全 文 ：和 11. 8% 。在胞外含 1 mmol /L Ca2+时 ,人参皂苷 -
Rg1和阿司匹林均显著降低粘附率 ,其 IC50分别为
81. 2和 70. 3μmo l /L (表 2)。
表 2　对凝血酶 ( 0. 2 U /mL)激活的大鼠血小板
与中性粒细胞间粘附的影响 ( x± s, n= 5)
浓　度
(μmol /L)
人参皂苷 -Rg1
粘附率 (% ) IC50 (μmo l / L)
阿司匹林
粘附率 (% ) IC50(μmol / L)
生理盐水 65. 4± 6. 4 65. 4± 6. 4
37. 5 46. 3± 7. 3* 52. 3± 3. 4
75 33. 8± 4. 3* * 27. 9± 3. 1* *
150 19. 5± 4. 5* * 17. 7± 1. 6* *
300 14. 6± 4. 1* * 81. 2 13. 7± 2. 533 70. 3
　　与生理盐水比: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
3　讨论
国内就人参皂苷-Rg1的药理研究基本侧重其对
血小板活化这一单一因素的探讨。近来研究表明血栓
形成是由包括血小板、白细胞及内皮细胞等多细胞间
相互作用所致 [3 ] ,因此有必要从多细胞多因子去探讨
血栓的形成与发展 ,以阐明药物作用的新机制。
电刺激大鼠颈动脉所形成的血栓与人体动脉血
栓相似。采用血流量仪替代点式温度计来判断 O T,
则排除了室温的影响 ,其结果更精确可靠。 人参皂
苷 -Rg1 25 mg /kg明显延长动脉 O T,效果明显强于
10 mg /kg阿司匹林 ,表明人参皂苷 -Rg1具有较强的
抗动脉血栓形成作用。
本研究结果表明 ,人参皂苷-Rg1显著降低凝血
酶激活的血小板与白细胞间的粘附率 ,提示人参皂
苷 -Rg1的抗栓作用与其抑制该两细胞间的粘附作用
密切相关。在细胞外存在 1 mmol /L Ca2+ 时生理盐
水组的粘附率为 65. 4% ,而胞外含有 5 mmol /L
EGT A时 ,则粘附率仅为 11. 8% ,说明激活的血小
板与白细胞间的粘附是钙离子依赖性的 ,同时揭示
人参皂苷 -Rg1抑制两细胞间的粘附可能与阻抑血小
板或白细胞内的钙动员有关 ,本研究组将对此作进
一步的探讨。心肌梗死时的血循环中的血小板-白细
胞花结明显增加 ,加重梗死程度和范围 [7 ] ,人参皂
苷-Rg1能显著减少花结形成 ,显然为其防治缺血性
心脑血管等疾病提供了又一科学依据。
综上所述 ,人参皂苷-Rg1通过抑制白细胞与血
小板间的粘附而发挥较强的抗血栓形成作用 ,这为
其用于防治心脑血管血栓栓塞性疾病提供了进一步
的科学依据。
参考文献:
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植物多糖增强肿瘤杀伤效应细胞的增殖活性和细胞毒活性
魏虎来 1, 2 ,姚小健 2 ,赵怀顺 1 ,贾正平 3⒇
( 1. 兰州医学院 医学实验中心 ,甘肃 兰州　 730000; 2. 兰州医学院血液病研究所 ,甘肃 兰州　 730000; 3. 兰州军
区总医院 药材科 ,甘肃 兰州　 730050)
摘　要: 目的　观察红景天、红芪、地黄、枸杞子、沙参和芦荟的多糖成分对 T-AK细胞增殖活性和杀瘤活性的增强
作用。方法　用抗 CD3单抗 ( CD3McAb)和 r IL-2激活诱生 T-AK细胞 ,观察 6种植物多糖在诱生、扩增和杀瘤过
·140· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 2期
⒇ 收稿日期: 2001-05-01作者简介:魏虎来 ( 1962-) ,男 ,甘肃人 ,医学硕士 ,教授 ,硕士研究生导师 ,甘肃省高等学校跨世纪学科带头人、甘肃省跨世纪学术技术带头人 (“ 333科技人才工程” ) ,甘肃省免疫学会常务理事 ,中国民主同盟兰州医学院委员会副主任委员。 主要研究方向为白血病的细胞分子生物学研究、白血病细胞耐药干预对策研究和免疫血液学研究。 主持和参与多项科研项目 ,发表学术论文 40余篇 ;获甘肃省科技进步二等奖 1项、三等奖 2项 ,甘肃省高校科技进步二等奖 2项 ,甘肃省医药卫生科技进步二等奖和三等奖各 1项 ,并荣获第三届甘肃青年科技奖。 Tel: 0931-8761779　 E-mail: w eihil@ public. lz. gs. cn
程中对 T-AK细胞增殖活性、 IL-2R表达水平以及杀伤 Raji细胞和 L1210细胞活性的影响。 结果　 6种植物多糖
( 1～ 100μg /mL )单独对 T-AK细胞的增殖无明显作用 ,但在 r IL-2和 CD3McAb存在下 ,可不同程度地增强 T-
