全 文 ：HPLC 法同时测定山豆根中苦参碱和氧化苦参碱
杨文远, 马丽娟Ξ
(宁夏大学 化学科学与工程系, 宁夏 银川　750021)
　　山豆根为豆科槐属植物柔枝槐 (越南槐、广豆
根) S op hora tonk inensis Gagnep 1 的干燥根及根茎,
是传统中药, 广泛应用于临床。功能清火解毒、消肿
止痛。药理研究证明其具有抗肿瘤作用[1, 2 ]。山豆根
主要有效成分为苦参碱和氧化苦参碱[1～ 3 ]。苦参碱
和氧化苦参碱均属喹诺里西啶生物碱, 具有广泛生
物活性。均具有抗肿瘤、抗炎、镇痛、抗心律失常、镇
咳、平喘作用。氧化苦参碱还具有升白、镇静、降温、
护肝作用[4 ] , 故均具广泛的开发前景。山豆根中上述
生物碱的测定有薄层光密度法[5 ] , 而 H PL C 法则未
见报道。由于薄层光密度法操作较繁琐, 精密度和准
确度亦不够理想。本研究建立了H PL C 法同时测定
山豆根中苦参碱与氧化苦参碱。本方法简单、灵敏、
准确, 为该中药的质量评价提供了科学依据。
1　仪器、试剂与样品
111　仪器: 高效液相色谱 L C—6A 系统, SPD—
6AV 紫外检测器, SL C—6A 系统控制器, C—R 3A
数据处理系统, SPD—M 6A 光电二级管阵列检测
器, 以上均为日本岛津公司生产。M illipo re 溶剂过
滤系统, 为美国M illpo re 公司生产, CSF—1A 超声
波发生器为上海超声波发生器厂出品。
112　试剂与样品: 甲醇 (优级纯) , 北京化工厂出品。
氯仿、三乙胺、氯水均为分析纯。色谱用中性氧化铝,
01070～ 01045 mm , 上海五四化工厂生产。苦参碱、
氧化苦参碱, 中国药品生物制品检定所提供。山豆根
样品由宁夏自治区医院药剂科提供并鉴定。
2　方法与结果
211　色谱条件: Sh im 2pack CL C2OD S (150 mm ×
60 mm , 5 Λm ) 色谱柱, 带有前置保护性; 流动相为
甲醇2水2三乙胺 (55∶45∶0102) , 临用前以微孔滤
膜滤过并经超声脱气处理; 紫外检测波长 215 nm ;
灵敏度 0108 AU FS; 流速 018 mL öm in; 柱温 50 ℃。
色谱图见图 1。
212　供试品溶液的制备: 精密称取干燥的山豆根
015 g, 用 014 mL 氨水润湿并密塞放置 2 h, 然后精
密加入20mL 氯仿 , 密塞超声提取40m in , 精密移
12氧化苦参碱　22苦参碱
12oxym atrine　22m atrine
图 1　对照品 (A)和样品 (B) HPLC 图
F ig1 1　HPLC chramatogram s of reference
substanes (A) and sample (B)
取氯仿提取液 10 mL , 通过氧化铝小柱 (填充中性氧
化铝, 1 cm ×5 cm ) , 先以 10 mL 氯仿洗脱, 继用 10
mL 氯仿2甲醇 (7∶3) 洗脱, 合并洗脱液, 挥干溶剂,
残渣用流动相溶解, 并移至 10 mL 量瓶中稀释至刻
度, 制成供试品溶液, 供试品溶液经M illipo re 滤器
滤过后供分析用。
213　标准曲线的制备: 精密称取苦参碱 2510 m g,
氧化苦参碱 3510 m g, 分别用流动相溶解, 并稀释定
容至 10 mL , 得到苦参碱及氧化苦参碱的储备溶液。
然后将此溶液稀释成含苦参碱为 215, 210, 115,
110, 015, 0125, 01025 m gömL 和氧化苦参碱为 315,
215, 115, 015, 0125, 0105 m gömL 系列对照品溶液。
按上述色谱条件进行测定, 每次进样 2 ΛL , 以峰面
积A 为纵坐标, 浓度 C 为横坐标作图, 苦参碱浓度
范 围 为 01025～ 215 m gömL , 回 归 方 程: A =
29 248156 C + 42107, r= 01999 1; 氧化苦参碱浓度
范围为 0105～ 315 m gömL , 回归方程为: A =
22 964140 C + 76184, r= 01999 3。
214　精密度试验: 按上述色谱条件用浓度均为 015
m gömL 的苦参碱和氧化苦参碱的对照品溶液各进
样 2 ΛL , 每种溶液测定 6 次, 苦参碱R SD = 0178% ,
·923·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 3 期 2004 年 3 月
Ξ 收稿日期: 2003206215
氧化苦参碱R SD = 1121%。
215　重现性试验: 精密称取同一试样 5 份, 每份
015 g, 按 212 项下方法制成供试品溶液, 按色谱条
件测定, 结果苦参碱的R SD 为 1134% , 氧化苦参碱
的R SD 为 1152%。
216　稳定性试验: 取一供试品溶液在室温下放置,
分别于当天, 次日及第 3 天进样分析, 结果苦参碱的
R SD 为 1104% , 氧化苦参碱的 R SD 为 1132% , 表
明制好的供试液 3 d 内稳定。
217　回收率试验: 精密称取已测知含量的生药材样
品 3 份, 每份均为 015 g, 加入苦参碱和氧化苦参碱
各 510 m g, 按样品分析相同的方法进行测定。测得
苦参碱的平均回收率为 9619% , R SD 为 1119% ; 氧
化苦参碱的平均回收率为 9819% , R SD 为 1128%。
218　样品的测定: 按 212 项制备的供试品溶液经
M illpo re 溶剂滤器滤过后在上述色谱条件下进样,
