全 文 ：·1008· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月
2．8．1精密性试验：取供试品溶液连续进样5次，
按以上方法香丹注射液高效液相色谱指纹谱各色谱
峰的相对峰面积和相对保留时间RSD均在2％内。
2．8．2稳定性试验：取供试品溶液分别在0、2、8、
16h进样测定，结果高效液相色谱指纹谱各色谱峰
的相对峰面积和相对保留时间RSD均在3％内。
3讨论
3．1气相色谱指纹图谱部分
3．1．1预处理方法的选择：根据实验结果，香丹注
射液不适合于顶空处理。因为香丹注射液中降香挥
发油组分极其微量，致使顶空处理无法收到较好的
效果。因此香丹注射液气相色谱样品预处理采用有
机溶剂萃取。
3．1．2萃取溶剂的确定：实验过程中选用了3种溶
剂(乙醚、二氯甲烷和正己烷)处理香丹注射液。从萃
取的效果看，乙醚与二氯甲烷相近，但都优于正己
烷，挥发性组分在正己烷中的溶解性较差，二氯甲烷
能够萃取得到香草醛，乙醚萃取液中未能找到香草
醛。根据萃取过程的简易程度，二氯甲烷做萃取剂时
不易乳化、层次分明和省时。乙醚萃取时则较易乳
化，使得操作过程烦琐，重现性差。因此二氯甲烷适
合萃取香丹注射液中挥发油的组分。
3．1．3香丹注射液中挥发油成分组成：经GC—MS
分析，香丹注射液中存在少量的香草醛、苦橙油醇和
4种氧化苦橙油醇。
3．1．4本实验针对香丹注射液中挥发油组分建立了
香丹注射液的气相色谱指纹图谱的分析方法，并对此
分析方法进行方法学考察，各峰相对峰面积和相对保
留时间的相对标准偏差除个别峰外均小于5％，表明
该法适合于香丹注射液气相色谱指纹图谱的分析。
3．2液相色谱指纹图谱部分
3．2．1pH值对分离的影响：采用pH2．25、2．5、
3．0流动相对香丹注射液液相色谱分离进行考察，
发现流动相pH值越低，分离效果越好。但考虑到色
谱柱的pH极限，本方法选用pH2．5的流动相。
3．2．2三氟醋酸与磷酸对分离的影响：考察了三氟
醋酸与磷酸对香丹注射液分离的影响，结果表明流
动相中添an-氟醋酸比磷酸分离效果好。
3．3香丹注射液中组分的定性：实验采用对照品、
紫外光谱法和液相色谱一质谱法对香丹注射液各组
分进行定性，香丹注射液中存在丹参素、原儿茶酸、
原儿茶醛、咖啡酸、丹酚酸A、2种丹酚酸B异构体、
丹酚酸C。综合上述结果，将香丹注射液指纹图谱划
分为4部分：多羟基酚类化合物及鞣质类化合物、小
分子酚酸化合物、丹酚酸类化合物和脂溶性化合物。
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分析用银杏内酯对照品的制备研究
王 帆1，胡小钟1，王 婷2，杨尔宁2
(1．湖北出入境检验检疫局，湖北武汉430022；2．华中农业大学，湖北武汉430070)
摘 要：目的 研究银杏内酯制备提纯的工艺。方法 银杏叶提取物(EGb)经柱色谱制备出半成品，以HPLC法制
备分离。结果 同时得到银杏内酯A、B、C和白果内酯纯品。结论达到分析用对照品的要求。
关键词：银杏内酯；对照品；制备
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2005)07—1008—03
Preparationofg nkgolidereferencesubstanceforanalysis
WANGFanl，HUXiao—zhon91，WANGTin92，YANGEr—nin92
(1．HubeiEntry—ExitInspectionandQuarantineBur au，Wuhan430022，China；
2．HuazhongAgricultureUniversity，Wuhan430070，China)
Keywords：ginkgolide；referencesubstance；preparation
收稿日期：2004—10—10
基金项目：国家质量监督检验检疫总局资助课题(B034；035；036；037--2000)
作者简介：王帆(1963一)，男，浙江嘉兴人，工程师，主要从事进出口商品化学分析的研究。E—mail：wangfan@hbciq．gov．cn
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月·1009·
银杏内酯的分离方法有溶剂萃取法和柱色谱法，
