全 文 ：·1662· 中草黄ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第1I期2008年11月
建立的方法有较好的重现性、精密度和稳定性，为乳
块消片的质量控制以及衡量其质量的优劣提供依据。
参考文献：
i11聂晶，田颂九，王国荣．中药指纹图谱的研究现状[J]．中草
药，2000，31(12)：881—884．
[2]任德权．中药指纹图谱质控技术的意义与作用[J]．中药新药
与临床药理。2001，12(3)：135—140．
[3]谢堵山．中药制剂色谱指纹图谱(图像)鉴别[J]．中成药，
2000．22(63)：391—395．
天花粉多糖的提取、分离与纯化研究
黄晓兰1，吴惠勤1，王蔚2，黄芳1，林晓珊1
(1．中国广州分析测试中心广东省化学危害应急检测技术重点实验室，广东广州510070；
2．广州中一药业有限公司，广东广州 510000)
摘 要：目的 系统地研究天花粉多糖分析的样品前处理方法，包括提取、分离及纯化方法，为进一步开展天花粉
多糖的组成及相对分子质量等分析研究，探讨其药理药效奠定基础。方法试验了加热回流、不同温度浸提、超声
波振荡等方法提取天花粉多糖，对天花粉多糖的沉淀分离条件进行了优化，并采用重结晶、透析、柱色谱等方法进
行纯化，采用苯酚一硫酸分光光度法测定多糖的质量分数．并用核磁共振波谱法进行验证。结果 天花粉多糖于
45℃超声波振荡提取效果最佳，不同纯化方法所得天花粉多糖的质量分数不同．重结晶法得到的多糖质量分数为
58．8％，透析法得到的多糖质量分数为51．、3oA，色谱柱纯化后的多糖质量分数最高可达94％。结论本研究建立了
天花粉多糖的样品前处理分析方法。解决了天花粉中淀粉、蛋白以及柠檬酸等化合物的干扰问题，获得了质量分数
较高的天花粉多糖，可用于天花粉多糖的进一步分析．
关键词：天花粉}多糖}分离；纯化
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1662一04
天花粉是葫芦科植物栝楼Tmchosanthes
kiHlowiiMaxim．的干燥块根，又名栝楼根、蒌根，
具有清热生津、消肿排脓的功效，用于治疗热病烦
渴、肺热燥咳、内热消渴、疮疡肿毒[1]。临床上常用的
消渴症方如玉泉丸、玉液汤、玉女煎等均将天花粉作
为主药。天花粉在增强机体免疫功能、抗肿瘤、抗艾
滋病毒方面具有很好的功效[2]。天花粉多糖具有降
血糖的活性[3]。天花粉中具有活性的多糖的量很低，
而富含淀粉，虽然这些淀粉也属于多糖类，但没有降
糖功效，并且对天花粉多糖的提取纯化干扰很严重。
天花粉中含有的天花粉蛋白属于水溶性的天然高分
子化合物，也严重干扰天花粉多糖的分离提取和分
析。有关天花粉有效成分的提取分离的研究大多是
针对天花粉蛋白[‘~7]，对天花粉多糖的研究较
少[8一]。因此本实验对天花粉多糖测定前处理中的提
取、分离和纯化方法作了研究，比较了不同方法提取
天花粉多糖，并优化了天花粉多糖的沉淀分离条件，
采用重结晶、透析、柱色谱等方法纯化，然后采用分
光光度法测定多糖，并采用核磁共振波谱法进行验
证，得到了较满意的结果。
1仪器与试剂
721N型分光光度计，上海分析仪器厂；核磁共
振波谱仪；超声波振荡仪。
无水乙醇、丙酮、苯酚、硫酸均为AR级；
SephadexG一50和SephadexG一100葡聚糖凝胶；葡
萄糖，AR级，质量分数大于99．9％，使用前经105℃
烘4h；试验用水为Millipore超纯水。
2方法与结果
2．1 天花粉多糖的测定：采用苯酚一硫酸分光光度
法。称取一定量的天花粉多糖样品，用水溶解并定
容，取1mL溶液加入1mL5％苯酚，再加入5mL
浓硫酸摇匀，于沸水浴中反应15min，取出放置至室
温，于490nm波长处测定吸光度值。以水作空白，以
葡萄糖溶液作对照同时测定，得到标准曲线，根据标
准曲线方程计算出多糖的量。
2．2天花粉多糖的提取
2．2．1提取方法的选择：取经粉碎后的天花粉，加
入10倍量的水提取，比较了加热回流(100℃)、不同
温度浸提和超声波振荡提取等方法结果见表1。若按
传统的加热回流提取方法，由于天花粉中富含淀粉，
