全 文 :·1360· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月
症状,抑制脾虚证哮喘小鼠的气道高反应性和炎症
反应,从而提示了CVFS可用于临床脾虚证哮喘的
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注射用熊胆粉对大鼠脑血栓的影响
张庆镐1,徐惠波2,朴惠善p
(1.延边大学医学院,吉林延边133000;2.吉林省中医中药研究院,吉林长春130000)
摘要:目的观察注射用熊胆粉对脑血栓、脑缺血动物模型的影响。方法观察注射用熊胆粉iv给药后对大鼠
大脑中动脉血栓模型、不完全性脑缺血、血小板、血栓形成、血瘀大鼠血液流变性的影响。结果 注射用熊胆粉可明
显抑制大鼠体内外血栓的形成,降低血液黏度,改善血液流变性,抑制血小板聚集,降低血小板黏附性,改善血栓性
缺血脑组织病变程度,降低毛细血管通透性,且可降低损伤脑组织中丙二醛(MDA)水平,保护超氧化物歧化酶
(sOD)活性。结论注射用熊胆粉对脑缺血有保护和治疗作用。
关键词:注射用熊胆粉;脑血栓;脑缺血;血液流变学;毛细血管通透性
中图分类号:R286.10 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2005)09—1360—05
EffectofF以Ursipowderfoinjectiononcerebralthrombosisinrats
ZHANGQing—ga01,XUHui_b02,PIAOHui—shanl
(1.MedicalS hoolofYanbianUniversity,Yanbian133000,China;2.JilinResearchInstituteof
TraditionalChineseMedicine,Changchun130000,China).
Keywords:FelUrsipowderinjection;cerebralthrombosis;cerebral—ischemia;hemorrheology;
permeabilityofbloodcapillary
熊胆粉具有清热、镇痉、明目等功效,近年来,由 于熊胆粉资源日益扩大,引起了人们的广泛重视,并
收稿日期:2005—02—12
基金项目:吉林省科技发展计划重点项目(9703047
作者简介:张庆镐(1964一),男,朝鲜族,吉林省延吉人,副教授,硕士学位,研究方向为中药药效学。
Tel:(0433)2732078E—mail:zq90621@yahoo.corn.en
*通讯作者朴惠善Tel:(0433)2660604E—mail:phshan50@yahoo.corn.en
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月·1361·
进行了大量研究,发现熊胆粉具有多方面的生理活
性。注射用熊胆粉是以熊胆粉为原料制成的冻干粉
针剂。经过预实验发现注射用熊胆粉在治疗脑血栓、
脑缺血方面有明显的作用,因此按中药注射剂要求
进行了药效学实验研究。
1材料
1.1动物:Wistar大鼠,雌雄均用,体重220300
g、3004350g,由长春高新医学动物研究中心提供。
合格证书号:10一5112。
1.2药品与试剂:注射用熊胆粉为乳白色冻干粉末
(每支含牛磺熊去氧胆酸8.5~11.5mg),规格:每
支20mg,批号20010505、20020113,由延边大学医
学院提供,用时以生理盐水配制。血塞通注射液由昆
明制药股份有限公司生产,批号20011051一07。57一
腺苷二磷酸一钠盐(ADP—Na)由中国科学院上海生
化所东风生化技术公司出品,批号9610137;盐酸肾
上腺素(Adr)注射液由北京市永康制药厂生产,批
号9804201;FeCl。由上海化学试剂一厂生产,批号
951218;伊文思蓝由中国医药(集团)上海化学试
剂公司生产,批号980706。
1.3仪器:血小板聚集仪(北京普利生公司);FAS—
CO--3010全自动血流变快测仪(重庆大学为多生
物工程研究所);BT87—3型实验性体内血栓形成
