全 文 ：中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月·839·
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圆背角无齿蚌中抗肿瘤活性组分的提取工艺研究
柯乾坤1，胡水根”，刘 娟2，陈正伟2，卞俊1，王朝武1，蔡定国1
(1．解放军第四一一医院南京军区药学专科中心，上海200434；2．江西中医学院，江西南昌330006)
摘要：目的优选圆背角无齿蚌中有效组分的最佳提取工艺。方法选用L。(34)正交试验，以水提次数、醇沉体
积分数、盐溶的氯化钠质量浓度为因素进行比较，对影响圆背角无齿蚌中有效组分的提取工艺进行优选。采用硫
酸一苯酚法和凯氏定氮法测定含糖量和含氮量。以综合加权评分法比较实验结果。结果 最佳提取工艺为在4℃以
下用4倍蒸馏水量，提取1次，醇沉时的乙醇体积分数为70％，盐析的氯化钠溶液质量浓度为8％。结论优选的圆
背角无齿蚌中有效组分的提取工艺可行。
关键词：圆背角无齿蚌；正交试验；硫酸一苯酚法；凯式定氮法
中圈分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)06—0839—03
ExtractiontechniquesofantitumoreffectveconstituentfromWoodianaanatonta
KEQian—kunl，HUShui-genl，LIUJuan2，CHENZheng—wei2，BIANjunl，
WANGChao～WUl。CAIDing—gu01
(1．ResearchCenterofPharmacy，411HospitalofPLA，Shanghai200434，China；2．JiangxiCollege
ofTraditionalChineseMedicine，Nanchang330006，China)
Abstract：ObjectiveTooptimizethextractionofeffectveconstituentfromWoodianaanatonta．
MethodsL9(34)Orthogonaltestwasusedwiththreefactors，includingtimesofwaterxtracting，con—
centrationofethanolprecipitation，andconce trationofsodiumchloride．Thecont ntsofpolvsaccharides
andglycoproteinwasdeterminedbysulphoacid—phenolandt stingnitrogen．Thetestresultswerecorn—
paredbycomprehensireweightedscore．ResultsTheoptimumtechnologywas：onceofwaterxtraction
byfour—foldamountofdistilledwaterat4℃，theconcentrationofsodiumchlorideto8％，theconcentra—
tionofethan01precipitationo70％．ConclusionTheoptimalextractionmethodf reffectiveconstituents
inW．anatontaiSfeasibile．
Keywords：WoodianaanatontaLe ；orthogonaltest；sulphoacid—phenolmethod；methodoftesting
nitrogen
本课题组对贝壳软体动物进行抗肿瘤作用筛选
发现圆背角无齿蚌WoodianaanatontaLe 和海洋
蛤具有类似的抗肿瘤活性‘1’2|。因此对圆背角无齿蚌
抗肿瘤活性组分进行了提取分离，得到抗肿瘤活性
成分的有效组分跚。进一步的药理实验表明圆背角
无齿蚌抗肿瘤活性组分的脂质体1：1服给药对4种瘤
株显示较强的抗瘤作用，同时具有一定的免疫功能。
为了给圆背角无齿蚌抗肿瘤活性组分临床前研究提
收稿日期：2005一10—20
基金项目：上海市科委重点基金项目(03DZl9504)
作者简介：柯乾坤(1974一)，男，硕士，从事新药研究与开发。Tel：(021)65927686E—mail：keqkun@163．com
*通讯作者胡水根
万方数据
·840· 中草喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月
供参考，本实验对提取工艺进行了进一步研究。
1材料与仪器
圆背角无齿蚌购自上海郊区青浦的朱家角镇，
经上海市自然博物馆鉴定。DS200型组织捣粹机
(上海标本模型厂)，LXJ一Ⅱ离心沉淀机(上海医用
分析仪器厂)，FD一1型冷冻干燥机(北京博医康技
术公司)，88一Ⅱ型膜过滤器，UV一754型紫外光
光度计(上海第三分析仪器厂)FAl640S型电子天
