全 文 ：中草黄ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月-931·
诱导成功，就可通过扩增用于大规模生产。
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甘草愈伤组织培养中激素优化组合的研究
刘 颖，魏景芳，李冬杰
(河北科技大学生物科学与工程学院，河北石家庄050018)
摘要：目的选择甘草愈伤组织诱导和继代培养的最佳激素组合。方法 以甘草无菌苗的胚根为外植体设计正
交试验考察不同浓度的激素组合对愈伤组织诱导和继代的影响。结果 以诱导率为指标．NAA对甘草细胞脱分化
影响最显著；以相对生长速率为指标．6一BA、2，4一D、NAA对甘草细胞生长分裂影响最显著。结论甘草愈伤组织诱
导及继代的最佳激素组合为2，d—D1．0mg／L+NAA1．0mg／L+6BA1．0mg／I。IKT0．3mg／L。
关键词：tj草；愈伤组织；正交试验法；激素组合
中圈分类号：R28：2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)06一093l—03
OptimumcombinationsofplanthormoneincalluscultureofGlycyrrhizauralensis
Lit]Ying．WEIJing—fang．L1Dongjie
(CollegeofBiosciencea dBioengineering。HebeiU iversity。fScienceandTechnology-Shijiazhuang050018，China)
Keywords：G如cyrrhizauralensisFisch．；callus；orthogonaltest；hormonecombinations
甘草GlycyrrhizauralensisFisch．为豆科多年
生草本植物，其根和根茎为常用中药，具有补气健
脾、清热解毒、润肺止咳、缓急止痛，调和药性之功
效。这些年来，甘草自然生产量逐年锐减，因此，利用
组织培养技术对甘草进行无性快繁，加快甘草次生
代谢活性物质的提取已迫在眉睫。目前，有一些关于
甘草组织培养方面的报道“J，但在这些研究中，所用
培养基中植物激素的组合是否最佳难以比较。本研
究采用正交试验设计法考察2，4D、NAA、6BA、
KT4种植物激素对甘草愈伤组织诱导和生长产生
的影响，确立最佳的激素组合，为进一步稳定培养物
的有效生长速率和提高其中含有效成分的量，建立
稳定高产的甘草次生代谢产物牛产体系奠定实验
基础。
1材料与方法
新疆甘草无菌苗的胚根切成1cm长的小段。均
匀接种在培养基表面。所用基本培养基为MS
(120℃，0．1MPa，灭菌20min)，培养条件采用暗
培养，(25士】)‘C。
1．1 愈伤组织诱导及继代培养：本试验采用正交设
计考察植物激素对甘草愈伤组织诱导及生长的影
响。综合分析了生长素和细胞分裂素对愈伤组织诱
导的影响‘⋯，在MS基本培养基中添加2，4D、
NAA、6BA、KT4种不同质量浓度的激素，I。(44)
试验设计见表L
表1因素水平
Table1 Factorsandlevels
外植体接种7d，胚根肿胀、膨大，20d胚根表
面产生分散的愈伤组织．颜色淡黄色、质地疏松，统
计不同浓度的激素组合对甘草胚根愈伤组织诱导率
鉴鍪品皙：霈驻署葑强技术研究与发展计划项目(。。。。；5．：D)
作者简介：刘Tel：颍(03“11吣)8。8—63k2河167北鼍要盘i嚣击玉零裂i裹黧用植物次生代谢产物的研究工作
万方数据
·932· 中革芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月
的影响情况。筛选质地疏松、生长旺盛的优异愈伤组
织进行继代增殖培养，30d后测定愈伤组织增殖后
的鲜质量，计算愈伤组织相对生长速率。
1．2结果统计：愈伤组织诱导率⋯一诱导出愈伤组织
的外植体块数／接种的外植体块数×100％。
相对生长速率。1(Rr)一f1in等
其中：w，接种时愈伤组织鲜重{Wz收获时愈伤组织鲜
重}t愈伤组织培养时间
2结果与分析
2．1 正交试验设计安排及极差分析：采用正交试
验，进行16组处理，每个处理组设计3个样本，以甘
草胚根愈伤组织的诱导率和相对生长速率为指标，
试验安排见表2。
表2正交设计中植物激素对愈伤组织诱导殛其生长的
影响
