全 文 ：·1700· 中革菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月
素，从而加重了脑再灌流性损害，脑缺血后，ATP减
少，AMP增多，后者分解产生次黄嘌呤，脑组织中
正常存在的次黄嘌呤脱氢酶，在钙的参与下转变为
黄嘌呤氧化酶，该酶在次黄嘌呤和黄嘌呤存在下，使
再灌流期进入脑组织的0。转变为超氧阴离子
(o。7)。这是缺血时产生自由基的主要途径之一[3]。
O。7进一步启动Haber—Weiss反应生成毒性更
强的羟自由基。这些自由基可以攻击细胞膜，并可以
造成许多大分子如核酸、蛋白质损伤，最终导致神经
细胞的损伤。本实验利用黄嘌呤氧化酶一黄嘌呤(x／
XO)反应系统产生O：7。利用O：’及H：O：作为外
源性自由基损伤因素，研究自由基对培养神经细胞
的损伤，并用于筛选有效的抗自由基损伤的药物。本
实验结果表明，神经细胞经O。7和H：O。损伤后，神
经细胞存活率及活性均明显下降，说明外源性自由
基的确造成了神经细胞的损伤。
本研究发现外源性o：7、H。0。作用于神经细
胞，使MDA生成量显著增加，说明生成了大量的脂
质过氧化物，间接地反映出细胞受到自由基的严重
损伤。同时SOD活力则明显下降，说明清除自由基
的能力下降，原位DNA缺口末端标记法检测到阳
性细胞，说明自由基造成的神经细胞死亡包括坏死
和凋亡。
脑舒宁胶囊能提高自由基损伤的神经细胞的存
活率及细胞活性，减少凋亡细胞数量，并能降低
MDA的生成量，提高SOD活力，有效地减轻了
O。7、H。o。对神经细胞的损伤作用。脑舒宁胶囊保护
神经细胞免受自由基损伤的可能机制：(1)直接清除
自由基，起到天然抗氧化剂的作用；(2)提高机体内
抗氧化酶的活性，启动内源性抗自由基系统来清除
过量产生的自由基；(3)增强细胞膜等易受自由基攻
击的目标的耐受性；(4)抑制自由基引起的神经细胞
凋亡。但其具体机制仍有待进一步研究。
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蛇床子素抑制大鼠骨质疏松的实验研究
汤群芳1，孔令军2，顾振纶1，谢梅林p
(1．苏州大学医学院药理研究室，江苏苏州215123；2．苏州大学医学院儿科系，江苏苏州215123)
蛇床子素(osthole)为从伞形科植物蛇床
Cnidiummonnieri(L．)Cusson果实中提取得到的
香豆素类化合物。具有抗炎、抗心律失常、抗诱变、抗
肿瘤、抗变态反应以及抑制伴刀豆球蛋白A所致小
鼠肝炎等作用[1’2]。近年来有研究报道蛇床子素能够
防治去卵巢致大鼠高转换型骨质疏松，促进成骨细
胞的增殖和成骨作用[3]。本实验以地塞米松诱导大
鼠实验性骨质疏松症为模型，进一步观察蛇床子素
对激素引发骨质疏松大鼠的骨代谢血清学指标、骨
矿化密度(bonemineraldensity，BMD)及骨小梁
结构的影响。
1材料与方法
1．1实验动物：选用3月龄健康SD雌性大鼠，体重
(160±20)g，清洁级。实验动物生产许可证：XCYK
(苏)2002—0008，实验动物使用许可证号：SYXK
(苏)2002—0037，苏州大学实验动物中心供应。
1．2药品与试剂：地塞米松磷酸钠注射液，江苏第
六制药厂生产，批号020802；维生素D。(VitD3)，上
海罗氏制药有限公司惠赠；蛇床子素，质量分数为
95％，西安绿泉生物技术有限公司提供，批号
030516；血清碱性磷酸酶(ALP)、磷(P3+)及钙
(Ca抖)测定试剂盒均购于南京建成生物技术公司，
批号均为20050104；甲状旁腺激素(PTH)和雌二
醇(E。)放免测定试剂盒购子北京中国原子能科学
研究院，批号均为200501；自细胞介素一1(IL一1)、骨
钙素(BGP)和降钙素(CT)放免测定试剂盒购于
收稿日期：2006—03—08
作者简介：汤群芳(1975一)，女，江苏苏州人，在读硕士，研究方向为中药药理。Tel：(0512)65471556
