全 文 ：·药理实验与临床观察·
164种中药乙醇提取物抗真菌作用研究
宫毓静 1 ,安汝国 2 ,虞　慧 1 ,王理达 1 ,郑俊华 1 ,果德安 1
( 1. 北京大学药学院 中医药现代研究中心 ,北京　 100083;　 2. 吉林大学生物工程研究所 ,吉林 长春　 130021)
摘　要: 目的　体外观察 164种中药 95%乙醇提取物对白色念珠菌、啤酒酵母和威克海姆原藻 3种真菌的作用 ,并
对其中抑菌效果明显的中药中的主要成分进行抗真菌药敏试验。方法　半固体药基混合法 ,微量稀释法。结果　 22
种中药乙醇提取物对 1种或几种真菌显示较强的抑制作用 ,所试验的单体化合物对 3种真菌无显著抑制作用。 结
论　首次对中药 95%乙醇提取物应用半固体药基混合法进行抗真菌活性筛选 ,土槿皮、牡丹皮 95%乙醇粗提物对
3种真菌均有较强的抑制作用。
关键词: 抗真菌活性 ;中药乙醇提取物 ;白色念珠菌 ;威克海姆原藻 ;啤酒酵母
中图分类号: R286. 85　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 01 0042 06
Studies on antifungal activity of ethanol extracts from 164 traditional Chinese medicines
GONG Yu-jing1 , AN Ru-guo2 , YU Hui1 , WANG Li-da1 , ZHENG Jun-hua1 , GUO De-an1
( 1. School of Pha rmaceulical Sciences, Modern Reseasch Center for TCM , Beijing Univ e rsity , Beijing 100083, China;
2. Institute of Bio log ical Eng ineering , Jilin Univ e rsity , Changchun Jilin 130021, China)
Abstract: Object　 To screen anti fungal agents against Candida albicans ( Robin ) Berkh , Saccha-
romyces cerevisiac Hansen GL-7 and Prototheca wickerham ii from 164 tradi tional Chinese medicines
( TCM s) . Methods　 The ex t racts o f 164 TCMs w ere prepared w ith 95% ethano l and the antifungal activi-
ty of these ex tracts against above three fungi w as measured by semisolid agar di lution method. Results　
The ethanol ex t racts f rom 22 TCMs exhibi ted po tent antifungal activi ty. Conclusion　 The anti funal activ-
ity of the ethano l ex tracts f rom TCMs w as measured by using semiso lid agar di lution method for the first
time. The ethanol ex t racts f rom the bark o f Pseudolarix kaempferi Gord. and Paeonia suf f ruticosa Andr.
a re more po tent anti fungal ag ents than those of tested o ther medicines.
Key words: a nti fungal activi ty; ethano l ex t racts of t radi tional Chinese Medicines ( TCM s) ; Candida
albicans ( Robin) Berkh. ; Prototheca wickerhamii ; Saccharomyces cerevisiae Hansen GL-7
　　真菌病的发病率日益增加 ,临床上应用的抗真
菌药物 (两性霉素 B、氟康唑、酮康唑等 )对某些真菌
病有效 ,但从高效低毒、抗真菌谱和耐药性方面评
价 ,没有一种药物令人满意。近年来 ,国内外学者对
中草药抗真菌试验作了大量筛选 ,其中大蒜 ,黄连 ,
黄柏 ,白藓皮 ,土槿皮的抗真菌能力较强 [1～ 3 ]。 但各
作者对中药材的提取方法有较大差异 ,主要为水煎
剂 ,生理盐水、醋、酒等浸出剂。提取的有效成分不完
全 ,并且为了抑制细菌的生长 ,药物与培养基共同灭
菌 ,而加热后可使某些药物失效 [4, 5 ]。本研究是从祖
国医书记载 ,老中医治疗真菌病的验方及文献报道
具有抑制真菌的药物中 ,选出 164种中药材 ,应用
95%乙醇超声提取药物成分 ,经真空干燥后 ,以二甲
基亚砜配制溶液 ,体外观察药物对 3种真菌的作用。
为进一步分析单味药中最有效的药物成分 ,探讨作
用机制 ,动物试验及临床应用奠定基础。
白色念珠菌 Candida albicans ( Robin) Berkh.
