全 文 ：预防非典型肺炎方剂对小鼠外周血液淋巴细胞 DNA损伤的影响
金顺姬 ,段　链 ,黄　梅 ,杨静玉 ,于　海 ,吴春福
(沈阳药科大学 药理教研室 ,辽宁 沈阳　 110016)
摘　要: 目的　研究预防非典型肺炎方剂对小鼠外周血液淋巴细胞 DN A的损伤作用。方法　应用单细胞凝胶电泳
方法测定 6个预防非典型肺炎方剂体内给药对小鼠外周血液淋巴细胞 DN A损伤的作用。结果　 ig给予预防非典
型肺炎方剂 Ⅰ 、Ⅴ 、Ⅵ ( 1 /3临床等效剂量、临床等效剂量、 3倍临床等效剂量× 3 d)对小鼠外周血液淋巴细胞 DNA
有明显的损伤作用 ,并呈剂量依赖关系。 预防非典型肺炎方剂Ⅱ 、Ⅲ 、Ⅳ ( 1 /3临床等效剂量、临床等效剂量、 3倍临
床等效剂量× 3 d)对小鼠外周血液淋巴细胞 DN A没有明显的损伤作用。 结论　预防非典型肺炎方剂Ⅰ 、Ⅴ 、Ⅵ 具
有潜在的遗传毒性。
关键词: 预防非典型肺炎方剂 ; DN A损伤 ; 单细胞凝胶电泳
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 08 0733 03
Effect of Chinese meteria medica prescriptions against SARS on lymphocyte
DNA damage in mice
JIN Shun-ji , DUAN Lian, HU ANG Mei , YAN G Jing-Yu, YU Hai , WU Chun-fu
( Depar tment of Pha rmacolog y , Shenyang Pharmaceutical Univ ersity, Shenyang 110016, China)
Abstract: Object　 To evalua te the genotoxici ty of the prescriptions against sev ere acute respiratory
syndrome ( SARS) in mice lymphocytes DN A damage in mice. Methods　 Six prescriptions w ere ig admin-
istered to the mice fo r 3 day s. The DN A damage w as measured in mice lymphocytes by means o f single cell
g el elect ropho resis a ssay ( SCGE, o r comet assay ) . Results　 Lymphocy te DN A damage w as distinct ly ob-
serv ed by administ ration of the prescriptionsⅠ ,Ⅴ and Ⅵ for 3 days at the doses o f 1 /3 to 3 times of the
clinically equiv alent do sage. There w as no signi ficant DN A damage by administ ra tion o f the prescriptions
Ⅱ , Ⅲ andⅣ fo r 3 days. Conclusion　 The prescriptionsⅠ , Ⅴ and Ⅵ po ssess po tential g eno tox ici ty.
Key words: prescriptions against SARS; DN A damage; sing le-cell g el elect ropho resis ( SCGE)
　　长期以来 ,人们认为中药的毒副作用较少甚至
没有 ,从而造成了对中药的应用剂量、疗程乃至适应
人群不加严格区分的局面。 近年来由中药造成的中
毒甚至致死事件屡有报道。 由冠状病毒引起的非典
型肺炎目前尚无特效治疗药物。 为预防非典型肺炎
在社会上进一步流行 ,经国家卫生部非典型肺炎防
治领导小组审定 ,国家中医药管理局向社会推荐了
6个预防非典型肺炎的中药方剂。 这些方剂在社会
上得到了较广泛的应用。尽管这些处方根据辩证分
别适用于不同体质的人群 ,但主要还是用于健康人
群预防非典型肺炎的感染。 6个方剂主要以清热解
毒药为主。然而 ,这些中药的安全性如何 ,是否适合
长期服用? 这些问题无论是在非典型肺炎的紧急时
期还是在平时的使用中都需要有一个科学地回答。
因此 ,本实验应用国际公认的可测定药物遗传毒性
的单细胞凝胶电泳技术 ( single cell g el elec-