AK细胞的增殖能力和杀瘤活性 ,并增加 T-AK细胞 IL-2R的表达。 结论　红景天、红芪、地黄、枸杞子、沙参和芦
荟的多糖成分增强 T-AK细胞的增殖和杀伤活性 ,其作用效应与其促进 IL-2R的表达有关。
关键词: 多糖 ; T-AK细胞 ;增殖 ; IL-2受体 ;细胞毒活性
中图分类号: R286. 91　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 02 0140 04
Enhancement of proliferaton and tumoricidal activities of
T-AK cells by plant polysaccharides
WEI Hu-lai1, 2 , Y AO Xiao-jian2 , ZHAO Huai-shun1 , JIA Zheng-ping3
( 1. Medical Experimental Center , Lanzhou Medica l Co llege , Lanzhou Gansu 730000, China; 2. Institute of Hema tolog y,
Lanzhou M edical Colleg e, Lanzhou Gansu 730000, China; 3. Depar tment o f Chinese Medicinal Materials,
Lanzhou Gene ral Hospital of Lanzhou Command, PLA, Lanzhou Gansu 730050, China)
Abstract: Object　 To study the augmentation of the T-activa ted killer ( T-AK) cell-prolifera ting and
tumo r-ki lling activi ties o f the poly saccha ride f raction f rom Rhodiola kirilowii ( Regel ) Regel, Lycium
barbarum L. , Hedysarum polybotrys Hand. -M azz. , Glehnia l ittoral is F. Schmidt ex Miq. , Rehmannia
glut inosa ( Gaert. ) Libo sch. ex Fisch. et Mey. and Aloe barbadensis Mill. in vit ro. Methods　 The T-AK
cells w ere induced by anti-CD3 antibody ( CD3McAb) and r IL-2 from human peripheral blood mononuclea r
cells ( PBMC). The ef fects o f the above six plant poly saccha rides ( 1～ 100μg /mL) on the proliferation of
T-AK cell, the cy to tox icity to Raji cells and L1210 cells, and the IL-2 receptor ( IL-2R) expression in T-AK
cells were determined. Results　 The six polysaccharides alone had no obvious effect on the proli feration of
T-AK cells. In the presence o f r IL-2 and CD3McAb, they could reinfo rce the prolifera tion of T-AK cells
and i ts tumo r-killing activi ties against Ra ji cells and L1210 cel ls at a di fferent ex tent , and a 21% ～ 68%
increase o f IL-2R expression in T-AK cel ls w as observ ed. Conclusion　 The plant po lysaccharides
signi ficant ly enhance the proliferation and the tumoricidal activ ities of T-AK cells and the enhancing
actions related to the increase of IL-2R expression.