测定仪(包头医学院心血管研究室监制);752型紫
外分光光度计(上海第三分析仪器厂);H一103RI。
型高速冷冻离心机(日本)。
2方法与结果
2.1 对大鼠大脑中动脉血栓模型的影响
2.1.1对大鼠脑血栓后行为状态的影响[1]:取40
只健康大鼠,ip水合氯醛300mg/kg麻醉。按文献
方法在右眼外眦到右外耳道连线的中点处切开皮肤
约2cm。沿颧弓下缘依次切断咬肌和颞肌,分离切
除下颌骨冠状突,暴露鳞状骨的大部分,用钻在颧骨
和鳞状骨前联合前内2mill处钻孑L开颅,暴露一段
大脑中动脉。置一小片塑料薄膜保护血管周围组织。
将吸有50%FeCl。溶液10肛I。的小片定量滤纸敷在
该段中动脉上,持续30rain后去掉滤纸。用生理盐
水反复冲洗局部组织,逐层缝合肌肉、皮肤。另取8
只动物,同上述方法进行手术,只是不用FeCl。而用
浸有10弘L生理盐水的滤纸敷在大脑中动脉上,作
为空白对照组。待术后清醒模型动物随机分为5组:
缺血模型组、血塞通注射液(57mg/kg)组、注射用
熊胆粉(26、13、6.5mg/kg)组。即刻尾iv给药,空
白对照组给予同体积生理盐水,术后24h观察动物
行为状态情况。将动物提尾离开地面,观察到左侧前
肢紧贴胸壁或将两前肢置金属网上,观察到左侧前
肢肌张力下降,出现上述症状之一,视为阳性。数据
处理用Z2检验。结果见表1。实验过程中观察到空白
对照组动物状态良好,未见任何异常症状。其余各组
动物术后一般状态较差,活动少,皮毛无光泽,倦缩,
嗜卧,有些动物出现不停地向一侧旋转。表1结果可
见,各组动物均出现不同程度的偏瘫症状,模型组中
占62.5%,注射用熊胆粉高剂量组中占25%,较模
型组有减少的趋势。
表1注射用熊胆粉对脑血栓大鼠行为的影响
Table1 EffectofFelUrsipowderfoinjectionon
behaviorofratswithcerebralthrombus
2.1.2对大鼠脑血栓形成后脑组织形态学变化的
影响:2.1.1项中动物造模成功后连续iv给药3d,
每天1次。末次给药15rain后,即手术后72h,将动
物断头取脑。脑组织在10%福尔马林中固定,常规
石蜡包埋、切片、HE染色,光镜下观察。病理结果表
明,空白对照组动物脑皮质大部分神经元结构正常,
仅见少数神经元呈嗜伊红改变,未见梗死灶,海马各
区未见异常,属正常脑组织;模型组动物皮质区出现
局限性坏死灶,其周边神经元呈缺血性损伤变化,多
数海马区神经元损伤。而血塞通注射液对减轻缺血
性脑损伤有一定作用。注射用熊胆粉3个剂量组能
减轻缺血性脑损伤的程度,尤以26mg/kg组明显,
仅一半动物脑皮质区可见局限性坏死灶,坏死灶以
外的区域及海马区神经元未见明显神经元损伤。
2.2对不完全性脑缺血的影响
2.2.1对脑水肿的影响[2]:取60只大鼠,随机分为
6组:空白对照组、模型组、血塞通注射液(57rag/
kg)组、注射用熊胆粉(26、13、6.5mg/kg)组。每
天iv给药1次,连续3d,末次给药后15min大鼠
按改良Pulsinell法灼闭两侧锥动脉,用动脉夹夹闭
双侧颈总动脉5min,去夹间隔1h,如此反复3次,
此为反复缺血期,整个过程保温37C左右。空白对
照组仅剥离血管不结扎,处理同前。最后再灌1h后
取脑组织,称湿质量,然后干燥至恒重(90‘C,10
h),并称质量,测脑组织含水量[脑组织含水量一
万方数据
·1362· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月
(湿质量一干质量)/湿质量x100%]。数据用zis
表示,行t检验。结果见表2。注射用熊胆粉高剂量
组及血塞通注射液组均能明显缓解脑水肿症状,与
模型组比较差异显著(P
SOD活性和MDA7k平的影响(j土S,玎一10)
Table2 EffectofFelUrsipowderfoinjectiononwater
content,SODactivity.andMDAlevelinbrainof
ratswithdemi—cerebralischemia(J±S,n=10)
剂量/ 脑含水量/ MDA/ SOD/
组别
(mg·kg1) %(IlmO[·g一1)(U·g一1)