tropho resis assay, SCGE) ,又称慧星试验 ( comet
assay) ,测定了 6个抗非典方剂体内给药对小鼠外
周血液淋巴细胞 DNA的损伤作用 ,以期从一个侧
面评价方剂的安全性。
1　材料
1. 1　方剂组成与煎煮方法: 方剂Ⅰ : 生黄芪 10 g、
败酱草 15 g、薏苡仁 15 g、桔梗 6 g、生甘草 3 g。方
剂Ⅱ : 鱼腥草 15 g、野菊花 6 g、茵陈 15 g、佩兰
10 g、草果 3 g。方剂Ⅲ :蒲公英 15 g、金莲花 6 g、大
青叶 10 g、葛根 10 g、苏叶 6 g。方剂Ⅳ:芦根 15 g、
金银花 10 g、连翘 10 g、薄荷 6 g、生甘草 5 g。方剂
Ⅴ : 生黄芪 10 g、白术 6 g、防风 10 g、苍术 6 g、藿香
10 g ,沙参 10 g、金银花 10 g、贯众 6 g。 方剂Ⅵ : 太
子参 15 g、贯众 6 g、金银花 10 g、连翘 10 g、大青叶
10 g、苏叶 6 g、葛根 10 g、藿香 10 g、苍术 6 g、佩兰
10 g。上述中药饮片均购自沈阳市药材公司。药材的
·733·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月
收稿日期: 2003-06-11作者简介:金顺姬 ( 1975— ) ,女 ,吉林人 ,沈阳药科大学药理学硕士 ,主要从事中药药理学研究。 　 E-mail: dearjs j0504@ sina. com
* 通讯作者　 Tel、 Fax: (024) 23843567　 E-mai l: wucf@ syphu. edu. cn
植物基源由沈阳药科大学药用植物教研室孙启时教
授鉴定 (表 1)。 按照卫生部防治非典型肺炎领导小
组公布的方法将上述方剂用水煎煮、浓缩至 3倍临
床等效量 ,临用前用生理盐水稀释至所需浓度。其中
组方中的薄荷、藿香、苏叶在药液沸腾后加入共煎。
表 1　预防非典型肺炎方剂所用中药的原植物
Table 1　 Scientif ic names of herbs used
in prescriptions against SARS
名称 原植物拉丁名称
黄　芪 Astragalus membranaceus ( Fis ch. ) Bunge
败酱草 Sonchus brachyotus DC.
薏苡仁 Coix lacr yma-jobi L. v ar. ma-yuen ( Roman. ) Stapf.
桔　梗 Platycodon g rand iglorum ( Jacq. ) A. DC.
甘　草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.
鱼腥草 Houtuyn ia cord ata Thunb.
野菊花 Ch rysan themum ind icum L.
茵陈蒿 A rtemisia cap illaria Thunb.
佩　兰 Eupator ium fortunei Tu rcz.
草　果 Amomun tsao-ko Crevos t et Lemai re
蒲公英 Tara xacum mongol icum Hand. -Mazz.
金莲花 Troll ius chinensis Bung e
大青叶 Isati s ind igot ica Fortune
苏　叶 Per illa f rutescens ( L. ) Brit t
芦　根 Phragmi tes communis Trin.
金银花 Lonicera japonica Thunb.
连　翘 Forsythia susp ensa ( Th unb. ) Vah l
薄　荷 Mentha haplocalyx Briq.
白　术 A tractylodes ma crocephala Koidz.
防　风 Saposhnikovia d ivaricata ( Tuecz. ) Schisch k
苍　术 A tractylodes lancea ( Thu nb. ) DC.
藿　香 A gastache ru gosus ( Fisch. et Mey. ) O. Ktze
北沙参 Glehnia lit toral is Fr. Schmidi t ex Miq.
贯　众 Dryopteris crassirhizoma Nakai
太子参 Pseudotellaria heteroph yl la ( Miq. ) Pax ex Pax et Hof fm.
粉　葛 Pueraria thomsonii Ben th.