Key words: polysaccharides; T-activ ated killer ( T-AK) cell; proli feration; IL-2 recepto r ( IL-2R) ;
cy to toxicity
　　以免疫治疗为代表的肿瘤生物治疗是重要的肿
瘤辅助治疗方法 [ 1～ 3]。在肿瘤生物治疗中应用增强
肿瘤杀伤细胞活性的物质 ,是提高疗效的有效途径。
研究表明许多中药或其有效成分具有多方面的免疫
调节活性 ,能够增强免疫活性细胞的功能 [4～ 6 ]。本研
究观察了狭叶红景天、红芪、枸杞子、地黄、沙参和芦
荟等 6种中药的多糖成分对 rIL-2和抗 CD3抗体
( CD3McAb ) 共刺激的高效杀瘤效应细胞—— T-
AK ( T-activa ted killer )细胞增殖和细胞毒活性的
促进作用。
1　材料与方法
1. 1　材料
1. 1. 1　中药材: 狭叶红景天 Rhodiola kirilowii
( Regel ) Regel 采自青藏高原 , 红芪 Hedysari
polybotrys Hand. -Mazz. 、枸杞子 Lycium barbarum
L.、沙参 Glehniae li ttoral is F. Schmidet ex Miq.、
地黄 Rehmannia glutinosa ( Gaert. ) Libo sch. ex
Fisch. et Mey.、芦荟 Aloe barbadensis Mill. 为市
售 ,均为正品。
1. 1. 2　主要试剂: r IL-2和 CD3McAb (军事医学科
学院 ) ; M T T ( Sigma公司 ) ; CD25单抗 (中国医学科
学院血研所 ) ; APAAP试剂盒 (北京邦定生物医学
公司 )。
1. 1. 3　正常新鲜血液:甘肃省红十字血液中心。
1. 1. 4　靶细胞: Raji细胞和 L1210细胞均由本所传
代保存。
1. 2　方法
1. 2. 1　多糖制备:参照文献 [4, 5 ]改进。药材洗净后水
煎提取 ,超滤、浓缩 ,分级醇提 , 80% 醇提组分经除
蛋白纯化 ,乙醇、丙酮、乙醚洗涤 ,干燥即得总多糖粗
品 ,共 6种: 红景天多糖 ( RKP) ,枸杞子多糖
( LBP) ,红芪多糖 ( RHP) ,沙参多糖 ( RGP) ,地黄
多糖 ( RRP) ,芦荟多糖 ( ABP)。苯酚 -硫酸法测定总
糖含量分别为 RKP 92% , LBP 96% , RHP 95% ,
RGP 90% , RRP 92% , ABP 91%。实验时用 RPM I
1640培养液溶解 ,调 pH值 ,过滤除菌或高压灭菌 ,
·141·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 2期
4℃ 保存备用。
1. 2. 2　 T-AK细胞诱生:参见文献 [ 1, 3, 7, 8 ]。从正常
外周血液分离出单个核细胞 ( PBMC) , 2× 106 /mL
接种于含 r IL-2 ( 100 U /mL) 和 CD3McAb ( 1. 0
μg /mL)的 RPM I 1640培养基中激活培养 ,并适时
传代扩增。 观察多糖的作用时 , r IL-2和 CD3McAb
量均减少一半。
1. 2. 3　 T-AK细胞的增殖活性: T-AK细胞激活后
扩增时加入不同浓度的多糖 ,培养一定时间后用
MT T法 [8 ]检测增殖指数 ( GI)。
GI= 多糖组 A570 /对照组 A570
1. 2. 4　 T-AK细胞杀伤活性: 在 T-AK细胞的诱
生、杀瘤和扩增阶段分别加入多糖 , M T T法 [3, 7 ]检
测多糖对 T-AK细胞杀伤活性的影响。
1. 2. 5　 T-AK细胞 IL-2受体 ( IL-2R, CD25+ ) 表
达: 采用 APAAP法 [ 3] ,结果以阳性细胞百分数
表示。
2　结果
2. 1　植物多糖增强 T-AK细胞的增殖活性:所用 6
种多糖 ( 1～ 100μg /mL) 单独对 PBMC的增殖无
明显影响 ;对激活的 T-AK细胞的增殖有轻微的刺
激作用 ( 2%～ 15% ,数据未列 )。 但当 r IL-2和
CD3McAb存在时 ,这些多糖对 T-AK细胞的增殖
有较明显的促进作用 (表 1)。
表 1　 6种植物多糖对 T-AK细胞增殖活性的影响 (n= 8)
浓　度
(μg /m L)
多　糖 ( GI)
RKP LBP RGP ABP RRP RHP
