全 文 ：·药剂与工艺·
黄褐毛忍冬不同炮制品中绿原酸的 HPLC法含量测定
张艳焱 1 ,张天伦 1 ,梁光义 2* ,曹佩雪 2 ,阮婧华 2
( 1. 贵阳中医学院 ,贵州 贵阳　 550002; 2. 贵州省、中国科学院天然产物化学重点实验室 ,贵州 贵阳　 550002)
摘　要:目的　比较黄褐毛忍冬花蕾、白花、黄花生晒品及蒸晒品中绿原酸的含量。方法　采用 HPLC法 ,反相 Hy-
pe rsil C18柱 ,以乙腈-0. 4%磷酸溶液 ( 13∶ 87)为流动相 ,检测波长为 327 nm。结果　黄褐毛忍冬花蕾、白花、黄花生
晒品绿原酸含量分别为 0. 54% , 0. 81% , 0. 57% ;蒸晒品中绿原酸含量分别为 2. 14% , 1. 65% , 2. 04%。结论　蒸晒
法较生晒法炮制的黄褐毛忍冬中绿原酸含量高。
关键词: 黄褐毛忍冬 ;炮制 ;绿原酸 ;高效液相色谱
中图分类号: R283. 1; R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 08 0696 02
Determination of chlorogenic acid in different processed crude drugs
of Lonicera fulvotomentosa by HPLC
ZHANG Yan-yan
1
, ZHANG Tian-lun
1
, L IAN G Guang-yi
2
, CAO Pei-xue
2
, RU AN Jing-hua
2
( 1. Guiyang Co lleg e of TCM , Guiyang 550002, China; 2. The Key Labo rato ry of Chemist ry fo r Na tural Pr oduct s
o f Gui zhou Prov ince and Chinese Academy o f Sciences, Guiy ang 550002, China )
Abstract: Object　 To compare the contents o f chlo rog enic acid in the di fferent processed crude drug s
o f Lonicera f ulvotomentosa Hsu et S. C. Cheng. Methods　 The contents of chlo rog enic acid w ere deter-
mined by HPLC. Ch romatog raphic condi tions included Hypersil C18 column and the mobile phase consisting
o f a mix ture of acetonit ri le-0. 4% phospho ric acid ( 13∶ 87) . Chlorog enic acid w as detected at 327 nm
waveleng th. Results　 The contents of chlorog enic acid w ere 0. 54% , 0. 81% , 0. 57% in the sun-cured
f low er bud, w hi te bloom , gold f low er in L . fulvotomentosa and 2. 14% , 1. 65% , 2. 04% in the steaming
sun-cured crude drug s, respectively. Conclusion　 The contents o f chlo rog enic acid in the steaming sun-
cured crude drug s are higher than those in the sun-cured crude drugs.
Key words: Lonicera fulvotomentosa Hsu et S. C. Cheng; processing; chlorog enic acid; HPLC
　　黄褐毛忍冬是忍冬科植物黄褐毛忍冬 Lonicera
f ulvotomentosa Hsu et S C. Cheng的花 ,被贵州省
地方药材标准收载 ,是贵州金银花的主要品种之
一 [1 ]。有报道将正品金银花基源忍冬科植物忍冬 L .
japonica Thunb. 与黄褐毛忍冬进行实验比较 ,结
果黄褐毛忍冬花中的绿原酸等成分含量均高于正品
金银花 [2 ]。本实验以黄褐毛忍冬花中的绿原酸为指
标 ,采用 HPLC法分别测定不同成熟期和不同加工
方法制得的生晒花蕾、生晒白花、生晒黄花 ,蒸晒花
蕾、蒸晒白花、蒸晒黄花中绿原酸的含量 ,为黄褐毛
忍冬的采收、加工和应用提供一定的依据。
1　仪器与材料
美国惠普 HP1100型高效液相色谱仪 (包括四
元泵 ,真空脱气机 ,自动进样器 ,柱温箱 , DAD检测
器 ) , HP1100-W IN D-3D化学工作站 , KQ-250型超
声波清洗器 (昆山市超声波仪器厂 )。乙腈为色谱纯 ,
水为重蒸水 ,磷酸为分析纯 ;绿原酸对照品购自中国
药品生物制品检定所 ,批号 0753-200111;不同成熟
期黄褐毛忍冬花药材采于贵州省安龙县木咱镇 ,经
贵阳中医学院张天伦老师鉴定为 L. f ulvotomentosa
Hsu et S. C. Cheng ,生晒品为采后直接晒干 ,蒸晒品
为先蒸 3～ 5 min,再晒干。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Hypersil C18 ( 4. 6 mm×
250 mm) ,流动相: 乙腈 -0. 4%磷酸溶液 ( 13∶ 87) ,
流速: 1 mL /min,柱温: 25℃ ,检测波长: 327 nm。理
论塔板数按绿原酸峰计为 8 095。对照品及样品色谱
图见图 1。
·696· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月