收稿日期：2007—12-15
基金项目：广东省科技计划资助项目(2006835605009)
作者简介：黄晓兰(1964一)，女，广东潮州人，研究员，主要从事药物及食品分析工作。Tel；(020)87686536E—mailzwenhxl@126．corn
万方数据
中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月·1663·
会使提取物完全成糊状，无法进行分离。采取直接加
热浸提的方法，如果温度高于80℃，也同样会导致
糊化，很难分离出清液；65℃时情况有所好转，但I：
液试验呈蓝色，表明仍然有淀粉干扰；45℃时I：液
试验呈无色，表明已不存在淀粉的干扰故确定最佳
提取温度为45℃。而采用超声波振荡法可强化多糖
的溶出效率，明显提高提取率，达到满意的效果。因
此，确定采用45℃超声波振荡的提取方法。
表1不同提取温度和提取方法效果的比较
Table1 Comparisonbetweenvariousextracting
temperaturesandextractingmethods
2．2．2提取溶剂用量的确定：取经粉碎后的天花粉
100g，分别加入3、5、8、10倍量的水进行超声波振
荡提取。结果表明，水用量为天花粉的3倍(即100g
天花粉加300mL水)时，多糖提取不完全，提取率为
62％，且由于溶剂太少，提取液较浓，造成滤过困难；
水用量为天花粉的5倍时，多糖提取已完全，且提取
液滤过顺利；水用量为天花粉的8、10倍时，多糖提
取完全，且提取液滤过非常容易，提取率与5倍时接
近，但后续浓缩过程较费时。综合考虑，确定提取剂
用量为天花粉的5倍，即100g天花粉加500mL水。
2．2．3提取时间的确定：取经粉碎后的天花粉100
g，加入5倍量的水，分别超声提取0．5、1．0、1．5、
2．0、3．O、4．0h，结果见表2。提取率先随着提取时间
的延长而增加，提取2h后提取率已趋于稳定，不再
增加。故确定提取时间为2h。
衷2不同提取时间的影响
Table2 Effectofvariousextractingtimes
提取时间／h 提取率／％
0．5
1．0
1．5
2．O
3．0
4．O
71．2
87．4
94．6
98．5
99．3
100
2．2．4最佳提取条件：天花粉块根粉碎成60目后，
移取100g，加水500mL，超声提取2h，静置沉淀后，
经真空抽滤得到提取液；残渣再加少量水超声波振
荡10min进行洗涤，经真空抽滤得到洗涤液；重复
洗涤2次，合并提取液和洗涤液，60℃水浴浓缩定容
至lOOmL。
2．3天花粉多糖的分离：提取液中除了天花粉多糖
外，还含有天花粉蛋白以及其他大量可溶于水的物
质，这就需要将提取液中的天花粉多糖分离出来。由
于植物多糖是大分子化合物，其在有机溶剂中的溶
解度较小，在含一定比例有机溶剂的水溶液中会沉
淀下来，因此通常采用加入有机溶剂的方法使多糖
沉淀出来。但提取液中的天花粉蛋白也会随之沉淀
下来，因此必须选择适合天花粉多糖的沉淀分离
条件。
2．3．1多糖沉淀剂的确定：比较了丙酮和乙醇溶液
作沉淀剂的影响，结果见表3。可看出，丙酮沉淀多糖
的效果较乙醇略好，但二者差别不是很大。考虑到乙
醇成本较低，毒性小，对环境无污染，故选用乙醇作
沉淀剂。
2．3．2沉淀剂比例的确定：考察了不同比例的丙酮
和乙醇溶液作沉淀剂的影响，结果见表3。可看出，
60％丙酮和80％乙醇沉淀多糖效果较好。丙酮和乙
醇的量较低时，沉淀出的是相对分子质量较大的蛋
白质，丙酮和乙醇的量太高时，沉淀出的是小分子有
机物等杂质。
裹3不同溶剂及其比例对天花粉多糖的分离效果
Table3 IsolationofpolysaccharidcfromRadixTriehosan-
thisbyvarioussoluentsandtheirconceⅡtration
沉淀剂 多糖／％
2．3．3最佳-沉淀条件：在提取液中加入无水乙醇
100mL使乙醇体积分数达到50％，离心，弃去沉淀，
以除去蛋白质和残留的淀粉。清液加入4倍体积无
水乙醇，使乙醇体积分数达到80％，沉淀出多糖。沉
淀于60℃水浴烘干得到天花粉粗多糖。
