全 文 ：·1652· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月
安心颗粒醇提工艺的实验研究
一方显明1，肖柳华1，陈 勇1，谢金鲜1，卢玉扬1，刘建中2，温庆伟2，黄尚敏2
(1．广西中医学院附属瑞康医院，广西南宁530011}2．培力(南宁)药业有限公司，广西南宁530000)
安心颗粒是人参、桂枝、水蛭、瓜萎、茯苓等中药
组成的复方制剂，具有益气化痰、通阳逐瘀等作用，
临床用于治疗脏气亏虚、痰瘀互结之冠心病心绞痛
疗效显著[“。为了优化其提取工艺，提高其药品质
量，更好地发挥其药用功效，本实验采用正交试验
法，以人参皂苷Rg，为指标，考察提取条件的影响，
并以药效学试验进行验证，确定最佳提取工艺。
1仪器与试药
CS--9000双波长薄层扫描仪(日本岛津)，939
薄层制板器(重庆南岸贝尔德仪器技术厂)，定量毛
细管(USADrummondScientificCO．)，AG285电
子分析天平(MettlerToledo)，硅胶G(青岛海洋化
工厂)，人参皂苷Rg，对照品(中国药品生物制品检
定所)，其他试剂均为分析纯。
计算机+BL一410智能型生物信号显示与处理
系统，昆明种小鼠(广西中医学院实验动物中心)，
0．4％戊巴比妥钠(广西中医学院药理实验室)。
所用药材购自南宁市药材批发站，均经广西中
医学院中药鉴定教研室何报作教授鉴定，符合《中国
药典》2000年版规定。
2方法与结果
2．1因素和水平的确定：人参、水蛭用乙醇提取，其
余药物用水提取。对于醇提部分工艺，根据单因素初
筛试验结果，分别确定乙醇体积分数(A)、提取时间
(B)、提取次数(c)、乙醇倍量(D)为因素，每个因素
各取3个水平，因素水平见表1。
衰1因素水平
Tahie1 Factorsandlevels
水平 里 塞
A／“ B／h C／收 D／倍
1 70 1 l 6
2 75 1．5 2 8
3 80 2 3 10
2．2提取工艺操作：按处方量称取人参、水蛭，按照
Le(34)正交设计表安排试验，用乙醇提取，合并乙醇
提取液，回收乙醇至尽，置于蒸发皿中水浴浓缩，合
并水提部分，定容到150mL量瓶中备用(药效学试
验用)。
2．3人参皂苷Rg。的测定
2．3．1对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg，对照品
5mg，精密称定，置于10mL量瓶中，甲醇溶解并稀
释至刻度，摇匀，即得。
2．3．2供试品溶液的制备：取各样品粉末约10g，
精密称定，置圆底烧瓶中，加氯仿100mL，水浴回流
提取1h，弃去氯仿液。残渣挥干溶剂，加甲醇100
mL，水浴回流提取2h，放冷，滤过，残渣再用甲醇洗
涤2次，每次10mL，滤过，合并滤液。滤液蒸干，残
渣加水30mL溶解后，用水饱和正丁醇萃取3次
(30、30、30mL)，合并上层正丁醇萃取液。正丁醇萃
取液再用氨试液萃取3次(100、100、100mL)，弃去
下层氨溶液，将上层正丁醇萃取液水浴蒸干，残渣加
甲醇溶解转入10mL量瓶中，用甲醇洗涤后，并人
10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。同法
制备缺人参的阴性对照溶液。
2．3．3TLC鉴别：用定量毛细管吸取供试品溶液、
对照品溶液、阴性对照溶液各3pL，分别点于同一
硅胶G薄层板(硅胶G适量与0．7％CMC—Na按
1 t 3混合拌匀，用自动铺板器铺板，晾干，105℃活
化1h)上，以氯仿一甲醇一水(65：35t 10)的下层液
为展开剂，展开，取出，晾干，喷10％硫酸乙醇溶液，
在105℃加热至斑点显色清晰口]。结果供试品色谱
中，在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的
斑点。
2．3．4色谱条件：双波长反射吸收法线性扫描，狭
缝5．0mril×1．0mm，测定波长^s一525nm，参比
波长k一680nm，线性化参数S，一3。
2．3．5线性关系考察：用定量毛细管吸取1、2、3、
4、5儿人参皂苷Rg。对照品溶液，点于同一硅胶G
薄层板上，按上述色谱条件展开，斑点显色清晰后进
行扫描测定。以点样量为横坐标，斑点峰面积积分值
为纵坐标，进行回归处理，得回归方程：Y=4337．7
譬銎是蓍：产蔷盖翟斧资助重点项日(重：。。。，，，
作者简介；方显明(1951--)，男，湖南祁阳县人，教授，医学硕士。主要从事心血管疾病的中西医结合防治研究。Tel：(0771)3111337
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月· 653-
x+4443．9，r一0．9991。结果表明：人参皂苷Rg，
在0．551～2．755p-g与蜂面积积分值线性关系良好。
2．3．6精密度试验：扫描同一硅胶G薄层板5个
同样量的人参皂苷Rg。对照品溶液，测得峰面积积
分值的RSD为4．65％。扫描5块不同薄层板相同
量的各人参皂苷Rg，对照品溶液的斑点，测得峰面