与对照组比较:。』’
2.2.2 对脑组织超氧化物岐化酶(SOD)活性及
丙二醛(MDA)水平的影响:动物分组、给药及造模
方法同2.2.1项。将动物处死后,立即取脑,在4℃
下匀浆,离心,分离提取SOD,并测定其活性,同时
测定MDA水平。结果见表2。大鼠脑缺血后,MDA
水平明显升高,SoD活性显著降低,与空白对照组
比较差异显著(P<0.01);而血塞通注射液和注射
用熊胆粉组动物脑组织中MDA水平明显较模型组
降低(P
鼠,随机分为5组:对照组、血塞通注射液(57rag/
kg)组、注射用熊胆粉(26、13、6.5mg/kg)组。各
组iv给药,每天1次,共3d。末次给药后15min,动
物ip水合氯醛300mg/kg麻醉,舌下iv伊文思蓝
50mg/kg。5min后分离双侧颈总动脉,结扎,逐层
缝合;4h后处死大鼠,取同一部位相同质量脑组
织,置于3mI。0.5%Na。SO。一丙酮(3:7)溶液中,
捣碎,充分浸泡24h,离心,取上清液于650nm处
测吸光度(A)值,计算伊文思蓝水平。结果见表3。
注射用熊胆粉高剂量组可明显降低脑中伊文思蓝水
平,中、低剂量组及阳性药组动物脑组织中伊文思蓝
水平亦有降低趋势,但无统计学意义。
2.2.4对脑组织形态学的影响:取54只健康大
鼠,动物分组、给药方法同2.2.1项,末次给药后15
min同2.2.3项方法结扎双侧颈总动脉,造成动物
表3注射用熊胆粉对不完全性脑缺血大鼠脑组织
伊文思蓝水平的影响(x±S,n一9)
Table3 EffectofFelUrsipowderfoinjectionon
Evansbluecontentinbrainofratswith
demi—cerebralischemia(工±S,n=9)
组别 剂量/(mg·kg。)伊文思蓝/(mg·mI,_1)
不完全性脑缺血。空白对照组只将颈总动脉分离后
不结扎。4h后将动物断头处死,取脑组织同一部
位,于10%福尔马林中固定,做病理检查。由病理
报告结果可见,由于结扎双侧颈总动脉,造成大鼠不
完全性脑缺血,缺血模型组大脑、小脑及基底神经元
细胞间质部分疏松,变大,脑细胞及血管周围间隙变
大,神经元与胶质细胞之间变疏松,神经元胞体变
大,有突起,胞核圆形,核仁肿大,从整体上看脑组织
发生中度水肿。各给药组脑组织大部分与正常对照
组相同,个别动物发生上述病理改变,从整体看其脑
细胞发生轻度水肿。
2.3对大鼠血小板的影响
2.3.1对大鼠血小板黏附性的影响[4]:取50只大
鼠,动物分组及给药方法同2.2.3项。末次给药后
15rain,动物ip戊巴比妥钠35mg/kg麻醉,于腹静
脉采血,每只1.2mL,按玻球瓶法计算血小板黏附
率。结果见表4。血塞通注射液和注射用熊胆粉高、
中剂量组均可明显降低血小板黏附百分率,与对照
组比较有明显差异。
2.3.2对ADP诱导的大鼠血小板聚集的影响:取
45只大鼠,随机分组及给药方法同2.2.3项。末次
给药后15rain,ip水合氯醛300mg/kg麻醉,每只
腹静脉采血2.7mL,缓慢注入装有3.8%枸橼酸
钠溶液0.3mL的试管中,混匀,离心,分离去血小
板血浆(PPP)和富血小板血浆(PRP),测定ADP
诱导血小板不同时间点的聚集率及最大聚集率。结
果见表4。血塞通注射液及注射用熊胆粉3个剂量
给药组对血小板聚集均有一定的抑制作用,与对照
组比较血小板聚集百分率均明显降低。
2.4对血栓形成的影响
2.4.1对大鼠体内血栓形成的影响:取45只大
鼠,分组及给药方法同2.2.3项。末次给药后15
min,用水合氯醛300mg/kg将动物麻醉,背位固定,
剥离颈总动脉,放上温度电极和刺激电极,测定其体
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月·1363·
表4注射用熊胆粉对大鼠血小板黏附和聚集的影晌(工±s)
Table4 EffectofFelUrsipowderfoinjectiononplateletadhesivenessa daggregationofrats(;±s)
内血栓形成时间。结果见表5。注射用熊胆粉高剂量
组能明显延长大鼠体内血栓形成时间,其余各给药组
均有延长的趋势,但与对照组比较无明显的差异。