平(上海天平仪器厂)、R一201型旋转蒸发仪(上海
申生科技有限公司)。
2方法与结果
2．1试验操作：取圆背角无齿蚌4kg匀浆，在4℃
以下用蒸馏水提取一定次数，提取液离心沉淀，所得
上清液用一定体积分数乙醇醇沉，得到的沉淀物用
4倍量的一定质量浓度的氯化钠溶液提取，提取液
离心沉淀，所得上清液超滤浓缩，冷冻干燥后缛到有
效组分HB。
2．2 因素水平的确定：在对该提取工艺进行了初步
研究[33的基础上，本实验对水提次数(A)、醇沉的乙
醇体积分数(B)、氯化钠质量浓度(C)作为因素进行
考察，因素水平见表1。
衰1因素与水平
Table1 Factorsandlevels
2．3 HB含氮量的测定：采用凯氏定氮法测定。取
HB冷冻干燥粉末适量约30mg，精密测定，置干燥
的50mL凯氏烧瓶中，加硫酸钾粉末0．3g和30％
硫酸铜5滴，再沿瓶壁滴加2．0mL浓硫酸，在凯氏
烧瓶上放一漏斗，并使烧瓶成45。斜置，用小火缓缓
加热使溶液保持在沸点以下，等泡沸停止，逐步加大
火力，沸腾至溶液成澄清的绿色后，继续加热10
min，放冷，加水2mL。取2％硼酸10mL，置100
mL锥形瓶中，加甲基红一溴甲酚绿混合指示剂5
滴，将冷凝管尖端插入液面以下，然后将凯氏烧瓶中
内容物经漏斗转入蒸馏瓶中，用水少量淋洗凯氏烧
瓶及漏斗数次，再加入40％NaOH溶液10mL，用
少量水再洗漏斗数次后用橡皮管夹紧，加热使圆底
烧瓶进行蒸汽蒸馏，至硼酸溶液开始由酒红色变为
蓝绿色起，继续蒸馏约10min起，将冷凝管尖端提
出液面，用蒸汽继续冲洗约1min后，用水淋洗尖端
后停止蒸馏。馏出液用5．136mmol／L硫酸标定液
滴定至溶液由蓝绿色变为灰紫色，并将滴定结果用
空白实验校正。
2．4 HB中多糖的测定：采用硫酸一苯酚法测定[4]。
2．4．1 标准曲线的制备：准确称取葡萄糖32．25
mg置于500mL量瓶中，加水至刻度。分别吸取葡
萄糖溶液0．8、1．2、1．6、2．0、2．4、2．8、3．2、3．6mL，
各以水补至4．0mL，然后加入2．0mL6％苯酚和
10．0mL浓硫酸，静置10min，摇匀，室温放置20
min以后于490nm波长处测定吸光度值。同时以
4．0mL水同样操作为空白。以质量浓度为横坐标，
吸光度值为纵坐标，经线性回归，得回归方程Y=
0．1807X+0．0217，，．=0．9998。
2．4．2样品测定：取HB有效组分约10mg溶于
10mL4mol／L三氟乙酸中，于i00℃水解24h，减
压蒸干，加甲醇溶解、蒸干，反复多次，直至三氟乙酸
除尽，加蒸馏水定容至100mL。精取水解液2．5mL
定容至25mL。分别取样品液1．0、2．o、3．0mL，补
水至4mL，然后加入6％苯酚2．0mL和浓硫酸
i0．0mL，静置10min，摇匀，室温放置20min后于
490nm测定吸光度值。将数值带人回归方程计算多
糖的质量分数。
2．5结果分析：以收率、含糖量和含氮量作为考察
指标，将权重系数定为3：3：1，得到综合评分，见
表2。方差分析见表3。
裹2 L，(3‘)正交试验设计与结果
Table2 Designa dresultsofL，(34)orthogonaltest
试验号A B c收孑”嚣佾芽7
1 1 1 3
2 2 1 1
3 3 1 2
4 1 2 2
5 2 2 3
6 3 2 1
7 l 3 1
8 2 3 2
9 3 3 3
Kl213．92219．70218．35
K2222．35227．40231．05
K3226．50215．67213．37
R 12．5811．7317．68
52．17
49．10
48．12
53．62
42．35
51．08
38．26
53．51
48．50
9．18
10．18
8．58
11．59
11．76
13．70
11．84
18．25
10．11
Fo．05(2，2)=19．00
A口分一船蚰％蟠卯∞龃∞盯综评一他住m孤蹶扎礼眦他M弱∞匏加孙¨组毖
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月·841·
2．6验证试验：4kg圆背角无齿蚌匀浆，在4℃以
下用4倍蒸馏水提取1次，醇沉时乙醇体积分数为
70％，盐析的氯化钠溶液质量浓度为8％，进行了批
样品验证，结果收率分别为0．5％、0．6％、0．575％，
含糖量分别为42．84％、45．23％、43．56％。
3讨论与结论
采用综合加权评分法的分析方法进行评估，进
行方差分析得到结果。可以看出不同水平的水提次
数、醇沉体积分数、盐溶的氯化钠质量浓度对测定结
果影响都不显著。多次提取可以提高收率，但影响不
很显著，工时大为延长，效率不高，选择水提1次。盐
析的氯化钠溶液质量浓度较低时，提取的有效组分
外观、质量较好。通过对数据的直观分析，水提1次，
醇沉的乙醇体积分数为70％，盐溶的氯化钠质量浓
度为8％，综合分较高，因此作为最佳工艺。
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HPLC法测定灵丹草软胶囊中臭灵丹酸
