溶瘤、吞噬和胞饮等多种
功能的基础。细胞转化试验是检测细胞免疫功能最
基本的体外试验，细胞转化反应是机体内免疫系统
的重要表现。其转化率的高低是反映机体的细胞免
疫功能和免疫状态的重要指标之一。本实验显示
PCPS使正常大鼠AM①、PM回吞噬功能和SI显著
上升；表明PCPS能增强正常大鼠的吞噬与转化功
能，激活AMO、PM①，提高机体的免疫能力。PCPS
还使CTX所致免疫抑制大鼠AM垂、PMq5吞噬功
能和SI的降低基本恢复正常水平，表明PCPS对
CTX所致的免疫抑制具有拮抗作用。
ACP是M垂溶酶体的标志酶，也是M中激活
的标志酶。ACP活性随着Mep的激活而升高，又随
着M①的抑制而降低口~9]。LDH是细胞内葡萄糖酵
锯所必需的酶，LDH活性增强可促进细胞内葡萄糖
的酵解。M①吞噬过程中所需的能量主要来自于糖
酵解，同时酵解过程中产生的乳酸使M中内pH值
下降，有利于M①的杀菌。故LDH活性与M①激活
的程度相关，被认为是M西激活的标志之一[10|。因
此M中内的ACP、LDH上调被认为是M①激活的
标志。本研究结果显示，PCPS使正常大鼠AM中、
PM①中的ACP、LDH活力显著升高，表明PCPS能
激活AM中、PMgP细胞，具有免疫增强作用。PCPS
还使CTX所致免疫抑制大鼠AMff)、PM垂中的
ACP、LDH活力的降低显著上升，恢复到正常水平
或超过正常水平，再次表明PCPS对CTX所致的免
疫抑制具有拮抗作用。
PCPS使正常及CTX所致免疫抑制大鼠
AMCP、PM中细胞培养上清液中的ACP、LDH活力
显著升高，这结果与AMep、PM①胞内ACP、LDH
活力的变化基本一致。这是由于AM①、PMO胞内
升高的ACP、LDH向胞外渗透的缘故。
脾是人体最大的外周淋巴组织器官，是机体主
要免疫器官。PCPS使正常大鼠脾免疫细胞增生，表
明PCPS对大鼠脾内免疫细胞具有激活作用。CTX
使大鼠脾脏MO核膜局灶性扩张，且轻度水肿、胞
质淡染，细胞处于静息状态；而PCPS使CTX所致
免疫抑制大鼠脾脏淋巴细胞内线粒体轻度扩张、数
量增多，淋巴细胞胞体增大、核膜完整，免疫母细胞
万方数据
·1220· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第8期2007年8月
增生，也表明PCPS对CTX所致的免疫抑制具有拮
抗作用。
PCPS可拮抗CTX所致的免疫抑制，使其免疫
功能恢复正常或接近于正常。因此认为，PCPS可作
为一种新的生物反应调节剂，在肿瘤生物治疗中可
与CTX之类的免疫抑制药物同时使用，以阻遏肿
瘤患者在放疗、化疗中免疫功能的进一步下降。这有
待于进一步深入研究。
由于多糖类化合物对机体的免疫作用具有双向
调节性，且具有剂量效应。不同剂量PCPS激活大鼠
巨噬细胞的作用有差异，以100mg／kg剂量作用最
为明显[11|，因此本实验用100mg／kg剂量的PCPS
处理大鼠。
实验提取制备的蝉拟青霉活性物质是总多糖，
成分复杂，本实验初步研究阐明了总多糖对正常及
CTX所致免疫抑制大鼠巨噬细胞的免疫调节作用。
由于多糖对机体的免疫调节作用具有构效关系，因
此对总多糖进一步进行分离、提取、纯化，以获得各
种单一的多糖组分，深入研究多糖分子结构和生物
活性的关系，从结构与活性两方面论证PCPS的药
理作用，是本实验组继续研究的工作。
References：
[1]LiuB．TheEpiphytesasM dicineinChina(中国药用真菌)
rM]．Taiyuan：ShanxiPeople
7
SPublishingHouse，1974．
[2]XuJT．nP印iphytesasMedicineinChina(中国药用真菌
学)[M]．Beijing：BeijingMedicalUniversityandPeking
UnionMedicalCo legeUnitedPublishingHouse，1997．
[3]JinLQ，LuJX，YangJz，eta1．Effectsofpaecilomyces
cicadidaetotalpolysaccharidesonnon— pecificityimmune
regulationinrats口]．ChinJPathophysiol(中国病理生理杂
志)，2001，17(12)：1232—1235．
F4]ChenXF，JinLQ，LnJX，eta1．Theactivativeeff ctof
Paecilomycescicadaeonperitonealand veolarm crophages
