全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·693·
高效液相色谱法研究蓝萼甲素与大鼠血浆蛋白的结合率
曹露晔1，陈子君2，李云森3，李仪奎2
(1．广东化工与制药职业技术学院，广东广州 510520；2．上海中医药大学中药研究所，上海201203；
3．中国科学院上海药物研究所，上海201203)
摘 要：目的研究蓝萼甲素与大鼠血浆蛋白的结合。方法采用大鼠血浆平衡透析法，HPLC法测定透析袋两侧
溶液中蓝萼甲素的质量浓度，计算蓝萼甲素的血浆蛋白结合率。结果蓝萼甲素在质量浓度为20、10、1pg／mL时
与血浆蛋白结合率分别为74．46％、77．87％、75．29％。结论高效液相色谱法用于蓝萼甲素的生物样品测定具有
简便、快速、灵敏与选择性高的特点。蓝萼甲素具有中等强度的血浆蛋白结合率。
关键词：蓝萼甲素；蛋白结合率；高效液相色谱
中图分类号：R286．02 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)05—0693—03
DeterminationofglaucocalyxinAb HPLCanditsproteinb dingrateinplasmaofrat
CAoLu—yel，CHENZi—iun；，LIYun—sen3，LIYi—kui2
(1．GuangdongVocationalCollegeofChemicalEngineeringandPharmaceutics，Guangzhou510520，C ina；2．Institute
ofChineseMateriaMedica，ShanghaiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Shanghai201203，China；
3．ShanghaiInst tuteofMateriaMedica，ChineseAcad myofSciences，Shanghai201203，China)
Abstract：ObjectiveTostudytheproteinb dingrateofglaucocalyxinAinplasmaofrat．Methods
Theplasmabalancedialysiswaused．AnHPLCforthequantitativedeterminationofglaucocalyxinAwas
presentedandusedtocalculatetheproteinb dingrateinplasmaofrat．ResultsTherew reprotein
bindingrateresultsof74．46％，77．87％，and75．29％atthreevariousconcentrations20，10，and1弘g／
mLofglaucocalyxinAinplasmaofrat．ConclusionTheHPLCmethodusedtodetermineglaucocalyxin
Aissimple，rapid，andsensitivew thgoodspecificity，precisionanda curacy，andgl ucocalyxinAhas
mediumcapacitiesinproteinb dingrateinplasmaofrat．
Keywords：glaucocalyxinA；proteinb dingrate；HPLC
蓝萼甲素是唇科香茶菜属植物蓝萼香茶菜
Rabdosiajaponica(Burm．f．)Haravar．glaucoca—
lyx(Maxim．)Hara中的一个成分。蓝萼甲素在体
外具有抑制血小板聚集作用，可以开发作为血小板
聚集抑制剂。蓝萼甲素在lOmg／kg可显著增加86Ru
的吸收，提示具有改善微循环的作用[1~3]。本课题组
对蓝萼甲素在大鼠体内药动学过程进行了研究，发
现其分布和排泄较快。药物进入机体后能与体内多
种生物高分子发生结合，如药物与受体的结合、药物
与核酸的结合等。药物与血浆蛋白的结合也是药物
与生物高分子的一种结合，与其他类型的结合之间
存在一定的相关性，因此药物与血浆蛋白的结合，是
药理学基础理论研究，特别是分子药理学的重要研
究内容之一。考虑到血浆蛋白结合对蓝萼甲素体内
分布和排泄的影响，本实验采用平衡透析法考察了
蓝萼甲素在大鼠血中的蛋白结合率，以便于进一步
研究蓝萼甲素的代谢和排泄过程。
1仪器与材料
Agilent110高效液相色谱仪：含四元高压泵、
在线真空脱气机、柱温箱、20弘L手动进样阀；04／
2一l离心机(上海手术器械厂)；吹气式浓缩干燥器
(汉邦科技有限公司)；XW一80A涡旋混合器(上海
医科大学仪器厂)；0．45ttm微孔滤膜(安谱公司)；
FA2004N电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；
