全 文 ：References:
[1 ]　Ch P (中国药典 ) [ S] . 2000 ed. V olⅠ .
[2 ]　 Zh ou R H. Drug Plant Chemota xonomy (药用植物化学分类
学 ) [M ]. Shanghai: Shanghai Science and Technolog y Pub-
lish ers , 1988.
[3 ]　 Huang M S, Zh ou Z C. Determination of naringin contents in
pummelo ( Citrus grandis or C . grandis v ar tomentosa ) peel
[ J ]. Ch in Tra dit Herb Drug s (中草药 ) , 1984, 15( 5): 11.
[4 ]　 Hu M H. Abou t E xocarpium Ci tri grand is [J ]. J Tradi t
Med (中医杂志 ) , 1959, 6: 60.
葛根高效液相指纹图谱的研究
陈士林 1, 2 ,陈四保 1, 2 ,杨大坚 1 ,陈新滋 1 ,徐宏喜 3
( 1. 香港理工大学 ,香港 红 ;　 2. 中国医学科学院 中国协和医科大学药用植物研究所 ,北京　 100094;　 3. 香港赛马会中
药研究院 ,香港 九龙 )
摘　要: 目的　采取高效液相色谱法建立野葛的指纹图谱 ,为野葛药材质量控制提供依据。 方法　 Agilent高效液
相色谱仪 , Zo rbax XDB-C18 ( 4. 6 mm× 250 mm, 5μm)色谱柱 ,甲醇和水梯度洗脱 ,流速 0. 5 mL /min,检测波长 250
nm。结果　精密度和重复性试验中各共有峰相对峰面积的 R SD均小于 5% ,符合有关规定。结论　此方法可作为
控制野葛内在质量的标准。
关键词: 野葛 ; HPLC;指纹图谱 ;质量控制
中图分类号: R282. 710. 3　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 07 0661 03
HPLC f ingerprint analyses of Radix Puerar iae
CHEN Shi-lin1, 2 , CHEN Si-bao1, 2 , YAN G Da-jian1 , Albert S. C. Chan1 , XU Hong-xi3
( 1. The Hong Kong Po ly tech nic Univ er sity , Hung Hom, Hong Kong , China;　 2. Institute of M edicinal Plant
Development, CAM S& PUM C, Beijing 100094, China; 3. Hong Kong Jockey Club
Institute of Chinese Medicine Limited, Kowloon, Hong Kong , China )
Key words: Pueraria lobata (Willd. ) Ohwi; HPLC; fingerprint; quali ty contro l
　　葛根为豆科植物野葛 Pueraria lobata ( Willd. )
Ohwi或甘葛藤 P . thomsonii Benth. 的干燥根。味
甘、辛、凉 ,归脾胃二经 ,具有解肌退热、生津、透疹、
升阳止泻之功效 [1 ]。其主要有效成分为异黄酮类。由
于受产地、气候和生态环境等的影响 ,不同葛根药材
所含的有效成分差异较大 [2, 3 ]。针对中药材或中成药
的某个有效成分或指标进行定性、定量分析并不能
有效控制中药材或中成药的质量 ,目前 ,指纹图谱已
成为国际公认的控制中药和天然药物质量的最有效
的手段 ,其根据色谱指纹图谱的模糊属性 ,着眼于宏
观的规律性的特征分析。本实验通过考察安徽霍山
产的野葛 ,建立野葛高效液相指纹图谱 ,作为评价和
控制野葛原药材内在质量的标准。
1　仪器与试剂
Agi lent高效液相色谱仪 , DAD二级管阵列检
测器 , HP1100色谱工作站。甲醇为 Fisher色谱纯 ,
其他试剂为分析纯。 水为超净水。 用于指纹图谱的
10批野葛药材采自安徽霍山县葛根基地 ,其他供试
样品分别为南京、西安、沈阳、广州 (粉葛 )等地药材
市场所售商品药材。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱为 Zo rbax XDB-C18 ( 4. 6
mm× 250 mm , 5μm);流动相为甲醇 -水 ,梯度洗脱:
0～ 10 min甲醇由 25%升为 30% , 20～ 50 min甲醇
由 30%升为 80% , 50～ 60 min甲醇由 80%升为
100% ;流速为 0. 5 mL /min;检测波长为 250 nm;进
样量为 20μL。
2. 2　参照物溶液的制备:采用葛根素 (外标 )为参照
物 ,精密称定适量 ,制成 20μg /mL的参照物溶液。
2. 3　供试品溶液的制备: 精密称定葛根粉末 ( 50
目 ) 100 mg ,置圆底烧瓶中 ,精密加入 100 mL 30%
乙醇溶液 ,称定重量 ,加热回流 30 min,用 30%乙醇
·661·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 7期 2003年 7月
收稿日期: 2003-01-22作者简介:陈士林 ( 1961- ) ,男 ,博士 ,湖北人 ,现任香港理工大学客座教授、中国医学科学院药用植物研究所常务副所长、香港理工大学中药研究所常务副所长 ,以中药资源与开发为研究方向。