是念珠菌属中致病力最强的一种 ,也是念珠菌病最
常见的病原体。威克海姆原藻 (Prototheca wicher-
ham ii )属于无绿藻 ,可引起人皮肤、皮下组织、口腔、
鼻、浆膜等处的病变 [6 ]。 啤酒酵母 GL-7( Saccha-
romyces cereisiae Hansen GL-7)是啤酒酵母的甾醇
营养缺陷型突变株 ,对于研究甾醇的生物合成途径
是很好的模式菌 [7 ]。
1　材料
163种中药材 (购自北京同仁堂药店 ) ,土槿皮
·42· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 1期
收稿日期: 2001-04-23基金项目: 国家自然科学基金 ( N0. 30070917)作者简介: 宫毓静 ( 1973-) ,女 ,吉林省通化市人。现为吉林大学生物工程研究所 98级博士研究生 ,研究方向为抗真菌中药筛选及有效成分机制研究。
* 通讯联系人
( 1999年秋采于浙江省衢州市 ,由果德安教授鉴
定 ) ,单体化合物 (购自中国药品生物制品检定所 )。
两性霉素 B(购自 Sigma公司 ) ,蛋白胨 (购自 DIF-
CO公司 ) ,酵母提取物 (购自 OXIO ID公司 ) ,葡萄
糖 (汕头市光华化学厂 ) ,琼脂 (北京原平生物技术有
限公司 ) ,麦角甾醇 (购自 Sigma公司 ) ,所用实验试
剂为国产分析纯。
2　方法与结果
2. 1　药物的制备: 中药材 50 g研成粉末 ,过 20目
筛 , 5倍量的 95%乙醇浸泡 24 h,超声提取 30 min,
抽滤后再经 3倍量的 90%乙醇超声提取 20 min,两
次提取液合并 ,减压回收乙醇 , 60℃真空恒温干燥 ,
得中药材乙醇浸膏。将中药醇提物用二甲基亚砜溶
解 ,并稀释为 3个浓度 ,药物终浓度分别为 10, 1,
0. 1 mg /mL。二甲基亚砜终浓度为 2. 5%。单体化合
物和两性霉素 B用最低量的二甲基亚砜溶解 ,无菌
水稀释 ,单体化合物的最终作用浓度为 1 000～ 2
μg /mL,两性霉素 B为 16～ 0. 03μg /m L。二甲基亚
砜的终浓度低于 1% 。
2. 2　菌的传代培养
2. 2. 1　实验菌株:白色念珠菌 C. albicans ) (购自中
科院微生物所 )。威可海姆原藻 ( P. wickerham ii ) ,啤
酒酵母 GL-7( S. cerevisiae GL-7)菌种由 W. David
Nes ( Department o f Chemist ry and Biochemist ry ,
Texas Tech Univ ersi ty, Lubock, Texas, U SA)博
士惠赠。
2. 2. 2　培养基: 改良沙氏培养基 (蛋白胨 1% ,葡萄
糖 2% );改良沙氏半固体培养基 (蛋白胨 1% ,葡萄
糖 2% ,琼脂 0. 3% ) ; YPG液体培养基 (蛋白胨 2% ,
葡萄糖 2% ,酵母提取物 1% ) ; YPG半固体培养基
(蛋白胨 2% ,葡萄糖 2% ,酵母提取物 1% ,琼脂
0. 3% )。
2. 2. 3　菌的培养:将标准菌株划线接种培养后 ,挑选
菌落接种于液体培养基中 ,白色念珠菌加入沙氏培养
基 ,威克海姆原藻加入 Y PG培养基 ,啤酒酵母加入
Y PG培养基 (加入 1× 10- 5mg /L麦角甾醇 ) ,置入恒
温摇床中 ( 30℃ , 100 r /min)培养 ,取培养 8 h处于对
数生长期的真菌作药敏试验。血球计数板计数。
2. 3　抑菌试验
2. 3. 1　药基混合法试验:半固体培养基以每管终体
积 1 mL分装于试管 ( 13 mm× 100 mm)中 ,在 120
℃、 0. 1 Pa条件下灭菌 20 min。 当灭菌培养基冷却
至 40℃～ 50℃时 ,以无菌操作加入中药 DMSO溶
液 25μL,混匀制成斜面 ,同时用溶媒 ( 2. 5%
MDSO)与蒸馏水作对照。取受试菌液划线接种于斜
面上。白色念珠菌终浓度 1× 103 cfu /mL,威克海姆
原藻与啤酒酵母 GL-7终浓度 2× 104 cfu /mL,放于
30℃温箱中于 48 h内观察菌生长状态。 目测并以
下列标准记录:菌完全无生长“ - ” ;菌发育迟缓 ,形
成的菌落较小“+ ” ;菌发育不旺盛“+ + ” ;菌发育较
旺盛 ,但菌落比正常较小“+ + + ” ;菌发育迅速旺盛
“+ + + + ”。平均三次试验结果列于表 1。
表 1　中药乙醇提取物对 3种真菌的抑制作用
中　药 白色念珠菌
10 mg /m L 1 mg /m L 0. 1 mg /mL
威克海姆原藻
10 mg /m L 1 mg /mL 0. 1 mg /m L
啤酒酵母 ( GL-7)
10 mg /m L 1 mg /m L 0. 1 mg /m L
秦　皮 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +黄　连 — — + + — — + + + — + + + + + +生地榆 — + + + + + + + + + + + + + + + — + + + + + + +
槟　榔 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +儿　茶 + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + +
血　竭 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +苦　参 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
石榴皮 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +白　芍 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
五倍子 — — + + + + + + + + + + + + + + + + + +皂　角 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +虎　杖 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
芦　荟 + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + +丁　香 — — + + + + — — + + + + — + + + + +
地肤子 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +肉豆蔻 + + + + + + + + + — — + + + + — + + + + + + +
蚤　休 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +大　黄 + + + + + + + + + + + + + + + + — + + + + + + +牛蒡子 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
生艾叶 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +甘　草 + + + + + + + + + + — + + + + + + — + + + + + +