Table2 EffectofphytohormonesoRcallusinductionand
itsgrowthofG，uradensisinorthogonaldesign
1 0 0 0 0 0 0
2 0 0．5 05 0l 41．3 0．0304
3 0 1．0 1．0 0．3 46．7 0．0351
4 0 2．0 2．0 05 45．5 00362
5 05 0 05 03 409 00402
6 0．5 0．5 0 0．5 40．0 0．0190
7 0 5 1．0 1 0 0 88．5 0．0462
8 0．5 2．0 2 0 0 1 606 00485
9 1_0 0 】．0 0 5 36．5 0．039I
10 1．0 0．5 Z．0 0 3 75．5 0．0466
11 1 0 1．0 0 0 i 86．3 0．0375
12 1 0 2．0 0．5 0 76．2 0．0450
13 2．0 0 2．0 0 l 50．2 0 033
14 2 0 0．5 j．0 0 721 0 0350
15 2．0 1．0 0．5 0．5 69．7 0．0512
16 2．0 2．0 0 0．3 673 0．0280
KL l 335 1262 1 936 2368 以诱导率为指标，
诱K2
238·6228-9226·7238·4
因素主次
摹K：274．．5291．．⋯43．．829．，nACD,K 2593 496 2318 191 优化组翠 d ．7 o l几叱m
R 141 165 50．2 47．3 舍BaAaDaCa
相Kz0·1017 0·1126 0 0845 01262以相对牛长速率
銎Kz，“1593仉131o o 1 568 o“97 为指标，因素主
吾K30．1682 0．1700 0 1654 0．1499
簧K：，o．1475 o 157 o 1646 o．1455 次CABD，优化
率R10．0665 0 0574 0．0809 0 0237 组合CaAaBaDa
经过4种不同质量浓度的植物激素的正交试
验，发现各种组合对甘草愈伤组织诱导和相对生长
速率的影响差别较大，对实验结果直观分析，发现以
诱导率为指标，4种植物激素对甘草胚根脱分化影
响力大小依次是NAA>2，4-D>KT>6-BA，较好
的给合为NAA1．0mg／I。+2，4-D1．0mg／L+KT
0．3mg／I。+6-BA1．0mg／L。在甘草胚根细胞脱分
化过程中，生长素起主导作用。在继代培养中，以相
对生长速率为指标，4种植物激素对甘草胚根细胞
生长分裂的影响依次为6BA>2，4一D>NAA>
KT，较好的给合为6BA1．0mg／L+2，4-D1．0
mg／L+NAA1．0“g／L+KT0．3mg／L。结果表明
在甘草细胞继代生长过程中，细胞分裂素6-BA的
质量浓度变化影响较大。为了进一步反映各因素之
间的差异，以便寻求最佳质量浓度的激素组合，进行
方差分析。
2．2方差分析：对极差分析的结果进行方差分析，
结果见表3、4。
寰3方差分析(诱导率)
Table3 Varienceanalysisw thinducingrateasindex
。Fo。5(3，16)=3．24++Fo。l(3，16)=529
表4方差分析(相对生长速率)
Table4 Vaviencea alysisw threlativegrowth
rateasindex
。f o 05t3，16)=3．24’。Fa01L3，16J一5．29
由表3、4方差分析结果可知，因素B(NAA)对
甘草愈伤组织诱导作用极显著，因素A(2，4一D)影
响作用较显著。而A(2，4-D)、B(NAA)、c(6-BA)、
D(KT)4种因素对甘草愈伤组织相对生长速率均有
较显著的影响。其中，c、A、B3因素作用极显著，因
素D作用较显著。4种激素对愈伤组织的诱导作用
大小依次为B、A、D、c，对相对生长速率的作用依次
为C、A、B、D。
2．3激素浓度最佳水平的选择：综合考虑极差分析
和方差分析的结果，以甘草愈伤组织诱导率和相对
生长速率为指标，得到最佳的激素组合为
A。B。c。D。。采用这种激素组合对甘草胚根愈伤组织
进行多次继代培养，获得了质地疏松、淡黄色、分裂
旺盛的优异愈伤组织，见图1。
3讨论
万方数据
中草嚆ChineseTraditionalandHerbalDrugs第37卷第6期2006年6月·933·
的过程中是必不可少的物质。植物细胞在诱导期，由
于生长素的作用，细胞代谢开始活化，启动植物细胞
