全 文 ：阿胶远志膏的质量标准研究
刘 霞,倪 艳,郝旭亮, 王瑞明,李先荣
(山西省中医药研究院, 山西 太原 030012)
阿胶远志膏由地黄、麦冬、远志等 10余味中药
研制而成,具有滋阴补血与养心安神之功效,既能治
阴血少,营液不足,心神不宁之本,又治虚烦少寐,精
神恍惚, 夜寐多梦、健忘失眠、头晕、头疼心悸之标。
为了控制质量,本实验采用 T LC 法对远志、麦冬、丹
参、当归药味进行定性鉴别, 并采用 HPLC 法测定
了阿胶远志膏中梓醇的含量,方法简便,获得了满意
的结果。
1 仪器与试剂
美 国 HP1100 高 效 液 相 色 谱 仪, 包 括
HPG1322A 真 空脱 气 泵, HPG1311A 四元 泵,
HPG1313A ALS 自动进样器, HPG1315DAD 二极
管阵列检测器。HP Chemstat ion Sy stem 化学工作
站;电子天平(德国赛多利斯 BP211D)。乙腈为色谱
纯,水为重蒸馏水,其他化学试剂为分析纯。大孔吸
附树脂 ZTC-1(吸附皂苷型, 天津南开大学正天成
澄清有限公司)。梓醇对照品(批号: 0808-9803)和各
对照药材购自中国药品生物制品检定所。阿胶远志
膏由山西省榆社阿胶厂提供。
2 薄层鉴别
2. 1 远志的鉴别:取本品 5 g ,加等量的硅藻土研
匀,干燥, 加甲醇 50 mL, 超声处理 15 m in, 滤过,滤
液蒸干,残渣加水 50 mL 使溶解,用 15%甲醇-氯仿
溶液振摇提取 2次,每次 30 mL,弃去氯仿层,母液
用水饱和的正丁醇振摇提取 3次,每次 20 mL,合并
正丁醇液, 蒸干, 残渣加甲醇 1 mL 使溶解,作为供
试品溶液。另取远志对照药材 0. 2 g, 加水 50 mL 煎
煮 2次,每次 0. 5 h, 合并煎煮液, 浓缩至 10 mL,同
法制备对照药材溶液。取缺远志阴性样品5 g, 同法
制得阴性对照溶液。分别吸取 3种溶液各 5 L,分
别点于同一硅胶 G 薄层板上, 以正丁醇-冰醋酸-水
( 5∶1∶4)为展开剂,展开,取出, 晾干,喷以 10%硫
酸乙醇试液, 热风吹干至斑点清晰。供试品色谱中,
在与对照品色谱相应位置上,显相同颜色的斑点,阴
性对照在相应位置上无干扰(图 1-A)。
2. 2 丹参的鉴别:取丹参素钠对照品, 加甲醇制成
1 mg/ mL 溶液, 作为对照品溶液。取缺丹参阴性样
品 5 g ,同法制成阴性对照溶液。分别吸取 2. 1项下
供试品溶液和上述两种溶液各 5 L,分别点于同一
硅胶 G薄层板上, 以氯仿-丙酮-甲酸( 25∶10∶4)为
展开剂,展开,取出, 晾干,用氨蒸气熏后,放置过夜,
在紫外光灯( 365 nm )下检视, 供试品色谱中, 在与
对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性
对照在相应位置上无干扰(图 1-B)。
2. 3 麦冬的鉴别:取 2. 1项下供试品溶液,蒸干, 加
盐酸溶液( 9→50 mL) 50 mL, 置沸水浴中水解 1 h,
放至室温后,用氯仿振摇提取 3 次, 每次 20 mL, 合
并氯仿液,蒸干,残渣加甲醇 1 mL 使溶解, 作为供
试品溶液。另取麦冬对照药材 0. 3 g 煎煮 2次,每次
0. 5 h,合并煎煮液,按供试品溶液的制备方法制得
对照药材溶液。取阴性样品 5 g ,同法制得阴性对照
溶液。分别吸取以上3种溶液各10 L,点于同一硅
胶 G 的薄层板上, 用甲苯-醋酸乙酯-甲酸( 14∶4∶
0. 5)为展开剂, 展开、取出、晾干, 在紫外光灯( 365
nm )下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的
位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照在相应位置上
无干扰(图 1-C)。
2. 4 当归的鉴别: 取样品 15 g ,加水 150 mL 摇匀,
用 2 mol/ L 盐酸调 pH 1～2,用乙醚振摇提取 3次,
每次 30mL(乳化时加少许甲醇) , 合并乙醚液, 挥
干, 残渣加甲醇 1 mL 使溶解, 作为供试品溶液。另
取 0. 7 g 当归药材,加水 50 mL 煎煮 2次, 每次 0. 5
h, 合并煎煮液,同法制得对照药材溶液。取缺当归
阴性样品 15 g, 同法制得阴性对照溶液。分别吸取以
上 3种溶液各 15 L,点于同一硅胶 G 的薄层板上,
用甲苯-醋酸乙酯-甲酸( 14∶4∶0. 5)为展开剂, 展
开、取出、晾干,喷以 9%三氯化铁溶液,热风吹至斑
点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的