2.4.2对血瘀模型大鼠体外血栓形成的影响口]:取
48只大鼠,随机分为6组:空白对照组、血瘀模型
组、血塞通注射液(57mg/kg)组、注射用熊胆粉
(26、13、6.5mg/kg)组。各组每天iv给药1次,连
续4d。每次给药后15rain,除空白对照组外,其余
动物均SC0.1%Adr,每只0.1mI。,30min后将动
物置于1.5C冰水中游泳5rain,间隔24h后,即
第2次给药后,再重复SCAdr,用冰水刺激,第3天
给药后只SCAdr,不进行冰浴。末次给药后15rain,
动物ip35mg/kg戊巴比妥钠麻醉,腹静脉取血,于
体外血栓仪上测定体外血栓长度、湿质量、于质量。
表5注射用熊胆粉对大鼠体内血栓形成
的影晌(;±j,席一9)
Table5 EffectofFelUrsipowderfoinjectionon
thrombosisofratinvivo(J±s,席=9)
结果见表6。大鼠注射Adr后在冰水刺激下,出现血
瘀症状,可见血栓的长度、湿质量、干质量均增加,即
极易形成血栓。血塞通注射液和注射用熊胆粉,可抑
制血栓的形成,与模型比较有明显差异。
2.5 对血瘀大鼠血液流变性的影响:取50只大
鼠,分组、给药及模型制备方法同2.4.2项。末次给
药15rain后,将动物麻醉,于腹静脉采血,置全自动
血流变快测仪上测定全血比黏度(高、中、低切值)、
血浆比黏度、红细胞压积。结果见表7。动物出现血
瘀症状后血液黏度增高,血液流变性指标发生异常
改变。而注射血塞通和注射用熊胆粉可明显抑制血
液流变性的异常变化,降低血液黏度。
表6 注射用熊胆粉对血瘀大鼠体外血栓形成
的影晌(;±s,打一8)
Table6 EffectofFeiUrsipowderfoinjectionon
thrombosisofratsi打vitro(;+s,疗一8)
⋯ 剂量/ 血栓长/ 血栓湿质量/ 血栓干质量/
组别
(mg·kg1) cm mg mg
表7 注射用熊胆粉对血瘀大鼠血液流变学的影响(;±s,n--8)
Table7 EffectofFelUrsipowderfoinjectiononhemorrheoiogyofratsGis,甩一8)
3讨论
脑血管疾病是临床上的常见病、多发病,其死亡
率和致残率都很高。目前研究发现,脑梗死所致脑供
血减少或中断后,虽梗死中心部位发生不可逆转的
坏死,但周围的缺血性脑组织在一定时间内保持正
常的离子平衡和结构完整,若及时恢复供血,这些组
织能够得以恢复。本实验正是利用熊胆粉的抗血栓
作用开发出注射用熊胆粉制剂治疗脑缺血、脑梗死,
以达到抗血栓、缓解脑缺血、改善血液流变学的目
的。大脑中动脉栓塞是脑血管病多发部位,因此本实
万方数据
·1364· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月
验利用F!C1。造成大鼠中动脉血栓形成的模型,观
察了脑梗死的情况。结果表明,注射用熊胆粉对缺血
性脑损伤有明显的治疗作用,改善了动物脑缺血的
症状;其对结扎双侧颈总动脉造成的不完全性脑缺
血也有缓解作用,抑制脑血管渗出增加,对反复脑缺
血再灌注损伤的动物能缓解脑水肿,降低脑组织由
于缺血而造成的MDA水平升高,保护脑组织SOD
活性,避免由于自由基的增加而加重脑损伤。临床上
脑缺血多由血栓的形成导致的,本实验还观察了注
射用熊胆粉对血栓形成的影响,结果表明,其可明显
抑制动物体内外血栓的形成,表现出明显的活血化
瘀作用。同时也观察了注射用熊胆粉对血小板的影
响,发现其可降低血小板的黏附率及抑制ADP诱
导的聚集率,说明注射用熊胆粉可抑制血小板的聚
集,改善血液黏稠度,也表明注射用熊胆粉抗血栓的
机制可能与改善血小板的功能有关。
上述结果表明,注射用熊胆粉可明显抑制动物
体内外的血栓形成,降低血液黏稠度,改善血液流变
性,抑制血小板的聚集,降低血小板的黏附性,改善
血栓缺血脑组织的病变程度,缓解脑水肿,降低毛细
血管的通透性,由于其可增加脑血流量,降低脑血管
阻力,因此可增加缺血区的供血,在脑组织受损时,
降低MDA水平,保护SOD的活性,对脑缺血组织
具有保护和治疗作用。