或两者相结合[1’2]。单纯以溶剂萃取结晶，不可能得到
高纯度的内酯单体，普通的柱色谱技术也很难分离出
质量分数大于95％的对照品。目前，国内在检测中使
用的银杏内酯对照品主要从国外公司购买，但价格昂
贵。按照本实验提出的制备工艺，在设备上加以放大，
各内酯成分可以达到克级制备水平，并且制备出的银
杏内酯对照品成本低，各项技术指标完全满足作为对
照品的要求，达到了研究的预期目的。
1材料与仪器
银杏叶提取物由湖北省随州活化石生物保健工
程有限公司生产，批号20020114。甲醇(色谱纯)，酸
性氧化铝(100～200目，色谱用)，聚酰胺(80～100
目，色谱用)，溴化钾(光谱纯)，其他试剂均为分析纯。
Prostar210制备液相色谱仪(瓦里安公司)，
UV一265FW紫外光谱仪(岛津公司)，260一10红
外光谱仪(日立公司)，1100LC／MSDTrap液质联用
仪(安捷伦公司)。
2实验方法
2．1混合内酯的分离和纯化：经活化的酸性氧化铝
于法填装于色谱柱中，每次称银杏叶提取物10g，用
50mL甲醇加热溶解后上柱，采用无水乙醇为洗脱
溶剂洗脱。收集洗脱液减压浓缩(≤50℃)，于4℃
冰箱中重复结晶两次。将所得到浅黄色结晶再溶于
无水乙醇一丙酮(60：40)中，用无水乙醇一丙酮(60：
40)为洗脱溶剂重复上述柱色谱分离及结晶操作，得
到含有银杏内酯A(GA)、银杏内酯B(GB)、银杏内
酯C(GC)和白果内酯(BB)的白色混合结晶。100g
银杏叶提取物经上述两次分离后，最终得白色混合
内酯结晶2．96g(收得率约为3％)，银杏叶提取物
和混合结晶中内酯分析结果见表1。
表1 EGb和混合结晶中内酯分析
Table1 Analyticalresultoflactonei EGb
andmixedcrystal
2．2高效液相色谱制备
2．2．1 制备高效液相色谱的条件：Shim—Pack
Prep—ODS色谱柱(250mm×20mm，10弘m)；柱
温：25℃；流动相：28％甲醇水溶液；体积流量：8．0
mL／min；示差折光检测器，灵敏度：2．56×10叫
RIU；进样体积：200弘L，组分收集器启动信号的门
坎值为40mV。
2．2．2方法：将上述混合内酯结晶用20mL甲醇
溶解，经过0．45／_tm的膜滤过，供制备色谱用。混合
内酯的高效液相色谱制备分离图见图1。在所选择
的色谱条件下各成分达到基线分离，色谱峰的阴影
部分表示组分收集器收集到的洗脱液区带，在87次
制备分离后，得到组分I 3．5L，组分Ⅱ4．2L，组分
Ⅲ10．5L，组分Ⅳ23．5L。将收集到的组分洗脱液
减压浓缩(≤50℃)并在4℃冰箱中重复结晶两次，
结晶置真空干燥箱中(45℃)干燥至恒重。最终得银
杏内酯A176mg、银杏内酯B457mg、银杏内酯C
78mg、白果内酯91mg，供定性鉴定和纯度分析。
50 75 100
r／mln
1一白果内酯 i一银否内酯C I一银否内酯AIV一银杏内酯B
1-bilobalideI—ginkgolideC11-ginkgolideA17一ginkgolideB
图1混合内酯的制备HPLC色谱图
Fig．1PreparativeHPLCehromatograms
ofmixedLactone
2．3银杏内酯鉴定
2．3．1银杏内酯定性分析：根据与对照品的比较及
文献报道[3“]，各组分在UV、IR、ESI—LC／MS分析
图谱上的特征峰鉴定其分别是白果内酯、银杏内酯
C、银杏内酯A、银杏内酯B(表2)。
表2各组分的图谱数据
Table2 Spectraldataofcomponents
鉴定项目 组分I 组分I 组分I 组分IV
紧外光谱Ghnax，nm)203·2 205·8 205·2 207·4
红外光谱(cm．1) 3450，I7603450，l7603450，17603450，1760
质谱(m止) 325，2 439．4 407，2 423．2
液相色谱 单一峰 单一峰 单一峰 单一峰
鉴别 白果内酯 银杏内酯C银杏内酯A银杏内酯B
2．3．2银杏内酯定量分析：用HPLC—UV法对各
组分进行定量分析。高效液相色谱的条件：CLC—
ODS色谱柱(150mm×6．0mm，5弘m)；柱温：25
℃；流动相：甲醇一水(38：62)；体积流量：1mL／
rain；紫外检测器的检测波长：220nm。采用色谱峰
面积归一法计算各组分的质量分数，结果为：银杏内
