全 文 ：·908· 中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月
表1红景天苷对全脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织
TNF—q水平的影响(；土s，H一6)
Table1 EffectofsalidrosidenTNFdlevelinbrain
tissueofglobalischemia—reperfuslon
injuriedrats(J土j，月一6)
与假手术组比较：60P△△P<0．01圳ShamgroupI+。P<001讲modelgroup
在夜班时间中的疲劳状态，结果证明玫瑰红景天能
够缓解处在压力状态下的大脑中枢疲劳。脑组织容
易遭受缺血再灌注损伤，其中炎症反应起重要的介
导作用“]。脑缺血再灌注可激活TNFn的合成机
制，使其过度表达。TNF—a足细胞问黏附分子一1
(ICAM一1)的调控因子，其过度表达可进一步促进
血管内皮细胞合成ICAMl，增强中性粒细胞一血管
内皮细胞的相互作用，加重脑缺血再灌注和炎症反
应的损伤。“。在脑组织中，TNFa主要由胶质细胞
与神经细胞产生。史朗峰等Cto]研究证实，脑缺血再
灌注大鼠脑组织TNF—amRNA和IL～1pmRNA
表达水平明显升高。Lavine等“”发现前脑室注射
TNFa单克隆抗体，可阻断内源性TNF—n活性，显
著降低脑缺血再灌注引起的脑水肿及损伤‘“】。本研
究中红景天苷可减少全脑缺血再灌注后脑组织中
TNFa的蛋白表达，可能是其发挥脑保护作用的机
制之一。红景天苷通过何种途径抑制TNF一“的产
生。尚待进一步的研究。
致谢：张文成教授和陈燕副主任技师的指导与
帮助。
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蓝萼甲素对小鼠脾细胞内游离钙离子浓度的影响
陈子嚣1，李云森2，周吉燕1，曹露哗3，胡月娟1，李仪奎3
(1上海中医药大学中药研究所药理二室，上海201203；2．中国科学院上海药物研究所，上海201203
3．上海中医药大学科技宴验中心，上海201203)
蓝萼甲素是由唇形科香茶菜属植物香茶莱
lfabdosiaamethystoieds(Benth．，Hara中分离提取
出的二萜化合物。前期的实验研究表明，香茶菜能显
著抑制细胞免疫反应而增加体液免疫反应。应用药
理与化学密切合作的研究方法，以活性评价为导向，
对香茶菜影响免疫功能的活性物质进行追踪分离，
收稿日期：200510—2Ci
荐套蔷界!躁李碧巷妻尝j髫{鬻登蔷籍蠡塞蝥恶嵩学挈鬈型§管嫠薯§曼i掣警釜詈碧盒霉篮装备士学位，现就职于上海中医药大学
中药研究所，丰受从事中药免疫药理研究。’Iel：(021)51322496Email：zichen21@yahoo．corn．en
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月·909·
获得了具有免疫活性的化学单体蓝萼甲素。在对小
鼠脾细胞增殖影响的实验中，观察到蓝萼甲素对伴
刀豆蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠
脾脏淋巴细胞增殖以及混合淋巴细胞培养反应具有
抑制作用一“。为进一步探讨蓝萼甲素对免疫功能的
影响，本实验应用钙荧光指标剂Fura2／AM测定
小鼠脾脏淋巴细胞内游离钙离子浓度，以观察蓝萼
甲素对其的影响。
1材料
1．1 药品与试剂：蓝萼甲素(质量分数98％)，由
中国科学院上海药物研究所制备；Fura一2／AM
(Caibiochem)；Triton—X一100(Sigma公司)；二醇
二乙醚二胺四乙醇(EGTA，上海实生细胞生物技
术有限公司，SERVA分装)；牛血清白蛋白(BsA，
上海实生细胞生物技术有限公司)；ConA(Sigma