2．4天花粉粗多糖的纯化：天花粉粗多糖质量分数
不高，只有23％～25％，主要是由于还含有部分蛋白
质、小分子有机物等杂质，因此需要进行进一步纯
化。植物多糖常用的纯化方法有重结晶、透析、柱色
谱等。
万方数据
·1664· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月
2．4．1重结晶法纯化：经预试验，采用50％乙醇洗
涤和80％乙醇沉淀进行反复重结晶，得到天花粉多
糖，经3次重结晶后的天花粉多糖质量分数可达到
58．8％，基本上可满足作药效试验的要求(大于
50％)。
2．4．2透析纯化：将天花粉粗多糖溶于水中，放入
透析袋中以水透析48h，每隔6h换1次水，浓缩得
到天花粉透析多糖，其含多糖质量分数为51．3％，也
可满足作药效试验的要求。但透析过程耗时太长，透
析液浓缩也较慢，故未予采纳。
2．4．3过阴离子交换柱纯化：天花粉粗多糖经高效
液相色谱和核磁共振波谱分析，发现含有较多的柠
檬酸，因此采用阴离子交换柱进行纯化，以除去柠檬
酸根离子及其他阴离子型化合物。分别考察了阴离
子交换柱的柱床高度(20、10、5cm)，上样量(I．0、
0．5、0．2g)，淋洗液体积流量(1、2mL／min)以及淋
洗体积(100、200、300mL)。在上述每种试验条件下
收集淋洗液每份5～10mL，分别测定柠檬酸和多
糖。结果当淋洗体积为100mL时柠檬酸已基本除
去，但多糖仍被吸附在柱上；直到当淋洗体积为300
mL时，多糖才能被洗脱下来。因此最终确定过阴离
子交换柱的纯化条件为：柱床高度5am，上样量
0．5g，水作淋洗液，体积流量2mL／min，淋洗体积
300mL。在此条件下可将天花粉粗多糖中柠檬酸根
离子除去94．3％，同时吸附于阴离子交换柱上的多
糖90％以上能被洗脱下来。
2．4．4凝胶色谱柱纯化：过阴离子交换柱后的天花
粉多糖，再经过Sephadex色谱柱进一步纯化，将不
同相对分子质量段的多糖分开。选择SephadexG一50
和SephadexG一100两种葡聚糖凝胶柱填料进行预
试验，结果SephadexG一50有较好的分离效果。因此
采用SephadexG一50凝胶柱进行分离纯化。
进一步分别对凝胶柱的柱床高度、上样量、淋洗
液流量、总淋洗体积等条件进行优化。在下述每种实
验条件下收集淋洗液每份25～50mL，采用苯酚一硫
酸分光光度法分别测定吸光度进行考察。
(1)考察了葡聚糖凝胶柱的柱床高度为60、100cm
时的分离情况。结果柱床高度为60am时，不能将天
花粉多糖与杂质分离开来；而柱床高度为100cm
时，可以很好地将天花粉多糖与杂质分离开来。
(2)考察了上样量为1．0、0．5、0．2g时凝胶柱的分
离情况。结果天花粉粗多糖上样量为1．O、0．5、0．2g
时，凝胶柱的分离效果相差不大，为节省时间，提高
效率，选择1．0g上样量。
(3)考察了淋洗液流量为1、2、3、5mL／min时的分
离情况。结果淋洗液流量为1、2mL／min时，可以将
天花粉多糖与杂质分离开来，而淋洗液流量较大时，
天花粉多糖与杂质分离效果较差，且两种天花粉多
糖不能分离开来，只有一个多糖峰。
(4)考察了总淋洗体积为300、500、100 2000、
3000mL时的情况。结果表明，当淋洗体积为500
mL时多糖已完全被淋洗下来，500mL以后的吸光
度均接近于0。
在上述优化试验条件下，以淋洗体积对吸光度
作图得到淋洗曲线，见图1。可看出，凝胶色谱柱将天
花粉粗多糖分为两部分，第一个峰称为天花粉多糖
I，第二个峰称为天花粉多糖I。
3
2
吨
1
O
2UO40U6UU8UU儿JUU
淋洗体积／mL
图1天花粉多糖经过SephadexG一50色谱柱的淋洗曲线
Fig．1ElutioncurveofpolysaccharidefromRadix
Trichosanthiso SephadexG-50column
2．4．5最佳纯化条件：天花粉粗多糖先用50％乙醇
洗涤，再用80％乙醇沉淀，反复重结晶3次，得到天
花粉结晶多糖。取0．5g天花粉结晶多糖溶于少量
水中，过预先装好的5am高的阴离子交换柱，水作
淋洗液，体积流量为2mL／min，弃去前100mL淋洗