　 0 1. 00± 0. 00 1. 00± 0. 00 1. 00± 0. 00 1. 00± 0. 00 1. 00± 0. 00 1. 00± 0. 00
　 1. 0 1. 06± 0. 02 1. 01± 0. 02 0. 98± 0. 02 1. 08± 0. 01 1. 08± 0. 03 1. 02± 0. 01
　 5. 0 1. 12± 0. 04* 1. 18± 0. 04* 1. 04± 0. 02 1. 15± 0. 03* 1. 08± 0. 02 1. 09± 0. 03
10. 0 1. 33± 0. 05* * 1. 28± 0. 06* * 1. 08± . 05* 1. 21± 0. 02* 1. 19± 0. 04* 1. 20± 0. 04*
50. 0 1. 18± 0. 04* 1. 19± 0. 03* 1. 24± 0. 06* 1. 29± 0. 06* * 1. 07± 0. 03 1. 05± 0. 02
100. 0 0. 98± 0. 03 1. 10± 0. 02 1. 05± 0. 03 1. 15± 0. 04* 0. 98± 0. 06 1. 05± 0. 01
　　　　与对照组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
2. 2　植物多糖增强 T-AK细胞的细胞毒活性: 在
T-AK细胞的诱生激活阶段和效、靶细胞作用过程
中加入一定量的多糖 ,可不同程度地增强 T-AK细
胞杀伤 Ra ji细胞和 L1210细胞的活性 ,以低效靶比
( E /T )时尤为明显 ,最高可达 2倍 (表 2) ; T-AK细
胞与 Ra ji细胞或 L1210细胞作用过程中加入多糖 ,可
使 T-AK细胞的杀 伤活性提高 7. 1%～ 26%
(表 3)。
表 2　激活过程中多糖对 T-AK细胞杀伤活性的影响 (n= 8)
多糖 浓　度
(μg /m L)
不同 E / T杀伤活性 (% )
20∶ 1　 10∶ 1　 5∶ 1　 2. 5∶ 1　
对　照 - 84. 36± 6. 50 70. 13± 8. 14 44. 19± 4. 04 25. 00± 5. 52
RKP 10. 0 89. 23± 7. 33 83. 88± 6. 55* 68. 00± 6. 50* * 44. 87± 5. 19* *
LBP 10. 0 90. 49± 9. 18 83. 61± 5. 05* 64. 99± 6. 66* 42. 08± 3. 34* *
ABP 50. 0 89. 34± 4. 26 75. 48± 3. 36 58. 14± 3. 87* 39. 21± 2. 20*
RRP 10. 0 88. 88± 6. 64 86. 16± 8. 04* 62. 09± 4. 54* 41. 19± 3. 16*
RGP 50. 0 87. 76± 6. 55 84. 08± 8. 35* 55. 16± 4. 33* 39. 94± 4. 91*
RHP 10. 0 88. 61± 8. 10 75. 35± 2. 98 58. 17± 7. 31* 43. 09± 4. 99* *
　　　　与对照组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
表 3　效、靶作用过程中多糖对 T-AK
细胞杀伤活性的影响 (n= 4)
多　糖 浓　度
(μg /m L)
杀伤活性 ( E /T= 10∶ 1% )
Raji L1210
对　照 - 71. 43± 4. 24 50. 50± 2. 71
RKP 10. 0 80. 25± 2. 28* 63. 65± 2. 96*
ABP 50. 0 79. 75± 3. 56* 57. 43± 6. 23
RHP 10. 0 76. 53± 1. 85 58. 43± 6. 25
RRP 10. 0 78. 62± 2. 16 59. 83± 5. 75*
　　与对照组比较: * P < 0. 05
2. 3　植物多糖促进 T-AK细胞 IL-2R的表达:在
T-AK细胞的培养体系中加入适量的多糖 , T-AK
细胞 IL-2R ( CD25+ ) 的表达量明显增加 ,提高
21% ～ 68% 不等 (表 4) ,基本与其对 T-AK细胞增
殖活性和杀伤活性的促进作用一致。
表 4　多糖对 T-AK细胞 IL-2R表达的影响 (n= 3)
多　糖 浓度 (μg /m L) CD25+ (% ) 多糖 /对照
对　照 - 40. 67± 1. 89 1. 00