公司)。
1．2 仪器：DSHZ300多用途水浴恒温振荡器
(江苏太仓市实验设备厂)；荧光分光光度计(F^一
4500，日本日立)，附岛津TB85恒温水浴。
1．3 动物：健康昆明种小鼠，体重(20土2)g，雄
性，由上海中医药大学实验动物中心提供。
2方法
2．1小鼠脾细胞悬液的制备o]：将小鼠摘眼球放血
后脱颈处死，取出脾脏，按常规制成单细胞悬液，用
无Ca”、M92+的Hank’S液洗2次后，用禽0．2％
BSA与Ca”、Mg”的Hank‘S液重悬细胞，调细胞
浓度至l×10r／mI，，备用。
2．2 Fura一2／AM负载7“：取l×107／mL的小鼠脾
细胞悬液2mL，37℃预温10min，加500ffmol／L
的Fura一2／AM20J-L(Fura一2／AM终浓度为5
umol／L)，于37C恒温振荡30min。负载后的脾细
胞用含0．2％BSA和Ca”、M92+的Hank’s液洗2
次，调细胞浓度至3×100／mL。测定前细胞预先在
37c复温2～3min。
2．3荧光测定：将负载Fura一2／AM的脾细胞加
100、10、lmg／L蓝萼甲素和ConA(终质量浓度为
5／tg／mL)后，采用F4500荧光分光光度计及
F 4500IntracellularCationMesurementSystem
生化离子计算系统软件进行数据的采集和处理。测
定条件：激发波长和发射波长的狭缝宽度分别为5、
10nlTl，激发波长分别为340和380nnl，发射波长
为510nm，激发波长变换时间为1．9S，测定时仪器
呵同时收集静息时、’lxiton—X—100加入及EGTA加
入后及校正中的340、380nm的荧光强度和二者的
比值(R)，测定完毕后仪器软件可根据公式：
[Ca2+]，一Kd(Fmm／F一)(R—R一)／(R⋯一R)，直接给出胞浆内游离Ca抖的浓度(nmol／L)⋯R。和
R。。分别为最大和最小荧光强度比值，即在细胞外
液钙离子浓度大于1mmol／L情况下分别加入终浓
度为0．1％Txiton—x一100和高于2倍细胞外液钙
离子浓度的EGTA(pH>8．5)后所测得的340和
380nm的荧光强度比值；F。。和F⋯分别为Fura一2
在游离状态下和饱和状态下380nm测得的荧光强
度。测定时或加药后均用吸管吹吸细胞悬液数次，以
使细胞分布均匀。加药各组均于37℃水浴中平衡
10rain后上机检测n“]。
2．4数据处理及统计：数据均以a2±S表示．采用
SPSSl0．0统计软件进行方差分析。
3结果
3．1静息状态(对照)下小鼠脾细胞[Ca2+]。测定结
果：在细胞外Ca2+浓度为1．3mmol／1．情况下，应
用Fura一2／AM双波长荧光法测得的静息状态下小
鼠脾细胞[-Ca2‘]．为(100．5土25．1)nmol／I。。此结
果与文献报道基本一致o]。
3．2 ConA活化状态下小鼠脾细胞[Ca“]，：应用
Fura2／AM双波长荧光法测得ConA状态下小鼠
脾细胞[Ca”]．为(211．3土35．o)nmol／L，较静息
状态下明显升高。
3．3蓝萼甲素对ConA活化的小鼠脾细胞ECa2+]，
的影响：加入不同质量浓度的蓝萼甲索，与ConA组
相比可见有[Ca2+]．降低，其中以终质量浓度为100
mg／L时下降最为明显(尸表1蓝萼甲索对小鼠脾脏淋巴细胞[ca2+]-的影响
(；土s，H一6)
Table1 EffectofglaucocalyxinAOll[ca2+1
insplenocytesofmice(；土j，n一6)
与对朋组比较：’P<0．05一j’<01
与ConA组比较：6P<0．05
’P<05。。P<0．01WScontrolgroup
6P<005YBConAgroup
4讨论
Ca2+作为第二信使，在细胞活动中占有重要的
地位。细胞内Ca’浓度的升高，是淋巴细胞激活和