液，分别收集第101～300mL淋洗液，于60℃水浴
烘干。取样品1．0g溶于少量水中，过预先装好的100
am高的SephadexG一50葡聚糖凝胶柱，水作淋洗
液，体积流量为2mL／min，弃去前100mL淋洗液，
分别收集第101～275mL和第276～500mL淋洗
液，于60℃水浴烘干，分别得到天花粉多糖I和I。
2．5 天花粉多糖的鉴定：将得到的天花粉多糖采用
苯酚一硫酸法测定其质量分数，结果天花粉多糖I质
量分数达87％～94％，天花粉多糖Ⅱ的质量分数为
38％～46％。说明天花粉多糖I中仍含有小分子杂
质干扰，这部分杂质有待于进一步研究。
将天花粉多糖彻底烘干水分，用氘代水溶解，作
核磁共振一氢谱(1H—NMR)分析，结果见图2。可看
出，天花粉多糖I的多糖峰远大于天花粉粗多糖，说
明前者的多糖质量分数大大高于后者，这与苯酚一硫
酸法的测定结果是一致的。
3讨论
本研究采用超声波提取、80％乙醇沉淀方法提
取分离出天花粉多糖，并采用重结晶、过阴离子交换
万方数据
中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第11期2008年11月· 665·
口
图2天花粉租多糖(A)和精制多糖(B)的核磁共振谱圈
Fig．2NMRofcrude(A)andrefi ed(B)
ofRadixTrichosanthispoIysaccharide
柱、凝胶色谱柱等手段进行纯化，解决了天花粉中淀
粉、蛋白等水溶性高分子化合物以及柠檬酸等阴离
子化合物的干扰问题。经苯酚一硫酸分光光度法测
定，核磁共振波谱验证，表明获得了纯度较高的天花
粉多糖。此结果为进一步开展天花粉多糖的组成及相
对分子质量等分析研究，对探讨天花粉多糖的药理、
药效，进一步开发天花粉多糖新药具有重要的意义。
参考文献： u
[13江苏新医学院．中药大辞典[M]．上册．上海：上海人民出版
社，1975．
[23洪缨，顾海鸥．天花粉药理研究进展[J-I，北京医药，1994，
3：32—35．
[33HikinoH。YoshizawMA，SuzukiY．甜a／．Isolationnd
hypoglycemicactivityoftrichosansA，B．C，D，andE：
glycansofTrichosantheskirilowiirOotS[J]．PlantaMed，
1989，55：349—350．
[43金善炜，孙孝先，汪绍福，等．天花粉蛋白的化学口]．化学学
报．1981，39(9)：917-924．
[53田庚元，孙孝先．唐天宝。等．低温离心分离、精制天花粉蛋
白口]，中草药，1989，20(2)：13—14．
[63袁惠东，夏其昌，张祖传．用BlueSepharoseCL一6B快速纯化
天花粉蛋白口]．生物化学与生物物理进展，1997，24(4)：
369—373．
[7]林国庆，邵靖宇．天花粉蛋白研究新进展[J]．科技通报，
1996，12(2)：122—125．
[83田庚元，李寿桐，唐天宝，等．天花粉多糖的研究[J]．生物化
学与生物物理学报，1985，17(5)：582—586．
[9]王莉，鲁建江，顾承志，等．天花粉多糖的微波提取及含量
测定[J]．药学实践杂志，2001，19(3)：168—169．
淡竹叶中荭草苷的微波萃取一HPLC法测定
薛月芹，袁珂‘，楼炉焕，葛斌斌
(浙江林学院天然药物研发中心，浙江临安311300)
擒要：目的从淡竹叶中提取黄酮苷类成分，并测定荭草苷的量。方法采用微波萃取技术提取黄酮苷，在640W
的功率下，用10倍量70％乙醇为溶剂微波萃取2rain制备供试品溶液。并采用RP—HPLC法测定荭草苷。色谱条件：
色谱柱为DiamonsiC18色谱柱(250mm×4．6mm，5肛m)；流动相为甲醇一水一冰醋酸(40：70：1)；柱温：25℃；检测
波长：340am。结果荭草苷在0．014～0．280mg／mL线性关系良好；荭草苷的平均回收率为96．18％，RSD为
1．96％。浙江、福建产淡竹叶中黄酮苷成分的量比较高，而广西、重庆等地生长的淡竹叶中有效成分的量较低。结论
采用微波萃取技术提取淡竹叶中的荭草苷，并采用HPLC法定量的方法简便、准确，结果稳定、重现性好，可作为淡