RKP 10. 0 68. 36± 4. 38* 1. 68
ABP 50. 0 58. 00± 7. 78 1. 43
LBP 10. 0 64. 00± 3. 74* 1. 57
RHP 10. 0 60. 67± 8. 18 1. 43
RRP 10. 0 61. 00± 3. 74* 1. 50
RGP 50. 0 49. 33± 7. 41 1. 21
　　与对照组比较: * P < 0. 05
·142· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 2期
3　讨论
抗 CD3抗体和 r IL-2共激活的 T-AK细胞是具
有 LAK细胞和 CD3AK细胞共同特性的异质细胞
群体 ,是一类较为理想的可用于白血病 (肿瘤 )生物
治疗的高效杀瘤效应细胞 ,在小鼠白血病等肿瘤的
生物治疗中取得了较好的效果 [ 1～ 3, 8 ]。
免疫调节剂可增强免疫活性细胞和杀瘤效应细
胞的活性 ,许多植物多糖成分具有生物反应调节剂
( BRM )样作用 ,具有广谱防癌抗癌和调节免疫功能
的作用 [4～ 6, 8 ]。 本研究证实 , RK P、 LBP、 ABP、 RGP、
RRP、 RHP等 6种植物多糖在 rIL-2和 CD3McAb
存在下 ,可不同程度地促进 T-AK细胞的增殖活性
和杀伤 Raji细胞、 L1210细胞的活性 ,在低 E / T时尤
为显著 ,可达 2倍。同时适量的多糖能增加 T-AK
细胞 IL-2受体的表达量 ,说明植物多糖对 T-AK
细胞活性的增强作用可能通过增加 IL-2R的表达
量 ,协同 IL-2对 T-AK细胞的刺激作用 ,提示植物
多糖对 T-AK细胞活性的增强效应部分与促进 IL-
2R的表达有关。
植物多糖对免疫活性细胞无直接刺激作用。研
究发现巨噬细胞表面存在多糖受体 ,多糖成分可与
巨噬细胞上的受体结合 [9 ] ,启动和活化巨噬细胞使
其分泌细胞活性因子 ,活化巨噬细胞及其释放的活
性因子的间接作用促进淋巴细胞等免疫活性细胞的
功能 ;同时 ,淋巴细胞被 r IL-2等第一信号活化后也
可表达多糖受体 ,与多糖类物质结合而产生协同效
应。植物多糖由于其广谱作用和低毒性的特点 ,可作
为 BRM用于肿瘤生物治疗。
参考文献:
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海嘧啶毒性的实验研究
季宇彬 ,高世勇 ,孔　琪 ,张秀娟 ,杨宝峰⒇
(哈尔滨商业大学 制药工程系 ,黑龙江 哈尔滨　 150076)
摘　要:目的　研究海嘧啶的毒性作用。方法　通过海嘧啶对 FC小鼠和 S180 , H22荷瘤小鼠胸腺和精囊重量及指数
的研究 ,观察海嘧啶的毒性作用。结果　海嘧啶可使不同荷瘤小鼠胸腺及精囊萎缩 ,使不同荷瘤小鼠白细胞及血小
板数量下降 ,但其萎缩及下降程度均小于 5-Fu。结论　海嘧啶在毒性方面产生了拮抗作用 ,使 5-Fu的毒性明显下
降 ,即海嘧啶在增强 5-Fu抗肿瘤作用的同时 ,显著降低了 5-Fu的毒性。
关键词: 海嘧啶 ;荷瘤小鼠 ;毒性作用
中图分类号: R285. 53; R286. 91　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 02 0143 03
Studies on toxicity of haimiding
JI Yu-bin, GAO Shi-yong , KONG Qi, ZHANG Xiu-juan, Yang Bao-feng
( Depa rtm ent o f Pha rmaceutical Engineering , Ha rbin Commercial Univ ersity , Harbin Heilong jiang 150076, China )
·143·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 2期
⒇ 收稿日期: 2001-06-11基金项目:由国家科委生命中心博士基金资助 (项目号: 96-901-06-10) ;中国优秀博士后基金资助 (中博号 [ 1999 ]17号 ) ;黑龙江省杰出青年基金资助 ( J9906) ;黑龙江省自然科学基金项目资助 (项目号: D-0018)作者简介:季宇彬 ,男 ,教授 ,硕士、博士研究生导师 , 44岁 ,多年来一直致力于中药药理、肿瘤药理、分子药理学研究 , 1999年进入哈尔滨医科大学博士后工作流动站工作。
* 哈尔滨医科大学博士后导师