每次 2 ΛL , 每种样品测定 5 次, 样品分析结果见表
1。分析结果表明, 各地生药样品中均含有相当的苦
参碱和氧化苦参碱, 其中以广西样品中含量最高。不
同地区样品含量有较大差异。
表 1　样品分析结果
Table 1　Result of sample determ ination
样　品 苦参碱ö(m g·g- 1) 氧化苦参碱ö(m g·g- 1)
广　西 　　　101194 　　　161135
贵　州 91856 131085
云　南 91262 101486
3　讨论
311　用光电二极管阵列检测器测定对照液及样品
溶液的H PL C 的三维谱图和等高线谱图, 由谱图确
定以 215 nm 作为检测波长时, 分析方法的灵敏度
高, 干扰少, 样品的色谱图图形良好。
312　用反相柱进行样品的H PL C 分析, 首选甲醇2
水二元系统。经样品实验测定, 必须加大流动相中水
的比例, 以使干扰组份与待测生物碱达到分离。加入
少量三乙胺, 可使生物碱的色谱峰减少拖尾, 改善峰
形, 以利于准确进行定量测定。经实验优化, 得到甲
醇2水2三乙胺为 55∶45∶0102 体积比时分离效果
最佳。
313　在反相键合色谱分析中, 使用 50 ℃～ 60 ℃柱
温, 可减少流动相的黏度, 降低柱压, 提高柱效, 改善
分离效果, 而并不影响柱寿命。本研究采用 50 ℃柱
温, 在样品实际分析中可实现降低柱压, 改善分离效
果, 得到的色谱图分离情况良好。
314　由于样品所含成分复杂, 氯仿提取液中含有各
种干扰组份, 若直接进行测定, 一方面干扰组份将影
响上述生物碱的准确定量测定, 另一方面污染色谱
柱, 影响柱寿命, 故样品溶液在进行测定之前需要净
化。本研究采用氧化铝柱色谱法进行净化, 操作简
便、净化良好。
References:
[ 1 ]　X iong W Y, W ang J Z, Sh i T D , et a l1 Ch inese W oody Of f i2
cina l P lan t [M ]1 Shanghai: Shanghai Education Pub lish ing
House, 19931
[ 2 ]　W ang J M , W ang H F, Xu C Z, et a l1 Ch inese T rad itiona l
M ed icine R esearch and D ocum en t Ind ex (中药研究与文献检
索) [M ]1 Shanghai: Shanghai Fareast Pub lish ing House ,
19941
[ 3 ]　L in Q S1 Constituen t Ch im istry of Ch inese H erba l M ed icine
(中草药成分化学) [M ]1 Beijing: Science P ress, 19971
[ 4 ]　 Info rm ation Cen ter of Ch inese H erbal M edicine, State Phar2
m aceu tical A dm in istration of Ch ina1 H and book of A ctive
Constituen ts in P hy tom ed icine (植物药有效成分手册) [M ]1
Beijing: Peop le’s M edical Pub lish ing House, 19861
[ 5 ]　Zhang Y M , Fang L Q , Guo J X, D eterm ination of m atrine
and oxym atrine in S op hora tonk inesis Gapnep1 by TL C den2
sitom etry [J ]1 M od ern A pp lied P harm acy (现代应用药学) ,
1994, 11 (1) : 382401
2004 年全国医院药学 (制剂研究与开发)学术会议征文通知
中国药学会医院药学专业委员会拟在 2004 年 8 月主办以制剂研究与开发为重点的全国医院药学学术会议。现向全国医
院药学专业人员、临床医师、临床护师和医院管理干部征文, 有关内容如下。
1　征文内容
医院药物制剂研究与开发中的新成果、新经验, 包括处方筛选、制备工艺优化、制剂质量标准和控制、药物制剂的临床疗
效观察和评价、药物动力学研究等。
2　征文要求
211　未公开发表的论文均可作为征文稿件, 全文控制在 3 000 字内, 研究论文需附中英文摘要 (书写格式请按中国医院药学
杂志投稿要求) , 综述不超过 4 000 字。所有征文均需另附 800 字摘要, 请附软盘, 并用W o rd 格式打印 2 份后加盖公章。
212　论文截止日期: 2004 年 4 月 30 日。
313　论文请通过邮局寄至中国医院药学杂志编辑部, 也可发电子邮件, 请注明作者详细联系地址和电话。地址: 武汉市胜利
街 155 号, 邮政编码: 430014, 电话: (027) 82836596　E2m ail: pharm acy@public. w h. hb. cn。请在信封和论文稿件或电子邮件
上注明“会议征文”字样, 以免同杂志正常稿件混淆。
3　说明
会议录用后均给第一作者发会议通知; 会议将编辑论文集, 会后并出版增刊; 会议设优秀论文一、二、三等奖; 与会代表将
获得国家继续教育学分证书。会议地点待定。
·033· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 3 期 2004 年 3 月