1. 2　主要试剂:淋巴细胞分离液 ( 991103)购于上
海恒 信化 学试剂 有限 公司 ; 低熔 点琼 脂糖
( BI0153)、正常熔点琼脂糖 ( 051363)、溴化乙啶
( BS0606)均购于华美生物工程公司。
1. 3　主要器材: DYY-6B型稳压稳流电泳仪、 DY-
CP-38B型水平电泳槽 (北京市六一仪器厂 )、
VANOX型 O LYMPU S荧光显微镜 (日本 )、 150ES
数码摄像头 (美国 )、 LU CIA彗星实验分析软件系
统 (捷克 )。
1. 4　动物: 昆明种小鼠 ,雄性 ,体重 18～ 22 g ,由沈
阳药科大学实验动物中心提供 ,动物合格证号:辽实
合字 047号。
2　方法
2. 1　给药方案:小鼠分为生理盐水 ( N S)组及给药
组 ,每组 4只。给药组分别 ig方剂高、中、低 ( 3倍临
床等效量、临床等效量、 1 /3临床等效量 )剂量 ,以 g
(生药 ) /kg表示。 NS组 ig等量 N S,连续 ig 3 d。
2. 2　单细胞凝胶电泳实验 [1, 2 ]: 参照文献方法加以
改进 ,末次给药后 1 h小鼠经眼眶取血 ,分离外周血
液淋巴细胞 ,制片 ,裂解 2 h,解旋 40 min,电泳 30
min,中和染色 ,阅片。 每个样本随机观察 40个细
胞 ,使用 LU CIA软件分析。
2. 3　统计学处理: 以 N S组的各测定指标为
100% ,计算给药组各指标的变化百分率。实验数据
采用 x± s表示 ,采用两因素方差分析 ( ANOVA)
判断总体显著性差异 ,组间资料采用 Fisher s least-
significant dif ference ( LSD) 分析统计学差异。
3　结果
3. 1　方剂Ⅰ ,Ⅴ ,Ⅵ 对小鼠外周血液淋巴细胞 DNA
损伤的影响: 见表 2, 3和 4。结果表明 ,抗非典方剂
Ⅰ ,Ⅴ ,Ⅵ 给药 3d后 ,小鼠外周血液淋巴细胞尾
DNA含量、尾长、尾矩、椭圆矩以及尾面积与 NS
组相比差异均有显著性 ,并呈一定的量效关系。提示
Ⅰ ,Ⅴ ,Ⅵ 方剂对小鼠外周血液淋巴细胞 DNA有明
显的损伤作用。
3. 2　方剂Ⅱ ,Ⅲ ,Ⅳ对小鼠外周血液淋巴细胞
DNA损伤的影响:实验结果表明 ,方剂Ⅱ ,Ⅲ ,Ⅳ给
药 3 d对小鼠外周血液淋巴细胞的影响与 N S相比
差异没有显著性 ,提示这 3个方剂对 DNA没有损
伤作用。
4　讨论
　　单细胞凝胶电泳技术是一种能够敏感地测定药
物早期遗传毒性的方法。由于 DNA损伤的细胞在
电泳后呈现彗星状形态 ,此方法又被称为“彗星试
验 ”。细胞 DNA在电泳中移动的程度直接反映
表 2　预防非典型肺炎方剂Ⅰ 对小鼠外周血液淋巴细胞 DNA损伤的影响 (x± s , n= 4)
Table 2　 Ef fect of prescriptionⅠ against SARS on lymphocyte DNA damage in mice (x± s , n= 4)
组　别 剂量 / ( g· kg- 1) 尾 DN A含量 /% 尾　长 /% 尾　矩 /% 椭圆矩 /% 尾面积 /%
N S 　　　 - 　 100. 00± 8. 64 　 100. 00± 8. 01 　 100. 00± 14. 21 　 100. 00± 8. 22 　 100. 00± 8. 93
Ⅰ 　　　 2. 2 232. 94± 9. 68* * 435. 26± 22. 77* * * 940. 54± 48. 14* * * 389. 55± 18. 46* * * 393. 42± 26. 53* *
Ⅰ 6. 5 365. 48± 41. 43* * 491. 12± 28. 95* * * 1 683. 78± 206. 18* * * 629. 85± 52. 75* * * 621. 06± 60. 64* *
Ⅰ 19. 6 383. 73± 9. 64* 627. 71± 39. 02* * 2 256. 76± 45. 09* * * 711. 94± 45. 16* * * 704. 94± 33. 86* *
　　与 NS组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01　* * * P < 0. 001 (表 3和表 4同 )
　　* P < 0. 05　* * P < 0. 01　* * * P < 0. 001 vs N S g rou p ( Tab le 3 and Table 4 are the s ame)
·734· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月