海桐皮 + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + + +威灵仙 + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + — + + + + + + +
白头翁 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +夏枯草 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
土茯苓 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
·43·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 1期
　　　　续表 1
中　药 白色念珠菌
10 mg /m L 1 mg /m L 0. 1 mg /mL
威克海姆原藻
10 mg /m L 1 mg /mL 0. 1 mg /m L
啤酒酵母 ( GL-7)
10 mg /m L 1 mg /m L 0. 1 mg /m L
连　翘 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + +
没　药 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +射　干 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +何首乌 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
龙胆草 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +胡黄连 + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + +
黄　芩 — + + + + + + — + + + + + + — + + + + + + +金银花 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
百　部 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +莪　术 + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + — + + + + + + + +
黄　芪 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +赤　芍 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +土大黄 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
诃　子 + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + +板蓝根 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
青　黛 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +知　母 — — + + + + — + + + + — — + + + +
秦　艽 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +黄　精 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
山豆根 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
白花蛇舌草 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
紫花地丁 + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + +
透骨草 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + +苏　木 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
木　香 + + + + + + + + — — + + + — — + + + +三　七 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
防　风 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +天门冬 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
升　麻 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +杭白菊 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +山慈茹 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
马鞭草 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +吴茱萸 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
漏　芦 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +茵陈蒿 + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + +
白藓皮 + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + + +牡丹皮 — — + + + + — — + + + — — + + + +
陈　皮 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +柴　胡 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +荆　芥 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
丹　参 — + + + + + + + — + + + + + + + + — + + + + + + +半枝莲 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
牛　膝 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +生　地 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
川楝子 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +大风子 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
郁　金 + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + +细　辛 + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +山茱萸 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