Tel: 00852-27665606　 ( 010) 62899701　 E-mai l: scs lch en@ sohu. com
补足减失的质量 ,摇匀 ,滤过 ,再用 0. 45μm滤膜过
滤 ,取续滤液 ,即得。
2. 4　测定方法: 取各供试品溶液 20μL,注入高效
液相色谱仪 ,记录色谱图 ,计算 ,即得。
2. 5　方法学考察
2. 5. 1　对照试验: 取参照物溶液 20μL,注入
HPLC,记录色谱 (图 1)。
图 1　葛根素 HPLC图谱
Fig. 1　HPLC chromato-
gram of puerarin
2. 5. 2　精密度试验:取供
试品溶液 ( 1号样品 )连续
进样 6次 ,测得共有峰 17
个 ,各共有峰相对峰面积
的 RSD < 5% ,表明精密
度良好。
2. 5. 3　重复性试验: 取 1
号样品 6份 ,精密称定 ,按
2. 3项下方法制备供试品溶
液 ,分别进样 ,测得各共有峰相对峰面积的 RSD < 5% ,
表明其重复性试验较好。
2. 5. 4　稳定性试验: 取供试品溶液 ( 1号样品 ) ,分别
在 0, 2, 4, 6, 8, 12, 24 h进样 ,测得各共有峰相对峰面
积的 RSD < 5% ,表明样品溶液在 24 h内稳定。
2. 6　指纹图谱及各项技术参数
2. 6. 1　共有峰的指定: 根据 10批供试品溶液
HPLC谱提供的相关参数 ,比较各批样品的色谱图 ,
其中共有峰 15个 (图 2)。
图 2　野葛 (安徽霍山 1号样品 )HPLC指纹图谱
Fig. 2　 HPLC f ingerpr int chromatogram of P . lobata
(No. 1 from Huoshan, Anhui Province)
2. 6. 2　共有峰的相对保留时间、峰面积、相对峰面
积: 3号峰为葛根素 ,是葛根中的主要成分 ,其峰面
积占总峰面积的 55% ,比较稳定 ,因此 ,以其作为参
照峰。共有峰相对保留时间和峰面积见表 1, 2。由表
2可以看出 10批样品间各共有峰相对峰面积
RSD < 5% 。共有峰总面积占总峰面积的平均百分
比为 94. 6% , RSD为 2. 59% ,符合指纹图谱的有关
规定 (表 3)。
表 1　 10批样品共有峰相对保留时间
Table 1　 Relative retent ion times of common peaks for ten batches of samples
样品 共有峰相对保留时间
1 2 3( S) 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
1 　 0. 58　 0. 68 　 1 　 1. 04　 1. 09　 1. 18 　 1. 40　 1. 66　 1. 76 　 1. 84　 2. 03　 2. 13 　 2. 16　 2. 22　 2. 37
2 0. 57 0. 67 1 1. 05 1. 09 1. 18 1. 37 1. 60 1. 69 1. 79 1. 97 2. 07 2. 09 2. 16 2. 30
3 0. 63 0. 74 1 1. 09 1. 19 1. 17 1. 55 1. 74 1. 84 1. 94 2. 14 2. 27 2. 30 2. 38 2. 53
4 0. 63 0. 68 1 1. 09 1. 19 1. 17 1. 55 1. 70 1. 84 1. 94 2. 13 2. 26 2. 29 2. 37 2. 52
5 0. 63 0. 74 1 1. 09 1. 18 1. 17 1. 54 1. 70 1. 84 1. 94 2. 16 2. 26 2. 29 2. 37 2. 52
6 0. 58 0. 68 1 1. 09 1. 15 1. 18 1. 40 1. 70 1. 84 1. 90 2. 12 2. 22 2. 25 2. 32 2. 48
7 0. 57 0. 68 1 1. 04 1. 08 1. 19 1. 41 1. 65 1. 74 1. 83 2. 01 2. 11 2. 13 2. 20 2. 35
8 0. 57 0. 67 1 1. 04 1. 08 1. 19 1. 42 1. 63 1. 72 1. 81 1. 98 2. 07 2. 10 2. 16 2. 31
9 0. 58 0. 68 1 1. 04 1. 08 1. 19 1. 42 1. 65 1. 75 1. 83 2. 02 2. 11 2. 14 2. 20 2. 35
10 0. 57 0. 68 1 1. 04 1. 08 1. 18 1. 41 1. 65 1. 74 1. 83 2. 02 2. 11 2. 14 2. 21 2. 35
平均值 0. 59 0. 69 1 1. 06 1. 12 1. 18 1. 45 1. 67 1. 78 187 2. 06 2. 16 2. 19 2. 259 2. 407
2. 7　不同产地野葛药材的比较: 取不同产地的野葛药
材按供试样品溶液制法 ,制备供试溶液 ,测定得不同产
地药材的 HPLC图谱 ,见图 3。从测定结果看 ,三地产
的野葛药材指纹图谱比较相似 ,各共有峰都存在 ,但色
谱峰之间的相对峰面积并不相同 ,由此可以看出它们
之间的内在质量是有差别的。所以 ,指纹图谱正是通过
这种内在的差异 ,达到控制不同批次、产地的药材。
3　讨论
3. 1　本实验采用甲醇 -水梯度洗脱法 ,使葛根中大
部分黄酮类化合物得到了较好的分离 ,得到较完整
的 HPLC色谱图。本法精密度和重现性好 ,可以用
来评价和控制野葛内在质量。
3. 2　本实验所用材料来自安徽霍山葛根基地 ,从指
纹图谱看 , 10批样品具有较好的相似性 ,平均共有