竹叶及其制剂质量控制的方法。
关键词：淡竹叶I荭草苷；微波萃取；高效液相色谱
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)11—1665—03
淡竹叶主要分布于江苏、安徽、浙江、福建、湖
南、湖北、贵州、云南等省，性淡、微涩、寒，味甘、苦，
具有清热除烦、解渴利尿、明目解毒和止血的功
能[1]。淡竹叶在我国具有悠久的药用历史，是一味著
名的清热解毒良药。淡竹叶中含有大量对人体有益
的活性物质，包括黄酮类、生物活性多糖、氨基酸类、
芳香成分和其他微量元素[2]。竹叶提取物的功能因
子主要是黄酮苷，淡竹叶黄酮具有多方面的生物活
性，如抗脂质过氧化、抗衰老、清除自由基，阻断亚硝
基化，降低血脂及血胆固醇，抗菌消炎、抗病毒，增强
免疫功能，抑制移植性肿瘤在宿主体内的生长等方
面的作用[3“]。淡竹叶黄酮以其巨大的资源优势，良
好的药理活性已成为一种非常有前途的天然药物，
是具有广阔开发前景的新型药用资源。微波萃取技
术以其具有的快速、高效、安全，节省溶剂和能源、尤
其是可以避免长时间高温加热引起的有效成分分解
等特点已被广泛应用于多种植物的提取，并取得了
显著成效[5]。本实验采用微波萃取方法快速提取淡
收稿日期：2007—12-20
基金项目：浙江省森林培育重中之重学科开放基金项目(200510)
作者简介：薛月芹(1980一)，女，山东泰安人，硕士，主要从事药用植物质量控制研究。E—mail：yueqinxue2007@yahoo．com．cn
*通讯作者袁珂Tel：(0571)63743607E—mail：yuan—ke001@163．com
眩
万方数据
天花粉多糖的提取、分离与纯化研究
作者： 黄晓兰， 吴惠勤， 王蔚， 黄芳， 林晓珊
作者单位： 黄晓兰,吴惠勤,黄芳,林晓珊(中国广州分析测试中心,广东省化学危害应急检测技术重点实
验室,广东,广州,510070)， 王蔚(广州中一药业有限公司,广东,广州,510000)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(11)
被引用次数： 4次

参考文献(9条)
1.江苏新医学院 中药大辞典 1975
2.洪缨;顾海鸥 天花粉药理研究进展 1994(03)
3.Hikino H;Yoshizaw M A;Suzuki Y Isolation and hypoglycemic activity of trichosans A,B.C,D,and
E:glycans of Trichosanthes kirilowii roots[外文期刊] 1989
4.金善炜;孙孝先;汪绍福 天花粉蛋白的化学 1981(09)
5.田庚元;孙孝先;唐天宝 低温离心分离、精制天花粉蛋白 1989(02)
6.袁惠东;夏其昌;张祖传 用Blue Sepharose CL-6B快速纯化天花粉蛋白 1997(04)
7.林国庆;邵靖宇 天花粉蛋白研究新进展[期刊论文]-科技通报 1996(02)
8.田庚元;李寿桐;唐天宝 天花粉多糖的研究 1985(05)
9.王莉;鲁建江;顾承志 天花粉多糖的微波提取及含量测定[期刊论文]-药学实践杂志 2001(03)

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1. 蒋红.王宏军.吴国娟 天花粉多糖的测定及其抑菌作用研究[会议论文]-2005

引证文献(4条)
1.成英.宋九华.刘素君 鹅绒委陵菜多糖对荷瘤小鼠细胞因子的影响[期刊论文]-安徽农业科学 2012(9)
2.黄晓兰.吴惠勤.王蔚.黄芳.林晓珊 天花粉多糖的单糖组成和相对分子质量的测定[期刊论文]-中草药 2008(12)
3.谢丽玲.赵闯营.易伟萍.朱炎坤.任理.曹俊辉 夹竹桃叶多糖的层析分离纯化工艺研究及光谱分析[期刊论文]-中
成药 2010(12)
4.李爱峰.张永清 栝楼的化学成分研究进展[期刊论文]-安徽农业科学 2012(30)


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