小茴香 + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + +当　归 + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + +
乌　梅 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + +川槿皮 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + +
独　活 + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + +苍　术 + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + +扁　豆 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
白　果 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +蛇床子 + + + + + + + + + + + + — — + + + + — + + + + + + + +
生侧柏 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + +龙　葵 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + +
杜　仲 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +紫　苏 + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
山栀子 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +苍耳子 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +红　花 + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
栝　楼 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +蒿　本 + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
川　乌 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +青木香 + + + + + + + + + + — — + + — — + + + +
藿　香 — + + + + + + + + — + + + + + + + — + + + + + + + +决明子 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
白　术 + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + +川　椒 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +五味子 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
青　蒿 + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + +
·44· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 1期
　　　　续表 1
中　药 白色念珠菌
10 mg /m L 1 mg /m L 0. 1 mg /mL
威克海姆原藻
10 mg /m L 1 mg /mL 0. 1 mg /m L
啤酒酵母 ( GL-7)
10 mg /m L 1 mg /m L 0. 1 mg /m L
马兜铃 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
姜　黄 + + + + + + + + + + + + + — + + + + + + +大小蓟 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +补骨脂 + + + + + + + + + + + + — + + + + — + + + + + + + +
羌　活 + + + + + + + + + + — + + + + + — + + + + + + + +败　酱 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
鱼腥草 + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + +川　芎 — + + + + + + + — + + + + — + + + + + + + +
桑　叶 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +厚　朴 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
木　通 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +麻　黄 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +马齿苋 + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
黑旱莲 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +车前草 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
辛　夷 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +肉　桂 — — + + + + — — + + + + — + + + + + +
紫　草 + + + + + + — + + + + — + + + + + +黄　柏 — — + + + + — + + + + + + + + — + + + + + + + +
桂　枝 — — + + + + — + + + — + + + + + + + +白　芷 + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + +徐长卿 — + + + + + + — + + + + — + + + + + + + +
菖　蒲 — + + + + + + + + — — + + + + — + + + + + + + +使君子 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
白　芨 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +防　己 — + + + + + + — — + + + — + + + + + + + +