*通讯作者谢梅林Tel：(0512)65880320E—mail：Xiemeilin@Suda．edu．en
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月· 701·
北京中国原子能科学研究院，批号均为200503。
1．3动物造模及分组：取大鼠48只，适应性喂养1
周后，随机分成6组，即溶媒对照组、模型组、阳性
药组及蛇床子素5、10、20mg／kg组，每组8只，分
笼喂养。骨质疏松模型的复制：分组后，除溶媒对照
组外，其余各组大鼠分别im地塞米松磷酸钠1rag／
kg，每周2次，溶媒对照组大鼠im等量生理盐水。
所有大鼠喂食正常饲料，自由饮水，共8周。
1．4给药方法：在模型复制的同时，每天上午溶媒
对照组和模型组大鼠ig10mL／kg溶媒溶液
(0．2％聚山梨酯)；阳性药组大鼠igV tD30．2肛g／
kg(O．02pg／mI。)，蛇床子素组大鼠分别ig5、10
和20mg／kg蛇床子素。每天1次，共8周。
1．5检测指标
1．5．1血清学指标的测定：实验8周后，给大鼠ip
10％水合氯醛0．4mL／kg麻醉，然后腹主动脉取
血，离心后，分别测定血清Ca2+、P3+、ALP、BGP、
PTH、E2、CT、IL一1的水平，具体方法按药盒说明书
进行。
1．5．2BMD测定：动物处死后，迅速剥离右侧股
骨，剔除周围软组织，用LUNARDPXIQ双能X线
骨密度仪(美国GE公司)测定，应用动物分析软件
进行大鼠股骨扫描，测定BMD值。
1．5．3光镜观察：处死大鼠后，剥离左侧股骨，用
10％福尔马林溶液固定，EDTA脱钙，乙醇逐渐脱
水透明，石蜡包埋，切5～7”m厚度切片，HE染色，
Olympus光镜观察，并摄像。
1．6 统计学处理：实验数据用X士S表示，采用
Excel统计软件处理，进行样本均数的t检验。
2结果
2．1一般情况：在实验期间，模型组大鼠逐渐出现
毛色无光泽、懒动、少食等症状，而溶媒对照组和各
治疗组大鼠皮毛光泽较好，活动如常。
2．2对血清Ca2+、P”、ALP的影响：实验结果显
示，造模后模型组血清Ca2+下降，而ALP明显增
高，与溶媒对照组比较有统计学差异(P<0．05、
0．01)。在造模同时ig蛇床子素，血清Ca2+有不同
程度的增加，与模型组比较有统计学差异(P<
0．05、0．01)，而血清P3+、ALP明显下降(P<
0．05、0．01)。这些结果表明蛇床子素能抑制地塞米
松引起的血清Ca2+下降、血清P3+升高以及血清
ALP活性的增强。结果见表1。
表1 蛇床子素对地塞米松诱发骨质疏松性大鼠血清Ca”、
p3+和ALP的影响(；士s，露一8)
Table1 EffectsofostholenserumCa”。P”。
andAI．Pindexamethasone．induced
osteoporosisrats(；土s，n一8)
与对照组比较：6P与模型组比较：。P<0．05一P△P’P<0．05。。P2．3对血清E：、PTH、BGP、CT、IL一1的影响：实验
结果显示，模型组的血清E。和IL一1明显升高，与溶
媒对照组比较有统计学差异(P床子素(10mg／kg)组的血清E：和IL一1与模型组
比较显著下降(P水平随着剂量的增加逐渐降低，20mg／kg组血清
PTH明显低于模型组(P蛇床子素可使血清BGP升高，尤其10和20rag／
kg组升得更为明显(P有降低血清CT的趋势，但与模型组比较未见统计
学意义。结果见表2。
表2蛇床子素对地塞米松诱发臂质疏松性大鼠血清E2、PTH、BGP、CT及IL一1的影响(；士s，辟=8)
Table2 EffectsofostholenserumE2，PTH，BGP，CT，andIL一1levels
inDexamethasone-inducedosteoporosisrats(；±s，一=8)
与对照组比较：△P△P与模型组比较{。P’P 万方数据