酯A98．99％、银杏内酯B97．35％、银杏内酯C
97．56％、白果内酯93．12％。
3结果与讨论
3．1银杏内酯柱色谱分离条件的选择：聚酰胺、酸
性氧化铝对黄酮类化合物均有很强的吸附能力，都
万方数据
·1010· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第7期2005年7月
可用于柱色谱分离银杏叶提取物中的银杏内酯。本
研究比较了聚酰胺、酸性氧化铝。在总内酯的洗脱率
相近时，聚酰胺对黄酮类化合物的吸附能力只有酸
性氧化铝的20％～40％，且不易再生，而酸性氧化
铝柱材料的使用后，经700℃煅烧后可重复使用，因
此选用酸性氧化铝为色谱净化材料。在酸性氧化铝
柱上比较了甲醇、无水乙醇、丙酮、石油醚、醋酸乙酯
洗脱溶剂对银杏内酯的洗脱率和黄酮类化合物分离
效果，结果见表3、4。综合这两项指标，确定第1次
色谱分离时采用无水乙醇为洗脱溶剂，第2次色谱
分离时采用无水乙醇一丙酮(60：40)为洗脱溶剂。
表3不同洗脱液对银杏内酯的洗脱效果
Table3 Ehtingeffectsofdifferenteluentsforginkgolides
表4不同洗脱液对黄酮类化合物的洗脱作用
⋯涨／em篆鬣引⋯慧篆薹
9 6 5 9
63
无水乙醇 ． 0醋酸乙酯
丙酮 0
3．2高效液相色谱制备分离及结晶纯化：制备色谱
每次进样量约30mg，主要受所用色谱柱承载量的
限制，若使用直径更大的制备色谱柱，总上样量可达
到克级水平。在结晶纯化时，由于大量的溶剂被浓
缩，直接干燥的内酯结晶在颜色和纯度上仍不能达
到要求，必须通过重结晶进一步纯化。银杏内酯在水
中的溶解度极低，而在二甲基亚砜、甲醇中溶解度较
大，本研究中控制内酯结晶时溶剂中甲醇体积分数
3．3银杏内酯检测方法的选择：用高效液相色谱法
分析银杏内酯根据所用的检测器的不同可分为
HPLC—UV法[5|、HPLC—RI法[61和HPLC—ELSD
法[7]。使用紫外检测器，在波长220nm处，银杏内酯
的E值为1×103，而黄酮类化合物为1×105，样品
中少量的杂质存在都会严重干扰检测，也正因为如
此，本研究中以HPLC—UV法作为银杏内酯对照品
的定量检测方法。用HPLC—RI法检测银杏叶及其
提取物中银杏内酯，能大大降低样品中杂质对分析
的干扰，检测限可达1弘g。在本研究中对银杏叶提
取物和经柱色谱纯化后，混合内酯结晶检测采用
HPLC—RI法。蒸发光散射检测器(ELSD)是一种通
用型质量检测器，适用于不挥发性物质的检测，
HPLC—ELSD法被推荐为用于银杏内酯的分析，但
是由于其价格昂贵，目前普及率较低。
3．4 本项研究所得的GA、GB、GC和BB纯品均能
达到对照品的要求，提取工艺切实可行，达到了研究
的预期目的。
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欢迎订阅《中草药》杂志2004年增刊
为了加速中药现代化进程，促进中药产业的技术创新，我部编辑出版了以“新技术在中药现代化
中的应用”为主要内容的增刊。该增刊共收载论文120篇，总字数约50万字，每本定价60元，另加
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万方数据
分析用银杏内酯对照品的制备研究
作者： 王帆， 胡小钟， 王婷， 杨尔宁， WANG Fan， HU Xiao-zhong， WANG Ting， YANG Er-
ning
作者单位： 王帆,胡小钟,WANG Fan,HU Xiao-zhong(湖北出入境检验检疫局,湖北,武汉,430022)， 王婷
,杨尔宁,WANG Ting,YANG Er-ning(华中农业大学,湖北,武汉,430070)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(7)
被引用次数： 1次

参考文献(7条)
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1.刘旻.陈建海.董芙蓉.刘园 2种方法制备银杏内酯长循环固体脂质纳米粒的比较[期刊论文]-中国药房 2008(12)


本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200507017.aspx