野菊花 + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + + +扁　蓄 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
蒲公英 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +半边莲 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +莱菔子 + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
槐　花 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +仙鹤草 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
鹅不食草 + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + — + + + + + + +穿心莲 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
茜　草 + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + +浮　萍 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
夜交藤 — + + + + + + + + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + +生卷柏 + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +草乌头 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
地骨皮 + + + + + + + + + + + — — + + + + — + + + + + + + +忍冬藤 + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
鹤　虱 — + + + + + + + + — + + + + — + + + + + +椿白皮 + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
牵牛子 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +皂　刺 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
萆　 — + + + + + + — — + + + + — — + + + +
八角茴香 + + + + + + + + + + + + — — + + + + + + + + + + + + + + + +骨碎补 + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + +
老鹳草 + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +淫羊藿 + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
凤尾草 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +干　漆 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
木鳖子 + + + + + + + + + + + + — + + + + + + + + + + + + + + + + + + +火麻仁 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +急性子 — + + + + + + + + — — + + + — + + + + + + + +
紫　苑 — + + + + + + + + — + + + + + — + + + + + + + +益母草 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
半　夏 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +附　子 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
高良姜 — — + + + + — — + — — + + + +山　楂 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
土槿皮 — — + + — — + + + + — — + + + +
荆芥+ 生地 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
苦参+ 蛇床子 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
艾叶+ 海桐皮 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + +
　　　　注: “— ”菌完全无生长 ;“+ ”菌发育迟缓 ,形成的菌落较小 ;“+ + ”菌发育不旺盛 ;“+ + + ”菌发育较旺盛 ,但菌落比正常较小 ;
“+ + + + ”菌发育迅速旺盛。 设立的溶媒对照不抑制菌的生长 ;以上结果为三次结果平均。
　　本试验中共对 164种单味药和 3个小复方 (苦
参+ 蛇床 ;艾叶+ 海桐皮 ;荆芥+ 生地 )的乙醇提取
物进行了 3种真菌的抗菌活性试验。 对一种或几种
真菌具有较强抑制作用的药物有:牡丹皮 ,土槿皮 ,
知母 ,高良姜 ,黄连 ,丁香 ,肉桂 ,黄柏 ,黄芩 ,菖蒲 ,桂
枝 ,五倍子 ,肉豆蔻 ,防己 ,地骨皮 ,青木香 ,萆? ,木
·45·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 1期
香 ,徐长卿 ,丹参 ,鹤虱 ,急性子。
在 1 mg /mL浓度 ,牡丹皮 ,土槿皮对 3种真菌
均有抑制作用。对白色念珠菌有抑制作用的有黄连 ,
丁香 ,肉桂 ,知母 ,高良姜 ,桂枝 ,五倍子 ;对威克海姆
原藻有抑制作用的有黄连 ,丁香 ,肉桂 ,肉豆蔻 ,青木
香 ,菖蒲 ,防己 ,地骨皮 ,萆? ;对 GL-7有抑制作用
的有知母 ,高良姜 ,青木香 ,萆? ,木香。
2. 3. 2　微量稀释法测定药敏试验: 96孔细胞培养
板紫外线照射 30 min后 ,于每板第 1排各孔 ( 12
孔 )内分别加入培养基 180μL,第 11孔为阴性对
照 , 12孔为阳性对照 ;系列稀释浓度的待测药液 10
μL依次加入相应药液于各孔中 ,阴性对照中加 20
μL,加入制备的真菌溶液 10μL(阴性对照孔不加 ) ,
使最终菌量为 0. 5× 103～ 2. 5× 103 cfu /mL,振荡 5
min使各液充分混匀 , 35℃温箱培养 (湿盒内保持
液量 ) 48 h观察。未见菌生长的最低浓度为最低抑
菌浓度 ( M IC) ,见表 2。
25个单体化合物中只有紫草素对酵母 GL-7有
特异性抑制作用 ,最低抑菌浓度为 3. 13μg /mL,柠
檬醛对威克海姆原藻和啤酒酵母 GL-7的最低抑菌
浓度为 250μg /mL,其他成分与对照药两性霉素 B