积积分值的RSD为2．16％。
2．3．7稳定性试验：取人参皂苷Rg，对照品溶液2
“L，点于硅胶G薄层板上，展开，显色，每隔20min
扫描，结果在2h内峰面积积分值基本不变，RSD为
i．08％。
2．3．8回收率试验：采用加样回收法。精密称取5
份已知人参皂苷Rg，质量分数的样品粉末适量，分
别加入人参皂苷Rg，对照品溶液适量，制备供试品
溶液，展开，显色，扫描测定，结果平均回收率为
96：9％，RSD为2．3％(n；5)。
2．3．9样品测定：精密吸取供试品溶液3止，对照
品溶液2、4,uL分别点于同一硅胶G薄层板上，按
上述条件展开，显色后扫描，外标两点法计算人参皂
苷Rg，的质量分数。
2．4正交试验及其结果；结果见表2，方差分析见
表3。
囊2L，(3‘)正交试验结果
Table2 ResultofL9(3‘)orthogonaltest
方差来源离均差平方和 自由度 均方 F值 P
Fo01(2，18)；6．01
从极差R值和方差F值分析可见，以人参皂昔
Rg、的质量分数为评价指标，各因素对提取效果的
影响程度依次为C>A>B>D。提取次数影响最大，
取c。即提取3次，A、B、D因素影响差异也有显著
性，选A。、B。、D。。综合分析得最佳组合为A，B：c。D。，
即用70％乙醇提取、每次提取1．5h、提取3次、每
次10倍量的乙醇。
2．5药效学初步试验：取小鼠100只，体重18～22
g，雌雄兼用，随机分为10组，每组10只。1～9组将
各浸膏药由150mL稀释到200mL，ig给药(o．2
mL／10g)，空白对照组给等体积生理盐水，每天1
次，连续给药12d，来次给药1h后，用0．4％戊巴比
妥钠ip(0．2mL／log)麻醉，分离气管，肢体连接心
肌监护仪，用全导联观察心电图，然后结扎气管并同
时秒表计时，通过心电图观察小鼠心电活动消失时
间，即为心肌缺氧时间。结果见表4。可见，第3组小
鼠的抗心肌缺氧时间最长，优于空白对照组，表明正
交试验中的3号试验组的药效较好。
裹4小鼠抗心肌缺氧试验(x士s，”=10)
Table4 Antimyocardtalhypoxtatest
ofmice(j--s．n=10)
组剥 缺氧时问／rain 组剐 缺氧时间／rain
1 14．70士3．87 6 16．52士2．53
2 15．42士3，02 7 17．41士4．02
3 17．60土1．85⋯8 16、65士3．23
4 13．35士2．27 9 14．89士5．34
5 16．38士4．27空白对照 10．73士1．50
与对厢组比敷，⋯-p<0．001
⋯P
3．1 在正交试验中，采用人参有效成分人参皂苷
Rg，作为考核指标具有合理性，因为安心颗粒以人
参为主药，具有大补元气、安神益心之功效，其主要
有效成分为人参皂苷。药效学试验证实，人参皂苷能
降低外周血管阻力和冠脉阻力、增加冠脉血流量、减
慢心率口]，具有抗心肌缺氧作用。本实验结果表明，
试验3号药理活性最好，其人参皂苷的质量分数也
最高，提示采用药效学试验来筛选提取工艺的条件
是可行的。
3．2人参中有效成分多为水溶性，但利用乙醇回流
提取法比水提法效果更好o]。水蛭味腥，用醇提可去
其腥味，故两药采用醇提。为优化醇提工艺，提高人
参皂苷Rg-的质量分数，根据正交试验结果综合分
析，主要影响因素为提取次数，其次为己醇体积分
数、提取时间，乙醇倍量影响较小，故确定最佳工艺
组合为A，B：c。甄，即用70％乙醇提取、每次提取
万方数据
·1654· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第11期2005年11月
1．5h、提取3次、每次10倍量乙醇。
RefeItnc皓i
C13FangXM．BeiWJ．QJanHL，“a1．Clinicalobservationon
Ang／月npector“ofc ronaryheartdiseasetr atedwithAnxln
OralSolution，73㈣5ofcot2tractanalysis口]．Guang．zlJ
TradltChin&led(广西中医药)，1995，18(6)：1-3．
[23chenLF，QiuSH，LiQA．Comparisonbetweedtheffeets
of gypenosidesandginsenvsidesoNcardiacfunctionand
hemodynamicsindogs[J]．ChinJP armToxicol(中国药理
学与毒理学杂志)，1990，4(1)：17—20．
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processesinPanaxginseng[J]．LishizhenMedMaterIVied
Res(时珍国医国药研究)，2000．11(9)：777—779．
添加剂对丹参酚酸B水溶液稳定性的影响
曲桂武1，岳喜典1，李桂生2
(1．山东省天然药物工程技术研究中心，山东烟台264003{2．烟台大学药学院，山东烟台264005)