ofrats[J]．ChinJPathophysiol(中国病理生理杂志)，
2002，18(6)：694—697．
[5]SiCP．ExperimentofM dicalImmunity(医学免疫学实验)
[M]．Beijing：People
7
SM dicalPublishingHouse，1998．
[6]WangxW．LaboratoryTechnologyofClinicBiochemistry
(临床生化检验技术)I-M]．Nanjing：NanjingUniversity
Press．1995．
[7]LnJX，JinLQ，ChenGR，eta1．Theactivatedeffectof
PaecilomycestenuipesonperitonealmacrophageofratsEJ]．
ChinJImmunol(中国免疫学杂志)，1997，13(3)：139—141．
r8]SchirrmacherV，BaiL，UmanskyV，eta1．Newcastle
diseasevirusactivatesmacrophagesforanti—tumoractivity
[J]．IntJOncol，2000。16(2)：363—373．
E9]GarciaI，GulerR，VesinD，et口f．LethalMycobacterium
bovisBacillusCalmetteGH rinfectioninnitricoxide
synthase2-deficientmice：cell—mediatedimmunityrequires
nitricoxidesynthase2 LJj．LabInvest，2000，80(9)：1385一
1397．
[10]CohnzA．Theactivationofm nonuclearphagocytes：Fact，
fancy，andfuture[J]．JImmunol，1978，121(3)：813—815．
In]YangJz，JinLQ，LnJX，eta1．Immunomodulationof
paecilomycescicadidaepolysaccharidesonimmunefunctionof
rats[J]．ChinJPathophysiol(中国病理生理杂志)，2005，
21(3)：588—59】．
人工发酵虫草茵丝体干粉在糖尿病大鼠肾脏组织中的抗纤维化作用
王战建，王书畅‘
(河北医科大学第三医院内分泌科，河北石家庄050051)
在糖尿病肾病的进展中，转化生长因子一p
(TGF一口)作为关键性的细胞因子，介导糖尿病诱生
的系膜区基质沉积[11；其表达增多与肾小球硬化、肾
动脉玻璃样变性、肾小管间质纤维化密切相关。人工
发酵虫草菌丝体干粉[冬虫夏草Cordycepssinen is
(Berk．)Sate．的人工发酵制品，后文简称cs]作为
祖国传统中药冬虫夏草代用品，在临床治疗糖尿病
肾病中应用较普遍，但其作用机制尚未阐明。本研究
拟通过观察CS对糖尿病大鼠肾脏TGF—B表达的
影响，来探讨其对糖尿病肾病的治疗机制。
1材料
1．1 动物：雄性SD大鼠，8周龄，共60只，体重
180～200g，河北医科大学实验动物中心提供。
1．2药物、试剂与仪器：CS(商品名百令胶囊，主要
成分为总氨基酸不少于300mg／g、甘露醇不少于
70mg／g、腺苷不少于0．80mg／g，杭州中美华东有
限公司提供。)TGF—p抗体、DAB显色剂、PV9001
均购自Sigma公司；尿白蛋白放免分析试剂盒(山
东潍坊三维生物工程集团有限公司)；链脲佐菌素
(STZ，美国Sigma公司)；UV一2550紫外分光光度
收稿日期：2006—11一03
基金项目：河北省中医药管理局科研立项项目(05172)
作者简介：王战建，女，河北保定人，主任医师，教授，硕士，研究方向为糖尿病及其慢性并发症的研究。Tel：(0311)87027951—3036
*通讯作者王书畅E—mail：wang—sy2007@163．corn
万方数据
蝉拟青霉总多糖对免疫抑制大鼠巨噬细胞激活作用的实验研
究
作者： 金丽琴， 吕建新， 杨介钻， 李东， 李安乐
作者单位： 金丽琴(温州医学院基础医学院,生物化学教研室,浙江,温州,325035)， 吕建新,杨介钻,李
东(温州医学院检验医学院,浙江,温州,325035)， 李安乐(温州医学院,实验动物中心,浙江
,温州,325035)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(8)