脱分化的进行，因此在愈伤组织诱导阶段，生长素发
挥了重要作用，正交试验结果表明NAA对甘草愈
伤组织的诱导影响显著。植物细胞分裂素的作用是
使已经脱分化的细胞或细胞团保持有丝分裂，从而
使细胞团能够进行继代培养o]，在甘草细胞继代培
养过程中，6-BA的浓度变化对细胞相对生长速率影
响显著。因此，综合分析本试验的结果，选择2，4-D
圈1甘草胚根愈伤组织 1．0mg／L+NAA1．0mg／L+6-BA1．0mg／1。+
”ig·1。a¨“30fG·”!‘“8括。8扭1e ．． KT0．3mg／L为甘草愈伤组织诱导和继代的最佳
植物细胞进行脱分化(愈伤组织诱导)是一个复 谢音±日A
杂的生理生化过程，植物激素的作用极大，随着分子 R。fe，。。。。：
生物学的发展，人们已经证明植物激素是通过与植 [1]PeiYX．H。。JP．Ti。。。。It。。fGylycyrrhiza。。km
物细胞内的受体蛋白结合而起作用，即植物激素必嚣譬j船f者?‰胁”go‘49“‘SciTe“”“‘内蒙古农业科
须与靶细胞中的受体结合，才能调节植物的生长发 瞳1：点：：嚣。。X。Y。,。lL：盎}品．篇嬲；荛：‘臻错&
育“3一不同的植物激素对靶细胞的识别能力有差别，
[3]i露，’T2。0。04w,ixi‘拳h：：三一，。f。。thara。。hine。，od。i，ity
现上是不同种类、不同质量浓度的植物激奈组合影 [4]：盏L。ig。ht．瑶：蠹黧尝寿嚣翟戮?凳麓竺篡?‰。
响愈伤组织的诱导和继代生长。：淼渚矗忽躲勰?i毓’阿3“咖8‘cb“8Ag“一
植物生长紊在植物细胞脱分化、形成愈伤组织 ‘53‰。Y，EZduc．P。la。。nt翟篓警％i植物生理学’m3·“i”：
徐长卿地上部分扫描电镜的观察研究
张永清“2，周凤琴2，李佳2，高德民。，王建成2，李萍”
(1．中国药科大学，江苏南京210009；2．山东中医药大学，山东济南250014)
摘要：目的观察徐长卿植株地上部分叶片、果实、种子等器官各部位的表面超微形态，为徐长卿植株品种鉴定
与生物学特性研究提供依据。方法采用扫描电子显微镜技术进行观察。结果徐长卿植株叶片上，下表皮，内、外
果皮，种皮和花粉块表面的超微形态各异，并各具特征。结论各部位表面超微形态可作为徐长卿植株生物学特性
研究、药材与品种鉴定的重要依据。
关键词：徐长卿；地上部分；超微形态；扫描电镜
中圈分类号：R282．7 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2006)06—0933—03
Observationofab ve—·groundpartofCynanchumpaniculatum
byscanningelectronmicroscope
ZHANGYong—qin91～，ZHOUFeng—qin2，LIJia2，GAODe—min2，WANGJian—chen92，LIPing
(1．ChinaPh rmaceuticalUniversity，Nanjing210009，China；2．CollegeofPharmacy，ShandongUniversity
ofTraditionalChineseMedicine．Jinan250014，China)
收稿日期：2005—12 30
基盘项目：国家“十五”重大科技专项“创新药物和中药现代化”项目(2001BA701A02—08)
作者简介：张永清(1962一)，男，th东平邑人，山东中医药大学药学院副院长、教授、硕士生导师，长期从事药用植物栽培的教学、科研工
作，在该领域已发表论文60余篇，出版专著5部．获省部级奖1项、厅局级奖6项。
Tel：(0531)826130 0Fax：82613554Email；zyq622003@yahoo．com．cn
*通讯作者李萍Tel：(025)85322256Fax；(02 )85322448Email：lipingll@punic．pit．jS．c“
万方数据
甘草愈伤组织培养中激素优化组合的研究
作者： 刘颖， 魏景芳， 李冬杰， LIU Ying， WEI Jing-fang， LI Dong-jie
作者单位： 河北科技大学生物科学与工程学院,河北,石家庄,050018
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2006,37(6)
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