位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照在相应位置上
无干扰(图 1-D)。
·41·中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 35 卷第 1 期 2004年 1月
收稿日期: 2003-04-12作者简介:刘 霞( 1965—) ,女,山西省闻喜人,副主任药师, 1988年毕业于沈阳药学院,从事中药新药的开发研究。T el: ( 0351) 4168040
1～3-供试品 4-阴性对照 1～3-供试品 4-丹参素钠 1～3-供试品 4-麦冬对照药材 1～3-供试品 4-阴性对照
5-远志对照药材 5-阴性对照 5-阴性对照 5-当归对照药材
1—3-samp les 1—3-samples 1—3-samples 1—3-sam ples
4-negative s am ple 4-Dansh ensu 4-R adix Op hiop ogoni s cr ude drug 4-n egat ive sample
5-R adix Doly galae crude dr ug 5-negat ive sample 5-negat ive s ample 5-R adix A ngel icae
S inensi s cr ude drug
图 1 远志( A)、丹参(B)、麦冬(C)和当归(D)的 TLC 图谱
Fig. 1 TLC chromatograms of Radix Polygalae ( A) , Radix Salviae Miltiorrhizae (B) ,
Radix Op hiop ogonis (C) , and Radix Angelicae Sinensis (D)
3 含量测定
3. 1 色谱条件:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂
( 4. 6 mm×250 mm) ; 柱温: 室温; 流动相: 水-乙腈
( 98. 5∶1. 5) ; 流速: 1. 0 mL/ m in; 检测波长: 204
nm。理论塔板数按梓醇峰计算可达 4 000以上,不
低于 2 000。
3. 2 对照品溶液的制备: 精密称定梓醇对照品
1. 39 mg, 加水制成 0. 139 mg / mL 的溶液,即得。
3. 3 供试品溶液的制备:取本品约 2. 5 g, 精密称
定。加水 5 mL 使溶解,加在已处理好的大孔吸附树
脂柱( 40 g, 2. 5 cm×20 cm )上, 先用 200 mL 水洗
涤, 弃去, 再用 200 mL 20%甲醇洗脱, 收集洗脱液
(弃去前 20 mL) , 减压浓缩至干, 残渣用水溶解后转
移至 10 mL 量瓶中,并稀释至刻度,摇匀, 用微孔滤
膜( 0. 45 m)滤过,即得。
3. 4 阴性对照溶液的制备:按处方量称取除地黄外
阴性样品 2. 5 g ,同法制得阴性对照溶液。
3. 5 空白试验:照上述色谱条件, 吸取供试品溶液、
对照品溶液、阴性对照溶液、水各 10 L, 分别注入
色谱仪。供试品溶液色谱中,在与对照品色谱相应位
置上,有一相同的色谱峰, 阴性对照液、水在此保留
时间无干扰(图 2)。
* -梓醇
* -catalpoe
图 2 阴性对照( A)、溶剂(B)、梓醇对照品(C)和样品(D)的 HPLC 图谱
Fig. 2 HPLC chromatograms of blank control ( A) , solvent (B) , catalpol (C) , and sample (D)
3. 6 线性关系的考察: 分别精密吸取 2. 5, 5, 10,
15, 20, 25 L 对照品溶液,注入液相色谱仪, 测定峰
面积, 得回归方程: Y = 696. 022 37X + 2. 557 6,
r= 0. 999 9。结果表明,梓醇在 0. 347 5～3. 475 0 g
时与峰面积有良好的线性关系。
3. 7 精密度试验:精密吸取对照品溶液 10 L, 按
·42· 中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 35 卷第 1 期 2004年 1月
上述色谱条件重复进样 5 次, 测定峰面积, 结果
RSD= 0. 15% ,表明精密度良好。
3. 8 重现性试验:取本品 2. 5 g 共 5份,精密称定,
同法测定。梓醇含量为 0. 495 mg / g , RSD= 2. 07%。
3. 9 回收率试验: 精密称取已知含量的样品,精密
加入梓醇对照品, 按供试品溶液制备方法提取测定,