表 3　预防非典型肺炎方剂Ⅴ对小鼠外周血液淋巴细胞 DNA损伤的影响 (x± s , n= 4)
Table 3　 Ef fect of prescriptionⅤ against SARS on lymphocyte DNA damage in mice (x± s , n= 4)
组别 剂量 / ( g· kg- 1) 尾 DN A含量 /% 尾长 /% 尾矩 /% 椭圆矩 /% 尾面积 /%
N S 　　　 - 　 100. 00± 5. 27 　 100. 00± 2. 22 　 100. 00± 5. 98 　 100. 00± 3. 18 　 100. 00± 11. 62
Ⅴ 　　　 3. 0 184. 22± 23. 68* 126. 03± 4. 73* * 224. 33± 32. 19* * 185. 51± 25. 79* 159. 01± 11. 76*
Ⅴ 9. 1 210. 63± 23. 26* * * 129. 45± 4. 85* * 259. 90± 26. 62* * 217. 33± 31. 80* 184. 53± 22. 90*
Ⅴ 27. 2 326. 41± 58. 26* * 130. 30± 6. 07* * 404. 73± 76. 99* * 353. 41± 63. 10* * 281. 65± 47. 12* *
表 4　预防非典型肺炎方剂Ⅵ 对小鼠外周血液淋巴细胞 DNA损伤的影响 (x± s , n= 4)
Table 4　 Ef fect of prescriptionⅥ against SARS on lymphocyte DNA damage in mice (x± s , n= 4)
组别 剂量 / ( g· kg- 1) 尾 DN A含量 /% 尾长 /% 尾矩 /% 椭圆矩 /% 尾面积 /%
N S 　　　 - 　 100. 00± 17. 75 　 100. 00± 4. 41 　 100. 00± 12. 34 　 100. 00± 7. 24 　 100. 00± 8. 33
Ⅵ 　　　 4. 1 147. 18± 18. 72* * 137. 98± 14. 39* 178. 80± 11. 73* * 164. 41± 23. 69* 125. 91± 13. 40
Ⅵ 12. 4 168. 35± 14. 68* * 183. 87± 5. 05* * * 268. 40± 28. 45* * 196. 61± 25. 40* 156. 11± 14. 91*
Ⅵ 37. 2 247. 00± 9. 50* * * 207. 07± 3. 53* * * 443. 20± 9. 76* * * 249. 15± 3. 73* * * 197. 22± 7. 37* * *
DNA分子损伤的程度。应用哺乳动物细胞进行的
众多的体内和体外试验已证明了这种方法的可信
性 [3 ]。应用此方法 ,本实验结果表明 ,抗非典方剂Ⅱ ,
Ⅲ和Ⅳ给药 3 d,对小鼠外周血液淋巴细胞 DNA均
无明显损伤 ;而方剂Ⅰ ,Ⅴ和Ⅵ 在 1 /3的临床等效量
就有明显的致淋巴细胞 DNA损伤的作用 ,提示 6
个方剂中 ,方剂Ⅰ ,Ⅴ ,Ⅵ 具有较明显的遗传毒性。
综合 6个方剂的主要功能 ,主要以清热、解毒、
化湿、益气为主。方剂中大多含有具有抑制微生物如
细菌或病毒活性的中药 ,金银花、贯众、苍术、藿香、
大青叶、连翘和佩兰等。由于病毒是一种需要特定生
活条件的细胞内寄生生物 ,完全依赖于宿主细胞的
代谢作用作为自身复制的条件 ,故有些抗病毒药物 ,
在阻断病毒复制的同时 ,可能对细胞本身也有损伤
作用。然而 ,这并不能说明抗菌抗病毒药物不可避免
地要对宿主细胞 DNA产生毒性 ,应用同样的方法
研究表明 ,有些抗病毒药物并不引起 DNA损
伤 [4, 5 ]。方剂Ⅱ ,Ⅲ和Ⅳ也含有一些具有抑菌和抗病
毒作用的中药 ,但在本研究中没有表现对 DNA的
损伤作用 ,说明除了单味药物的作用外 ,药物间配伍
不同所表现的方剂毒性也不同。
总之 ,本研究结果表明 ,无论方剂Ⅰ ,Ⅴ和Ⅵ 是
否能够预防非典型肺炎 ,但它们对细胞 DNA具有
明显的损伤作用 ,提示具有潜在的遗传毒性。本实验
结果也提示 ,对健康人服用中药来预防非典型肺炎
应持慎重态度。 尤其是老年人、儿童及体弱、抵抗力
低下者 ,要合理科学的用药 ,决不能盲目地长期大量
服用中药。
致谢:王大方、吴波峰、贾景明等参加本研究部分工作。
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·735·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 8期 2003年 8月