丹参酚酸B是唇形科植物丹参Salvia
miltiorrhizaBunge中主要的水溶性成分，具有抗心
肌缺血、缺氧[“、改善血液流变性”1等多种药理活
性。其化学组成是二分子丹参素与一分子原紫草酸
缩合而成的四聚咖啡酸类化合物。丹参酚酸B的化
学性质很不稳定。实验中发现水溶液中的丹参酚酸
B在低质量浓度(
丹参制剂均采用丹参酚酸B的分解产物丹参素和
原儿茶醛作为主要有效成分或质量检测指标，但丹
参酚酸B分解过程尚存在诸多不确定因素，制剂质
量的均一性难以得到保证。因此目前人们越来越倾
向于直接以丹参酚酸B作为制剂的主要有效成分
和质量检测指标。以丹参酚酸B为主要成分的制荆
工艺研究中首先需要解决的是如何保持其在溶液中
稳定性的问题。常用方法有加人抗氧剂、络合剂等添
加剂和调节溶液pH等。本实验在影响丹参酚酸B水
溶液稳定性的添加剂的筛选方面进行了初步探索。
1仪器与试剂
Agilent1100型高效液相色谱仪(包括一元泵、
柱温箱、手动进样器、VWD检测器、HP—Chem
Station)，恒温水浴锅(上海跃进医药设备厂)}丹参
酚酸B对照品由山东省天然药物工程技术研究中
心现代中药室制备，经uV、IR、1H—HMR和”c—
NMR鉴定并确认结构，质量分数>98％；质量分数
在85％以上的丹参酚酸B样品由山东省天然药物
工程技术研究中心现代中药室制备；甲醇(色谱纯)，
L半胱氨酸盐酸盐(生化试剂，北京化学试剂公
司)、EDTA一2Na(药用，余杭市利人医药化工有限
公司)，其他试剂均为分析纯，实验中所用水为去离
子水。
2方法与结果
2。1色谱条件：色谱柱：DiscoveryC1。(250mm×
4．6mm，5”m)；柱温：35℃；进样量：20pL；流动
相：甲醇一水一冰醋酸(40；60；2)；检测波长：286
nm}体积流量：0．5mL／min。理论塔板数以丹参酚
酸B计不低于4000。
2．2标准曲线的绘制：精密称取丹参酚酸B对照
品25mg，置25mL棕色量瓶中，加水溶解并加至刻
度，摇匀，作为丹参酚酸B对照品溶液。精密量取
0．01、0．05、0．10、0．50、1．00、5．00mL于1mL棕
色量瓶中，加水至刻度，摇匀。依次吸取丹参酚酸B
系列对照品溶液20乩，注入液相色谱仪，测定。以
丹参酚酸B的峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐
标，计算得回归方程为y一63260X+444．25，r一
0．9996，表明丹参酚酸B在0．001～1mg／mL与峰
面积线性关系良好。
2．3不同添加剂的影响：精密称取相当于100mg
丹参酚酸B的样品，置250mL棕色量瓶中，加水溶
解并加至刻度，摇匀。取160mL，均分成8份，其中
7份中分别加入不同添加剂0．02g，使其终质量浓
度为0．1％，溶解摇匀。另一份不加任何添加剂作为
空白对照。每份分装成4支5mL西林瓶中，压铝盖
密封，于80℃水浴保温，分别在o、24、48、72h各取
1支室温放冷后作为供试品溶液，精密吸取20止，
注入液相色谱仪，测定丹参酚酸B峰面积，代入回
归方程计算其质薰浓度，与保温前的数值相比较，计
算溶液中丹参酚酸B的变化率。结果见表1。
作t噍者m筒BW介J，,2曲0桂05武-01(-109872一)男，山东诸城人，药物化学硕士，目前于山东省天然药物工程技术研究中心从事天然药物的研究工作
万方数据
安心颗粒醇提工艺的实验研究
作者： 方显明， 肖柳华， 陈勇， 谢金鲜， 卢玉扬， 刘建中， 温庆伟， 黄尚敏
作者单位： 方显明,肖柳华,陈勇,谢金鲜,卢玉扬(广西中医学院附属瑞康医院,广西,南宁,530011)， 刘
建中,温庆伟,黄尚敏(培力(南宁)药业有限公司,广西,南宁,530000)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(11)
参考文献(3条)
1.Fang X M;Bei W J;Qian H L Clinical observation on Angina pectoris of coronary heart disease
treated with Anxin Oral Solution,73 cases of contract analysis 1995(06)
2.Chen L F;Qiu S H;Li Q A Comparison between the effects of gypenosides and ginsenosides on cardiac
function and hemodynamics in dogs[期刊论文]-中国药理学与毒理学杂志 1990(01)
3.Zhang L;Shan W H;Liang R X Study on extraction processes in Panax ginseng[期刊论文]-时珍国医国药研
究 2000(09)
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200511023.aspx