被引用次数： 3次
参考文献(11条)
1.Liu B The Epiphytes as Medicine in China 1974
2.Xu J T The Epiphytes as Medicine in China 1997
3.Jin L Q;Lü J X;Yang J Z Effects of paecilomyces cicadidae total polysaccharides on non-specificity
immune regulation in rats[期刊论文]-Chinese Journal of Pathophysiology 2001(12)
4.Chen X F;Jin L Q;Lü J X The activative effect of Paecilomyces cicadae on peritoneal and alveolar
macrophages of rats[期刊论文]-Chinese Journal of Pathophysiology 2002(06)
5.Si C P 医学免疫学实验 1998
6.Wang X W 临床生化检验技术 1995
7.Lü J X;Jin L Q;Chen G R The activated effect of Paecilomyces tenuipes on peritoneal macrophage of
rats 1997(03)
8.Schirrmacher V;Bai L;Umansky V Newcastle disease virus activates macrophages for anti-tumor
activity[外文期刊] 2000(02)
9.Garcia I;Guler R;Vesin D Lethal Mycobacterium bovis Bacillus Calmette Guerin infection in nitric
oxide synthase 2-deficient mice:cell-mediated immunity requires nitric oxide synthase 2 2000(09)
10.Cohn Z A The activation of mononuclear phagocytes:Fact,fancy,and future 1978(03)
11.Yang J Z;Jin L Q;Lü J X Immunomodulation of paecilomyces cicadidae polysaccharides on immune
function of rats[期刊论文]-Chinese Journal of Pathophysiology 2005(03)
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1. 王砚.赵小京.唐法娣 蝉花药理作用的初步探讨[期刊论文]-浙江中医杂志2001,36(5)
2. 秦葵.陈红英 蝉花的研究概况[期刊论文]-基层中药杂志2002,16(6)
3. 刘爱英.胡海燕.罗力.邹晓 蝉花及其分离真菌的形态多样性(摘要)[会议论文]-2008
4. 罗靖.宋捷民 中药蝉花的本草学考证[期刊论文]-江西中医学院学报2007,19(6)
5. 陈玲.宋捷民 蝉花的研究进展[期刊论文]-中国中医药科技2009,16(2)
6. 冯立才 上海天马山蝉花的初步研究[期刊论文]-上海应用技术学院学报(自然科学版)2002,2(2)
7. 王海颖.陈以平 陈以平教授巧用蝉花经验[期刊论文]-中国中医药信息杂志2000,7(10)
8. 许洪义.朱燕.程东庆 中药蝉花的研究进展[期刊论文]-中医药信息2008,25(5)
9. 胡海燕.邹晓.罗力.刘爱英 传统中药蝉花的家蚕人工培养[会议论文]-2008
10. 陈柏坤.杨介钻.卓佳.李安乐.金丽琴 蝉拟青霉多糖对免疫抑制大鼠脾细胞促增殖作用及其机制的研究[期刊论
文]-中国免疫学杂志2007,23(6)
引证文献(3条)
1.张长城.赵海霞.姜美杰.王洪武.何毓敏.曾晓.袁丁 竹节参多糖对环磷酰胺致免疫低下小鼠的恢复作用研究[期刊
论文]-中药材 2011(1)
2.裘洁.宋捷民 蝉花的药理作用研究进展[期刊论文]-中国民族民间医药 2009(9)
3.李挺.宋斌.林群英 蝉花的研究进展[期刊论文]-中药材 2008(9)
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