·1702· 中草115ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第11期2006年11月
2．4BMD的变化：模型组BMD明显低于溶媒对
照组大鼠BMD(PBMD与模型组比较明显增加(P<0．01)。结果
见表3。
表3蛇床子素对地塞米松诱发骨质疏松性大鼠
骨矿化密度的影响(i士s，花一8)
Table3 EffectsofostholenBMDoffemurmetaphyses
inDexamethasone-inducedosteoporosisrat
(；±s，n一8)
与对照组比较：oP<0．05ooP与模型组比较：。P△P’P2．5 骨形态组织学观察：股骨切片显示，与溶媒对
照组比较，模型组骨小梁数目明显减少，稀疏断裂，
大部分不能连接成网状，骨髓腔明显增大，骨小梁结
构出现较大的空白区域，且可见大量脂肪细胞。而蛇
床子素组股骨骨小梁明显宽厚，数目也显著增加，骨
小梁断裂与脂肪细胞少见，接近溶媒对照组。
3讨论
糖皮质激素广泛应用于临床，长期大量的应用
常引发一系列的不良反应，引发骨盐丢失是其中之
一。资料表明：地塞米松有抗维生素D、减少肠钙吸
收、增加尿钙排泄、抑制成骨、促进破骨、使骨盐丢失
等作用，并通过影响PTH、1，25一二羟基维生素D。
[1，25一(OH)：一D。]、性激素而间接作用于骨代谢，继
发甲状旁腺功能亢进而导致骨质疏松[4~7]。
本实验采用大鼠im地塞米松8周后，骨密度
降低，骨组织显微结构发生了典型的骨质疏松改变，
血清生化检查提示骨代谢呈现一种低骨形成和高骨
吸收的状态，说明糖皮质激素性骨质疏松大鼠模型
已复制成功。研究表明1，25一(0H)。一D。是诱导BGP
产生的唯一刺激物，本实验中蛇床子素能明显提高
血清BGP水平，表明蛇床子素有类1，25一(oH)。一D。
作用或直接提高1，25一(OH)2-D。水平，从而促进成
骨细胞合成和分泌BGP，促进成骨。BGP含有A一羧
基麸氨酸残基，可作为阳离子的螫合剂，维持骨的正
常钙化，是成骨细胞分泌的主要非胶原蛋白，也是成
骨细胞分化的特征指标之一。大剂量组的PTH水
平明显低于模型组，提示蛇床子素尚能拮抗地塞米
松导致的继发性甲状旁腺功能亢进，从而调节骨吸
收抑制状态，其中的拮抗机制可能与蛇床子素纠正
糖皮质激素诱发的肠钙吸收障碍有关。
中医学认为“肾主骨生髓”，骨质疏松症属于中
医“骨痿”范畴。蛇床子素能够刺激成骨细胞3H一胸腺
嘧啶和3H一脯氨酸掺入量D]。本实验中蛇床子素明显
增加大鼠股骨骨密度。通过化学结构分析发现，蛇床
子素具有与VitD。相同的活性环，故推测蛇床子素
抗糖皮质激素引起的动物骨质疏松作用一方面可能
通过促进钙的吸收，影响肾的钙磷代谢来增加成骨
活性；另一方面通过降低糖皮质激素引起的炎症介
质IL—1分泌增多，来对抗IL—l所致的骨吸收而改
善骨代谢，促进骨形成，抑制骨吸收；恢复机体激素
总失衡或减少负平衡，提高BGP的水平，降低PTH
的水平，从而影响钙磷代谢和钙盐的沉积，达到防治
骨质疏松的目的。
本实验对蛇床子素预防地塞米松诱导雌性大鼠
骨质疏松的作用进行研究，显示了较好的结果，提示
蛇床子素在预防糖皮质激素继发骨质疏松方面有较
好的应用前景。
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万方数据
蛇床子素抑制大鼠骨质疏松的实验研究
作者： 汤群芳， 孔令军， 顾振纶， 谢梅林
作者单位： 汤群芳,顾振纶,谢梅林(苏州大学医学院药理研究室,江苏,苏州,215123)， 孔令军(苏州大
学医学院,儿科系,江苏,苏州,215123)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(11)
被引用次数： 13次

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