峰总面积在 94%以上。 因此 ,利用指纹图谱可以较
好地控制葛根样品的内在质量。另一方面说明 ,建立
·662· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 7期 2003年 7月
表 2　 10批样品共有峰相对峰面积
Table 2　 Relative areas of common peaks for ten batches of samples
样品 共有峰相对保留时间
1 2 3( S) 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
1 　 0 　 0. 04　 1 　 0. 03　 0. 15　 0. 15 　 0. 11　 0. 11　 0. 01 　 0. 02　 0. 01　 0. 02 　 0 　 0 　 0. 1
2 0. 01 0. 07 1 0. 05 0. 07 0. 21 0. 12 0. 13 0 0 0. 01 0. 01 0 0. 01 0. 02
3 0. 01 0. 05 1 0. 03 0. 16 0. 16 0. 12 0. 1 0 0. 03 0 0. 02 0. 01 0 0. 05
4 0. 01 0. 05 1 0. 04 0. 16 0. 16 0. 11 0. 16 0 0. 03 0 0. 02 0. 01 0 0. 05
5 0. 01 0. 05 1 0. 04 0. 2 0. 2 0. 12 0. 05 0. 01 0 0 0. 01 0. 01 0 0. 04
6 0 0. 03 1 0. 12 0. 13 0. 13 0. 13 0. 07 0. 01 0. 02 001 0. 01 0. 01 0 0. 05
7 0. 01 0. 05 1 0. 04 0. 05 0. 21 0. 14 0. 08 0. 01 0. 04 0. 01 0 0. 01 0 0. 03
8 0. 01 0. 05 1 0. 03 0. 11 0. 08 0. 18 0. 02 0. 01 0. 04 0. 02 0. 01 0. 01 0. 01 0. 03
9 0. 01 0. 03 1 0. 03 0. 11 0. 11 0. 13 0. 01 0. 01 0. 04 0. 01 0. 01 0. 01 0 0. 08
10 0. 01 0. 05 1 0. 07 0. 09 0. 3 0. 08 0. 05 0. 01 0. 03 0. 02 0 0 0 0. 03
平均值 0. 01 0. 05 1 0. 048 0. 12 0. 173 0. 12 0. 08 0. 007 0. 025 0. 009 0. 01 0. 005 0. 005 0. 047
R SD /% 0. 42 2. 47 0. 00 2. 69 4. 60 3. 64 2. 05 4. 52 0. 31 1. 31 0. 57 0. 51 0. 09 0. 17 2. 41
A-南京　 B-陕西　 C-沈阳　 D-广州 (粉葛 )
A-Nanjing　 B-Sh aanxi　 C-Shenyang　 D-Guangzhou ( P. thomsonti )
图 3　不同产地葛根指纹图谱
Fig. 1　HPLC fingerprint chromatogram of Radix Pueraniae f rom dif ferent sources
表 3　 10批样品共有峰峰面积
Table 3　Areas of common peaks for ten batchs of samples
样品 共有峰总面积 总峰面积
共有峰总面
积百分比 /%
1 　　 8 030. 5 　　　 8 524. 6 　　　 94. 20
2 10 591. 0 11 093. 0 95. 48
3 6 672. 3 6 964. 8 95. 80
4 7 259. 6 7 420. 6 97. 83
5 6 424. 1 6 639. 2 96. 76
6 7 343. 5 7 546. 5 97. 31
7 7 846. 4 8 341. 9 94. 06
8 10 189. 0 11 003. 0 92. 60
9 6 259. 5 6 825. 3 91. 71
10 8 578. 8 9 475. 2 90. 54
野生药材种植生产基地 ,能很好地使药材质量稳定。
3. 3　野葛与粉葛的指纹图谱差异较大 ,说明种间的
成分差别较大 ,所以 ,生产过程中一定要使用同品种
的原料 ;不同产地野葛的指纹图谱相似 ,各共有峰都
存在 ,只是各峰面积及相对面积有差异。
References:
[1 ]　Ch P (中国药典 ) [S ]. 2000 ed. Vol I.
[2 ]　 Gu Z P, Lian W Y, Ch en B Z, et al . An invest igation on the
plan t res ource of Chinese m edicine“ Gegen” ( g enus Pueraria
DC) [J ]. Chin Med Mater (中药材 ) , 1993, 16( 8): 13.
[3 ]　 Gu Z P, Ch en B Z, Feng R Z, et al . Th e s ource uti lization
and evaluation of medical KuDZu and roots f rom th e g enus
plants Pueraria DC. in China [ J] . Acta Pha rm Sin (药学学
报 ) , 1996, 31( 5): 387.
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