收稿日期: 2002-12-05基金项目:贵州省重大攻关项目资助 [黔科社农字 ( 2000) 1142号 ]作者简介:张艳焱 ( 1978— ) ,女 ,江苏江都人 ,在读硕士 ,研究方向为中药新药研发与中药质量标准研究。
* 通讯作者　 Tel: ( 0851) 5652109　 Fax: ( 0851) 5652109　 E-mai l: g uangyi li ang@ hotm ail. com
A-绿原酸对照品　 B-蒸晒白花　 C-蒸晒花蕾　 D-蒸晒黄花　 E-生晒白花　 F-生晒花蕾　 G-生晒黄花　* -绿原酸
A-chlo rogenic acid　 B-s teaming sun-cured w hite bloom　 C-steaming sun-cu red flower bud　 D-steaming su n-cu red g old flow er
E-sun-cured w hi te bloom　 F-sun-cured f low er bud　 G-sun-cu red gold flow er　* -ch lorogenic acid
图 1　对照品和样品 HPLC色谱
Fig. 1　HPLC chromatograms of ref erence substance and samples
2. 2　样品溶液的制备: 精密称取蒸晒白花粉末 (过 40
目筛 , 60℃真空干燥 4 h ) 0. 5 g ,置具塞锥形瓶中 ,精
密加 50%甲醇 50 mL,称定质量 ,超声 30 min,放冷 ,
用 50%甲醇补足减失的质量 ,摇匀 ,滤过。精密量取续
滤液 5 mL,置 25 mL棕色量瓶中 ,加 50%甲醇至刻
度 ,摇匀 ,过 0. 45μm滤膜 ,得蒸晒白花样品溶液
(Ⅰ )。同法 ,得蒸晒花蕾样品溶液 (Ⅱ ) ,蒸晒黄花样品
溶液 (Ⅲ ) ,生晒白花样品溶液 (Ⅳ ) ,生晒花蕾样品溶液
(Ⅴ )和生晒黄花样品溶液 (Ⅵ )。
2. 3　对照品溶液的制备:精密称取 70℃减压干燥
24 h的绿原酸对照品适量 ,用 50%甲醇溶解定容得
0. 120 0 mg /mL的溶液 ,作为对照品溶液。
2. 4　标准曲线的制备: 精密吸取绿原酸对照品溶
液 ,依次进样 0. 25, 0. 5, 1, 2, 3, 4, 5μL,以峰面积积
分值为纵坐标 ,对照品进样量为横坐标进行回归 ,得
回归方程为 Y = 2 975. 308 81X+ 5. 777 39, r=
0. 999 9,线性范围为 0. 030 0～ 0. 600 0μg。
2. 5　精密度试验: 取上述对照品溶液 ,重复进样 5
次 ,每次 2μL,记录色谱峰面积 ,结果绿原酸峰面积
的 RSD为 0. 26%。
2. 6　稳定性试验:精密吸取样品溶液Ⅰ 5μL,每 2
h进样 1次 ,共测定 5次 ,绿原酸峰面积的 RSD为
0. 48% ,表明样品在 8 h内稳定。
2. 7　重现性试验:按 2. 2项下方法分别制备 5份样
品溶液Ⅰ ,按上述色谱条件测定 ,计算得绿原酸峰面
积 RSD为 2. 19%。
2. 8　加样回收率试验:取蒸晒白花粉末 (含绿原酸
约 1. 638 mg ) 5份 ,加入适量对照品溶液 (绿原酸加
入量约 1. 490 mg ) ,混匀 ,按 2. 2项下方法处理 ,在
同样的色谱条件下测定其绿原酸含量 ,计算回收率。
结果平均回收率为 100. 68% , RSD为 2. 40% 。
2. 9　样品测定: 分别精密吸取样品溶液Ⅰ ～ Ⅵ 各 5
μL,注入高效液相色谱仪 ,按上述色谱条件各测定 3
次 ,计算样品溶液中绿原酸含量 ,结果见表 1。
表 1　黄褐毛忍冬不同炮制品中绿原酸的含量 (n= 3)
Table 1　 Contents of chlorogenic acid in dif ferent
processed drugs of L . fulvotomentosa (n= 3)
供试品 绿原酸含量 /% R SD /%
Ⅰ 1. 65 2. 78
Ⅱ 2. 14 0. 54
Ⅲ 2. 04 2. 99
Ⅳ 0. 81 2. 54
Ⅴ 0. 54 1. 85
Ⅵ 0. 57 1. 75
3　讨论
3. 1　实验结果显示黄褐毛忍冬的蒸晒品含绿原酸
的量比生晒品高。绿原酸为具有邻位酚羟基的化合
物 ,很易氧化 ,故用先蒸 3～ 5 min,再将其晒干的加
工方法进行处理 ,可能抑制药材中酶的活性 ,阻止绿
原酸的继续代谢 ,此种加工方法较好。
3. 2　对绿原酸的含量测定方法有容量法、比色法、
紫外分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法
等 [3 ]。本实验采用高效液相色谱法对黄褐毛忍冬不
同炮制品中绿原酸进行含量测定 ,所选条件可有效
分离其中绿原酸 ,且方法简便可靠 ,可作为单味中药
黄褐毛忍冬含量测定的依据。
References:
[1 ]　 Guizh ou TCM Research Ins ti tu te. Guizhou TCM Resources
(贵州中药资源 ) [M ]. Bei jing: China Medico-Pharmaceutical
Science and Techn ology Pub li shing Hou se, 1992.
[2 ]　 Guo Y W, Zhu Z Y, Ch en J M , et a l. Study on utili zation of
Lonicera f ulvotomen tosa Hsu. et S. C. Ch eng [J ]. Chin J
Pharm Anal (药物分析杂志 ) , 1990, 10( 1): 2-5.
[3 ]　 Zheng H Z, Dong Z H, Sh e J. Modern Study of Tra di tiona l
Ch inese Medicine (中药现代研究与应用 ) [ M ]. Vol 3. Bei-
jing: Xueyuan Pres s, 1998.
·697·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月