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猪蹄甲与穿山甲抗小鼠骨髓微循环障碍作用的实验研究
张东伟1,付 敏2,彭贤文2,李 健2,宋 鹏2,崔 瑛3,侯士良3
(1.清华大学化学系生命有机磷化学及化学生物学教育部重点实验室,北京 100084;2.北京中医药大学
细胞与生化实验室,北京100029;3.河南中医学院,河南郑州450008)
穿山甲为鲮鲤科动物穿山甲Mainspen—
tadactylaLinnaeus的鳞甲,由于其具有较好的临床
疗效而被广泛应用于内、外、妇、儿各科。但受生态环
境影响和人为因素的破坏,穿山甲野生资源日益匮
乏,药材供需矛盾比较突出,限制其临床应用。猪蹄
甲为猪科动物猪SuscrofadomesticaBrisson的蹄
甲,为畜牧业的副产品,其资源丰富。现代研究表明
猪蹄甲和穿山甲在临床应用、化学成分和药理作用
等方面有一定相似之处[1],穿山甲有一定的抗小鼠
微循环障碍的作用[2]。在此基础上,为研究猪蹄甲替
代穿山甲的可能性,本实验进一步研究了猪蹄甲和
穿山甲抗小鼠骨髓微循环障碍的作用,观察猪蹄甲
和穿山甲在药理作用方面的相似性,为猪蹄甲全面
替代穿山甲提供一定的实验基础。
1材料
1.1 动物:ICR种雄性小鼠,体重(25±2)g,2~
2.5月龄,购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
1.2 穿山甲水煎液:穿山甲为脊椎动物鲮鲤科穿山
甲M.pentadactylaLinnaeus的鳞甲,按《中国药
典》法砂烫醋淬炮制后,粉碎成粗颗粒。取干燥穿山
甲粉200g,加水600mL浸泡1h后,煮沸两次,第
1次50min,第2次30min,滤过。合并滤液,并压
榨药渣中滤汁,一并浓缩至200mI。(相当于含生药
1 g/mL,总氨基酸质量分数≥50%),置于4C冰
箱,冷藏备用。临用前稀释为0.1g/mI。。
1.3猪蹄甲水煎液:猪蹄甲为猪科动物猪S.scrofa
domesticaBrissond的蹄甲,洗净,晒干后,炮制方法
同穿山甲,取猪蹄甲粉600g,煎煮方法同穿山甲,
滤液浓缩至600mI。(相当于含生药1g/mL,总氨
基酸质量分数≥50%),置于4C冰箱,冷藏备用。
收稿日期:20050224
基金项目:北京中医药大学大学生科学技术研究基金资助项目(YD20021)
作者简介:张东伟(1974一),男,河南洛阳人,研究方向为中药作用的生化机制。E—mail:zhdwl006@163.conl
万方数据
注射用熊胆粉对大鼠脑血栓的影响
作者: 张庆镐, 徐惠波, 朴惠善, ZHANG Qing-gao, XU Hui-bo, PIAO Hui-shan
作者单位: 张庆镐,朴惠善,ZHANG Qing-gao,PIAO Hui-shan(延边大学医学院,吉林,延边,133000), 徐
惠波,XU Hui-bo(吉林省中医中药研究院,吉林,长春,130000)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2005,36(9)
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诱发大鼠肝纤维化的抑制作用[期刊论文]-世界华人消化杂志2005,13(20)
3. 崔浩.刘晶晶.傅少颖.刘红玲.侯勇生.金迪.CUI Hao.LIU Jing-jing.FU Shao-ying.LIU Hong-ling.HOU Yong-
sheng.JIN Di 口服中药熊胆粉在兔眼内通透性的研究[期刊论文]-中华眼科杂志2006,42(11)
4. 丁涛.徐惠波.尚智.温富春.甘雨.孙晓波 注射用熊胆粉对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤影响的研究[期刊论文
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5. 丁涛.温富春.周继胡.纪凤兰.徐惠波.孙晓波.DING Tao.WEN Fu-Chun.ZHOU Ji-Hu.JI Feng-lan.XU Hui-Bo.