管状半透膜(周长5cm，长10am，上海西巴斯公
司)。蓝萼甲素(HPLC峰面积归一化法测定其质量
分数大于99％)。内标物为88一hydroxy—eremophil一
7，1I-an一4，6(8，12)一diolide(中国科学院药物研究所
馈赠，HPLC峰面积归一化法测定其质量分数大于
99％)。SD大鼠，体重220～250g，雌雄兼用，由上海
收稿日期：2006—08—05
基金项目：国家科技部863计划“创新药物和中药现代化”新药博士基金资助课题(2003AA223518)
作者简介：曹露哗(1978一)女，云南人，上海中医药大学博士毕业，主要从事抗炎免疫药理及药动学研究。
E—mail：yncly001@yahoo．com．crl
万方数据
·694· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月
中医药大学实验动物中心提供，动物许可证：SYXK
(沪)2002—00530。大鼠腹主动脉取血，肝素抗凝，离
心(3000r／rain)10min，分离血浆备用。
2方法与结果
2．1溶液的配制
2．1．1蓝萼甲素对照品溶液制备：取蓝萼甲素10
mg，精密称定，置10mL量瓶中，加甲醇溶解，稀释
至刻度，摇匀，即得质量浓度为1mg／mL的贮备液。
2．1．2内标溶液的配制：精密称取内标40mg，置
100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精
密吸取上述储备液1mL，置10mL量瓶中，加甲醇
稀释至刻度，配成40}tg／mL的内标溶液。
2．1．3透析液配制：取磷酸二氢钠3．12g，氯化钠
8．8g，加入lmol／L氢氧化钠溶液适量，调节pH值
至7．4，然后补水至1000mL，即得0．02mol／L磷
酸盐缓冲液(内含0．15mol／L氯化钠)，作透析液。
2．2色谱条件：色谱柱：HypersilC18柱(250mm×
4．6mm，5um)；流动相：甲醇一水(45：55)；柱温：30
℃；体积流量：1mL／min；进样量：20肛L。见图1。
t／min
1一蓝萼甲素2一内标
1-glaucocalyxinA2-internalst ndard
图1蓝萼甲素对照品和内标(A)、空白血浆(B)、
蓝萼甲素对照品和内标的磷酸盐溶液(C)、
蓝萼甲素对照品和内标的磷酸盐溶液的
空白血浆(D)
Fig·1HPLCChromatogramsofgl ucocalyxinA
referencesubstancendinternalstandard
(A)，blankplasma(B)，phosphaticbuffer
addedgIaucOcalyxinAreferencesubstance
andinternalstandard(C)，andblankplas—
maaddedgIaucOcalyxinAreferencesub—
stanceandinternalstandard(D)
2．3血浆样品的处理：取大鼠血浆0．5mL，置10
mL具塞离心管中，精密加入100肛g／mL内标溶液
10肛L、冰醋酸10肛L，涡旋10S，精密加入乙醚3
mL，涡旋3rain，于3000r／min离心10rain。精密
吸取有机相2mL，在60℃水浴中吹干。残渣加甲醇
100弘L溶解，过0．45pm微孔滤膜，即得。
2．4线性关系考察
2．4．1蓝萼甲素在大鼠血浆中的标准曲线：精密吸
取不同体积的蓝萼甲素对照品溶液适量于5个具塞
离心管中，以空白血浆配成含蓝萼甲素0．2、0．5、
1、2、5、10ttg／mL的溶液。置10mL具塞离心管中，
按2．3项下方法操作，取20弘L进样分析。以蓝萼甲
素峰面积与内标峰面积的比值对质量浓度进行线性
回归，得标准曲线方程Y一0．2338x一0．01744，
r2—0．99935，线性范围为0．2～10／*g／mL。
2．4．2蓝萼甲素在磷酸缓冲液中的标准曲线：精密吸
取不同体积的蓝萼甲素对照品溶液适量于5个具塞离
心管中，以pH7．4的透析液配成含蓝萼甲素10、5、1、
0．5、0．2ug／mL的溶液。置10mL具塞离心管中，按
2．3项下方法操作，取20pL进样分析。以蓝萼甲素
峰面积与内标峰面积的比值对质量浓度进行线性回
归，得标准曲线方程Y=0．4263X+0．0763，r2—
0．9993，线性范围为0．2～10ug／mL。
2．5 平衡透析时间的确定：除试验样本外，另以2
mL透析液代替血浆，以相同方法操作，作为时间对
照样本，以确定药物从袋内外自由扩散达到平衡的
时间。结果24h袋内外溶液中蓝萼甲素的质量浓度
相等，表明扩散24h己达到平衡，因此设定平衡透
析时间为24h。
2．6血浆蛋白结合率的测定[4]：将管状透析袋一端
结扎使不漏液，用移液管精密量取大鼠血浆样本2
mL加入透析袋中，注意不要使袋口污染血浆。折叠
并用线结扎袋口，袋内保留少量空气，使透析袋能悬
浮在透析液中。将两端扎牢的透析袋置于盛有10