梅之南，杨建科2，李效宽1，李芸芳1
(1．中南民族大学民族药物研究所，湖北武汉430074；2．湖北南洋药业有限公司，湖北武汉430022)
摘 要：目的 建立HPLC法测定灵丹草软胶囊中臭灵丹酸的方法。方法采用AgilentZorbaxXDB-Cts色谱柱
(250mm×4．6mm，5ttm)，流动相：乙腈一水(60：40)，检测波长：210nm，体积流量：1．0mL／min，柱温：25℃。结果
臭灵丹酸线性范围为12．91～129．1Fg／mL(r一0．9999)，平均回收率为99．7％，RSD为2．o％。结论该测定方法
简便快捷、精密度高、准确性好，可以作为灵丹草软胶囊的定量测定方法，以控制其质量。
关键词：灵丹草软胶囊；臭灵丹酸；高效液相色谱
中图分类号：R286．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)06—0841—03
Determinationofp erodonticacidinLingdancaoSoftCapsulabyHPLC
MEIZhi—nan，YANGJian—ke，LIXiao—kuan，LIYun—fang
(1．InstituteofE hicMedicine，South—CentralUniversityforNationalities，Wuhan430074，China；2．Hubei
SouthOceanPharmaceuticalCo．，Ltd．，Wuhan430022，China)
Abstract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodforeterminationofp erodonticacidinLingdan—
caoSoftCapsula．MethodsAgilentZorbaxXDB—C】8column(250mm×4．6mm，5肚m)wasused．Aca—
tonitrile—water(60t40)wasusedasmobilephase，thedetectionwavelengthwas210nm，flowratewas
1．0mL／min，andcolumntemperaturewasat25℃．ResultsThelinearrangeofpterodonticacidwas
12．91—129．1tLg／mL(r一0．9999)，theaveragerecoveryrateofpterodonticacidwas99．70A，RSDwas
2．O％．ConcLusionThemethodiSsimple，accurate，andeliable，anditc beusedtothequalitycontrol
ofthispreparationeffectivelyasaquantitativemethod．
Keywords：LingdancaoSoftCapsula；pterodonticacid；HPLC
灵丹草为菊科植物臭灵丹Laggerapterodonta
(DC．)Benth．的干燥地上部分，具有疏风、解毒利
咽、止咳祛痰的作用。《滇南本草》记载其有“治风热
积毒、痈疽、疮疖、疥癣、白风癣疮”等功效。灵丹草已
上市的剂型有颗粒剂‘1|、胶囊剂和片剂，其工艺技术
特点是将处方中的药材提取挥发油后，滤液浓缩成
收稿日期：2006—10—15
作者简介：梅之南(1970一)，男，博士，副教授，主要从事新药的研究与开发。
Tel：(027)67843237Fax：(027)67843220E—mail：imm—scuec@mail．scuec．edu．cn
万方数据
圆背角无齿蚌中抗肿瘤活性组分的提取工艺研究
作者： 柯乾坤， 胡水根， 刘娟， 陈正伟， 卞俊， 王朝武， 蔡定国， KE Qian-kun， HU
Shui-gen， LIU Juan， CHEN Zheng-wei， BIAN jun， WANG Chao-wu， CAI Ding-guo
作者单位： 柯乾坤,胡水根,卞俊,王朝武,蔡定国,KE Qian-kun,HU Shui-gen,BIAN jun,WANG Chao-
wu,CAI Ding-guo(解放军第四一一医院,南京军区药学专科中心,上海,200434)， 刘娟,陈正
伟,LIU Juan,CHEN Zheng-wei(江西中医学院,江西,南昌,330006)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(6)
被引用次数： 1次

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引证文献(1条)
1.韩琳.胡水根.柯乾坤.马一明 圆背角无齿蚌抗肿瘤单一成分HB-Ⅰ中糖的成分分析[期刊论文]-药学服务与研究
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200706016.aspx