增殖早期呈现的一个重要现象，这个过程主要发生
万方数据
·910· 中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDrags第37卷第6期2006年6月
在细胞受到刺激剂激活的最初几十秒到几分钟内。
细胞[Ca”]，迅速升高，可激活钙调蛋白激酶；使一
系列特异蛋白底物的磷酸化水平增加，其中包括细
胞因子的转录因子，如核因子*B(NF”B)，使细胞
因子的mRNA水平升高，大量细胞因子生成。本研
究发现，小鼠脾脏淋巴细胞被ConA激活后，细胞
[Ca”]．增高。蓝萼甲素可降低[Ca2+]。，使之接近正
常水平，进而可能抑制与细胞因子有关的基因的表
达，从而抑制T细胞增殖。以往研究表明蓝萼甲素
具有免疫抑制作用，蓝萼甲素抑制小鼠脾脏淋巴细
胞内钙释放可能是其产生免疫抑制作用的机制
之一。
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苦味叶下珠不同制剂对鸭体内乙肝病毒的抑制作用
韩林，梁睿敏，刘斌
(北京汉典中西药研究开发中心，北京100071)
苦味叶下珠Phyllanthusa?llaru5Schum．et
Thonn，为大戟科叶下珠属植物，昧苦、性凉，具有
清肝明日、收敛利水和解毒的功效o]。1982年印度
学者Thyagajan等首次报道苦味叶下珠体外对
HBsAg(乙型肝炎病毒表面抗原)有灭活作用o]，
引起国内外研究的热潮，被认为是一种极具潜力的
抗乙肝药物。苦味叶下珠含有大量化合物，主要包括
酚类、三萜类及生物碱类物质o]，初步研究表明鞣质
为主要活性成分，但是目前尚无统一的质量标准。有
关苦昧叶下珠的基础及临床研究日渐增多，但是结
论不一，药材的产地和制剂都对活性产生很大的影
响。目前国内还没有对此进行系统的比较研究。为
了研究制剂对药物活性的影响，为苫味叶下珠药物
生产提供依据，本实验选用云南景洪产苦味叶下珠
作为药物原料．分别采用提取和粉碎的方法获得受
试药物，比较两种制剂体内抗鸭乙型肝炎病毒
(DHBV)活性的差异。
1材料
1．1动物：1日龄北京鸭，购自北京前进种鸭饲
养场。
1．2药物：苦味叶下珠采自云南西双版纳景洪，经
中国中医研究院胡世林老师鉴定为大戟科植物苦味
叶下珠。苦味叶下珠粉剂(P1，苦味叶下珠全草粉
碎，过80目筛，经分光光度法及滴定法测定，含鞣
质2．48％)、苦味叶下珠提取剂(P2，苦味叶下珠粉
末先用80％乙醇回流提取1．5h，提取3次，合并
提取液，浓缩；提取残渣继续用水煮3次，每次1．5
h，合并水液，浓缩。两次浓缩液合并得到苦味叶下
珠提取液，质量浓度为0．5mg／mL，含鞣质
2．87％)均为自制；阳性药物拉米夫定(葛兰素威
康制药公司，批号00211004)。
1．3主要试剂：鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV
DNA)强阳性鸭血清(采自上海麻鸭，一70c保
存)；n32pdcTP(北京福瑞生物技术工程公司)；
作,投稿者简t3卉101：,韩2005林-1(ji9f63一)。女。山东人．工程师．执业药师，研究方向为中药、化学药品及生物制品等新药研究开发
万方数据
蓝萼甲素对小鼠脾细胞内游离钙离子浓度的影响
作者： 陈子珺， 李云森， 周吉燕， 曹露晔， 胡月娟， 李仪奎
作者单位： 陈子珺,周吉燕,胡月娟(上海中医药大学中药研究所,药理二室,上海,201203)， 李云森(中
国科学院上海药物研究所,上海,201203)， 曹露晔,李仪奎(上海中医药大学,科技实验中心
,上海,201203)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(6)
被引用次数： 3次

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