测得梓醇峰面积并计算含量, 平均回收率为
97. 7% , RSD= 1. 54% ( n= 5)。
3. 10 样品测定:分别精密吸取对照品溶液与供试
品溶液各 10 L,按上述色谱条件测定,以外标一点
法计算样品中梓醇的含量, 结果见表 1。
表 1 阿胶远志膏中梓醇含量( n= 3)
Table 1 Content of catalpol in Ej iao Yuanzhi
Extractum ( n= 3)
批号 梓醇/ (m g·g- 1) RSD/ %
000506 0. 359 2. 01
000508 0. 156 1. 68
000528 0. 200 0. 63
4 讨论
4. 1 当归中主要含有挥发油、有机酸、糖类、维生素
等多种成分, 文献报道的定性方法以检测挥发油和
有机酸类的阿魏酸为主。本品中难以检出挥发油成
分, 同时阿魏酸鉴别阴性有干扰, 经过反复摸索, 建
立了当归其他特征成分的检测方法, 也为当归中挥
发油、有机酸成分以外的其他当归的水溶性成分建
立了很好的薄层鉴别方法。
4. 2 在供试品溶液的制备中,经过多方筛选, 确定
了用大孔吸附树脂柱进行分离纯化。经检验, 水洗脱
时洗脱液中无梓醇, 经过 200 mL 20%甲醇溶液的
洗脱,再用甲醇洗脱,经检测甲醇洗脱液中不含梓醇
成分,故确定收集 20%甲醇洗脱液部分。在流动相
的选择上,根据文献报道 [ 1]进行了反复试验, 当减少
水的含量而增加乙腈的含量时,虽然洗脱能力增强,
但是梓醇的色谱峰与其他色谱峰相互叠加分离不
开,干扰严重;当增加水的含量达到水-乙腈( 99∶1)
时, 虽然互不干扰, 但是对梓醇的洗脱能力明显减
弱,几乎检测不出梓醇的色谱峰,故最终确定流动相
为水-乙腈( 98. 5∶1. 5)。
References:
[1] M iao M S, Li Z G. Moder n Pr atic al Controll ing T echnology of
Chinese Med icine Quali ti es ( 现代实用中药质量控制技术)
[ M ] . Bei jing: Peoples M edical Publ ishin g House, 2000.
HPLC法测定兔血浆中蛇床子素的含量
安 芳, 王书华,张丹参,张 力
(河北北方学院 化学药理学教研室,河北 张家口 075029)
蛇床子素又名甲基欧芹酚( osthol, Ost ) ,是从
伞形科植物蛇床成熟果实中提取的香豆素。国产蛇
床子主要含香豆素类, 其中蛇床子素的含量最
高[ 1～ 2]。蛇床子素具有抑制心脏、扩张血管、镇静、镇
痛作用、对记忆的保持作用、抗诱变、抗癌作用
等[ 3～ 9]。蛇床子素的测定方法报道较多,但在组织中
和血液中采用 HPLC 法测定蛇床子素的浓度方法
未见报道。本实验以丹皮酚为内标,建立了 HPLC
法测定兔血浆样品中蛇床子素含量的分析方法,适
用于该药品的临床监控、药动学和生物利用度研究。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪(美国) ; D—37520
冷冻离心机(德国 Heraeus) ; GR—202AND 分析天
平(日本) ; 756MC 紫外可见分光光度计(上海)。
蛇床子素(购自南京药物研究所植化室, 纯度为
99% ) , 乙腈、甲醇为色谱纯;丹皮酚(中国药品生物
制品检定所,批号 0708-9704) ;肝素钠(北京市海淀
区微生物培养基制品厂) ;实验用水为三重蒸馏水。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件: 色谱柱为 YWG C18 ( 10 m, 4. 6
mm×250 mm) ,流动相为甲醇-水( 80∶20) , 流速为
1 mL/ min,检测波长为 322 nm ,柱温为 25 ℃,进样
量为 10 L。
2. 2 检测波长选择: 精确称取蛇床子素, 加入 N ,
N -二甲基甲酰胺溶解,聚山梨酯 80助溶, 用生理盐
水稀释为 30 g/ mL( N , N -二甲基甲酰胺最终浓度
·43·中草药 Chinese T raditional and Herbal D rug s 第 35 卷第 1 期 2004年 1月
收稿日期: 2003-04-18基金项目:河北省科技攻关项目(d 00276147)作者简介:安 芳,男,河北省张家口市人, 硕士,副教授, 主要从事中药分析与提纯及体内检测的药理研究,发表论文数十篇, 其中被
SCI 收录 2篇。Tel: ( 0313) 8045184 E-mail : anfan g1965@yahoo. com . cn