mL透析液的广口瓶中，用线调节袋内外液面高度，
使保持同一水平，排除液面差引起的液体流动，并注
意不使透析袋靠着管壁，以免影响透析效果。加入蓝
萼甲素储备液20、10、1pL至袋外透析液中，使其终
质量浓度为20～1／生g／mL。最后用封口膜封住瓶El。
到达平衡时间后，吸出袋外少量透析液，加等量10％
高氯酸试剂，检查有无血浆蛋白漏出。若袋外透析液
蛋白检查阳性，则该样本作废。取出透析袋，用滤纸吸
干附着于袋外壁上的透析液，小心剪破透析袋，分别
精密吸取1mL血浆样本、1mL袋外透析液，置10
mL具塞离心管中，精密加入40／-g／mL内标溶液10
弘L，处理，测定袋内和袋外溶液中的蓝萼甲素的质量
浓度，计算血浆蛋白结合率。结果见表1。
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第5期2007年5月·695·
表1蓝萼甲素在大鼠血浆中的蛋白结合率(一一3)
Table1 Proteinb dingratesofglaucocalyxinA
inplasmaofrat(咒一3)
苎!!壅竺垦墨鎏垦!!竖：竺兰：：! 蛋白结合率／％
透析前血浆透析后袋内溶液透析后袋外溶液
蛋白结合率一(袋内溶液中蓝萼甲素的质量浓度一袋
外溶液中蓝萼甲素的质量浓度)／袋内溶液中蓝萼甲素的质
量浓度×100％
3讨论
目前测定药物血浆蛋白结合率的方法有平衡透
析法、超滤法、凝胶过滤法、超速离心法和白蛋白微
球测定法等[5~8]，其中平衡透析法是一种最常用的
方法。本试验采用平衡透析法测定了不同质量浓度
下蓝萼甲素的蛋白结合率，可为合理给药方案的设
计提供参考。
平衡透析法的平衡温度一般可选在37℃，也可
采用4℃恒温条件下测定。实验中发现在37℃下样
本达到平衡时间较短，但是血浆被细菌污染，所以选
择在4℃下进行。
比较了各种有机溶剂对血浆中蓝萼甲素的提取
率，发现氯仿和乙醚的提取率相同，但是氯仿位于水
下层，不方便吸取，所以采用了乙醚处理，方法简便，
且测定无干扰。
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通栓救心pH依赖型缓释胶囊在犬体内的药动学和药效学研究
于叶玲，郑 昕，唐 星
(沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳 110016)
摘要：目的制备通栓救心pH依赖型缓释胶囊，并进行犬体内药动学和药效学的研究。方法以牡丹皮、川I芎、
香附的超临界CO：萃取物及冰片为原料，经pCD包合固化后用粉末层积法制备含药微丸，分别用HPMC、
EudragitL一30D一55、EudragitL100一$100(1：5)包衣制备pH依赖型延迟释药微丸，将延迟类型不同的包衣微丸按
预设剂量分别混合填充胶囊，制得通栓救心pH依赖型缓释胶囊。采用血药浓度法测定方剂中指标性成分丹皮酚的
血药浓度，研究其药动学；采用血清药理学方法研究其药效学。结果血药浓度测定法表明通栓救心pH依赖型缓
释胶囊和通栓救心片的体内平均滞留时间分别为8．04、2．89h，相对生物利用度为126．3％。药效学研究结果表明
两者的平均效应维持时间分别为儿．27、5．94h，相对生物利用度为129．1％。结论通栓救心片在体内具有吸收
快、消除快和作用维持时间较短的特点，而通栓救心pH依赖型缓释胶囊在体内有起效迅速、药效持久、缓释的特
点。
关键词：pH依赖型缓释胶囊；通栓救心片；药动学；药效学；丹皮酚
中图分类号：R286．02 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2007)05—0695—05
收稿日期：2006—09—09
基金项目：国家高技术研究发展计划(863计划)课题(2002AA223t08)
作者简介：唐星(1964一)，男，陕西商县人，博士，教授，博士生导师，主要从事药剂学研究。
Tel：(024)23986343Fax：(024)23911736E—mail：tangpharm@sina．com
万方数据
高效液相色谱法研究蓝萼甲素与大鼠血浆蛋白的结合率
作者： 曹露晔， 陈子君， 李云森， 李仪奎， CAO Lu-ye， CHEN Zi-jun， LI Yun-sen， LI
Yi-kui
作者单位： 曹露晔,CAO Lu-ye(广东化工与制药职业技术学院,广东,广州,510520)， 陈子君,李仪奎
,CHEN Zi-jun,LI Yi-kui(上海中医药大学中药研究所,上海,201203)， 李云森,LI Yun-
sen(中国科学院上海药物研究所,上海,201203)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(5)
被引用次数： 4次
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