SUN Xiao-bo 精制熊胆粉活血化瘀作用研究[期刊论文]-中国天然药物2005,3(3)
6. 查安生.尤松鑫.李春婷.王永珍.吴德康 金熊胆安胶囊对实验性豚鼠胆石胆汁中胆红素、钙离子及β-葡萄糖醛
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7. 罗梓河.肖树雄.黄东燕.黄俊斌.陈桂荣.肖文达 熊胆肝泰冲剂的质量控制及其治疗慢性乙型肝炎的观察[期刊论
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8. 金光显.任香善.林贞花.宋京郁.玄延花.金贤国.JIN Guang-xian.REN Xiang-shan.LIN Zhen-hua.SONG Jing-yu
.XUAN Yan-hua.JIN Xian-guo 熊胆冻干粉针剂对缺氧-再复氧损伤血管内皮细胞的保护作用[期刊论文]-时珍国医
国药2006,17(10)
9. 张岩.孙喜东.刘妍.尹继刚.姜宁.陆慧君.陈启军.ZHANG Yan.SUN Xi-Dong.LIU Yan.YIN Ji-Gang.JIANG Ning.
LU Hui-Jun.CHEN Qi-Jun 恶性疟原虫红细胞表面膜蛋白1DBLα区不同区段与血型抗原的结合特性分析[期刊论文]-
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10. 刘艳.姚素波.刘洁.李颖.王璐.陈灿.包旭.LIU Yan.YAO Su-bo.LIU Jie.LI Ying.WANG Lu.CHENG Chan.BAO Xu
熊胆贝母止咳胶囊对动物的镇咳祛痰解热作用[期刊论文]-华西药学杂志2008,23(5)
引证文献(10条)
1.赵旭 熊胆的鉴别及应用[期刊论文]-中医学报 2009(5)
2.丁涛.徐惠波.尚智.温富春.甘雨.孙晓波 注射用熊胆粉对大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤影响的研究[期刊论文]
-中国中医药科技 2008(3)
3.是明启 痰热清注射液治疗脑梗死50例疗效观察[期刊论文]-中西医结合心脑血管病杂志 2008(12)
4.李美花.朴凤花.金春玉 熊胆在朝医临床中的应用[期刊论文]-现代生物医学进展 2012(4)
5.王露霏.曲晓波.胡丽娜.刘丽.林喆 动物药整理研究——熊胆[期刊论文]-吉林中医药 2009(3)
6.玉顺子 熊胆的药理作用及临床应用[期刊论文]-时珍国医国药 2007(3)
7.马大勇.韩振蕴.周杰.范吉平 通络化痰胶囊治疗脑梗死恢复期痰瘀阻络证353例临床研究[期刊论文]-中医杂志
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8.高晶.李怡文.高学敏 论熊胆的合理应用[期刊论文]-天津中医药 2012(2)
9.池述广 熊胆主要化学成分合成方法及药理研究进展[期刊论文]-海峡药学 2008(2)
10.连常宝 熊胆粉的药理作用及临床应用研究概述[期刊论文]-海峡药学 2008(8)
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