相比 ,无明显的抗菌活性。
表 2　微量稀释法药物抗真菌敏感性试验 (MIC: μg /mL)
样　品 白色念珠菌 威克海姆原藻 啤酒酵母
GL-7
两性霉素 B 0. 39 0. 78 1. 56
盐酸小檗碱 250 500 250
肉桂醛 500 125 125
肉桂油 250 125 300
丁香酚 > 1 000 625 > 1 000
丁香油 250 500 500
柠檬醛 > 1 000 250 250
紫草素 > 1 000 > 1 000 3. 13
茴香醛 > 1 000 > 250 > 1 000
丹皮酚 > 1 000 > 1 000 > 1 000
芍药苷 > 1 000 > 1 000 > 1 000
黄芩苷 > 1 000 > 1 000 > 1 000
盐酸麻黄碱 > 1 000 > 1 000 > 1 000
蛇床子素 > 1 000 > 1 000 > 1 000
苦参碱 > 1 000 > 1 000 > 1 000
氧化苦参碱 > 1 000 > 1 000 > 1 000
五味子甲素 > 1 000 > 1 000 > 1 000
秦皮香豆素 > 1 000 > 1 000 > 1 000
丹参酮Ⅱ A > 1 000 > 1 000 > 1 000
隐丹参酮 > 1 000 > 1 000 > 1 000
厚朴酚 > 1 000 > 1 000 > 1 000
鬼臼毒素 > 1 000 > 1 000 > 1 000
足叶草素 > 1 000 > 1 000 > 1 000
胡椒醛 > 1 000 > 1 000 > 1 000
猪牙皂 > 1 000 > 1 000 > 1 000
槲皮素 > 1 000 > 1 000 > 1 000
3　讨论
　　本实验应用体外半固体药基法筛选抗真菌中
药 ,该方法简便经济 ,是很便捷的初步筛选方法。 抗
真菌药物筛选试验结果受外界的影响因素复杂 ,例
如 ,药物的种类 ,制备方法 ,药物浓度 ,溶媒的选择 ,
试验菌的种类 ,菌种成熟的程度 ,菌孢子的浓度 ,培
养的温度及时间等 [1 ]。并且体外实验结果与临床应
用效果尚有差异。因此 ,本实验结果仅仅是在一定条
件下药物与真菌作用的结果 ,它的阴性结果只说明
在本实验条件下无作用 ,而阳性结果必须是在低浓
度下有明显作用的。在抑菌作用的估价中 ,我们不重
视大于“+ + ”的抑菌结果。
本实验中中药种类较多 ,为求方法上的一致性 ,
只应用中药的乙醇提取物 ,而未做其它提取方法的
对比。由于提取溶剂不同使某些中药抑菌结果与其
它报道有显著差异。 例如 ,文献中黄连的 10%水煎
剂对白色念珠菌无作用 ,血竭的水煎剂对白色念珠
菌有一定的抑制作用 [ 1] ,而本实验结果显示黄连的
乙醇提取物在 1 mg /mL浓度对白色念珠菌有抑制
作用 ,而血竭的醇提物作用不明显。曹仁烈报道土槿
皮水提液无抑菌作用 [ 2] ,而本实验中土槿皮乙醇提
取物却显示强的抗真菌作用。说明提取溶剂不同 ,提
取出的有效成分不同 ,体现的药效就不同。
同一种药物对不同菌株作用也不同 ,其中除牡
丹皮 ,土槿皮对 3种菌均有作用外 ,其它药物只对其
中的一种或两种菌有作用 ,提示作用靶点可能不同。
很多报道挥发油是抗真菌有效部位 ,例如肉桂 ,
丁香 ,珊瑚姜等 [8～ 10 ]。本试验在药物提取过程中 ,未
单独分离提取挥发油 ,并且在提取物的真空干燥过
程中 ,挥发性物质含量会受影响 ,也可能是影响药效
的原因之一。
我们选取有效中药的主要单体成分作抑菌实
验 ,与两性霉素 B相比 ,结果均不理想。肉桂醛的最
低抑菌浓度与报道基本相同 [8 ] ,丁香酚未表现出强
的抗真菌作用 ,与宋军的结果有明显差异 [9 ]。紫草素
对酵母 GL-7有特异性抑制作用 ,最低抑菌浓度为
3. 13μg /mL,值得进一步研究。
本实验选用的临床常用的 3个两味药组成的小
复方 ,未表现出明显的抑菌作用。曹松年等研究中药
复方的水煎剂对皮肤癣菌抑制作用 ,认为复方的抑
菌作用不及单味药强 [1 ]。 因为中药的抗真菌有效成
分与机制的多样性 ,复方的研究就更为复杂。还有报
道复方并不是通过直接抑菌而起作用 ,可能是通过
增强肌体免疫力而抗真菌 [11 ]。 尚有待进一步探讨。
·46· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 1期
由于中药粗提物中含有多种化学成分 ,成分与
药理作用复杂 ,并且受多种因素影响。目前的研究大
多处于初步阶段 ,筛选抗菌谱 ,通过扫描 ,透射电镜
观察形态变化 ,缺乏对于作用机制与毒性的进一步
探讨 ,难以开发出有效的抗真菌药物 ,并指导临床用
药。作用机制的阐述 ,毒性研究需作大量的工作。因
此 ,今后的工作重点应是一方面从已发现的具有抗
真菌的中药中活性追踪提取有效成分 ,进而对有效
成分进行抗真菌机制研究 ;另一方面 ,可以针对高效
低毒作用机制 ,设计选择性作用靶点减少用药量 ,进
行高通量筛选化合物或先导化合物 ,建立相关生物
信息库 ,为合成新的抗真菌药物奠定基础。
参考文献:
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的观察 [ J] . 中华皮肤科杂志 , 1957, 4: 286-290.
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辅助作用实验研究 [ J ]. 中医药研究 , 1997, 13( 2): 49-51.
龙胆苦苷的保肝作用研究
刘占文 ,陈长勋 ,金若敏 ,史国庆 ,宋纯清 ,胡之璧
(上海中医药大学 ,上海　 200032)
摘　要: 目的　研究 ig龙胆苦苷的肝保护作用及与龙胆草药理作用的一致性。 方法　给动物 ig给药 ,用 CCl4、D -
G laN 造急性肝损伤模型 ,测定小鼠血清 ALT、 AST及肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶含量 ,采用麻醉大鼠 ,测定胆
汁分泌量及胆汁成分。 结果　 ig龙胆苦苷后能明显降低 CCl4急性肝损伤小鼠血清 ALT、 AS T水平及增加肝组织
中谷胱甘肽过氧化物酶活力 ,大鼠胆流量明显增加 ,胆汁中胆红素浓度提高。 结论　龙胆苦苷具有明显肝保护
作用。
关键词: 龙胆苦苷 ;保肝 ;利胆
中图分类号: R286. 55　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 01 0047 04
Studies on liver-protection and promoting bile secretion of gentiopicroside
LIU Zhan-wen, CHEN Chang-xun, JIN Ruo-min, SHI Guo-qing , SON G Chun-qing , HU Zhi-bi
( Shanghai Univ er sity o f TCM , Shanghai 200032, China )
Abstract: Object　 To study the liv er-protection and bile promo ting secretion of gentiopicro side ad-
ministrated ig in rat. Methods　 Gentiopicro side w as administ rated ig to the mice wi th liver injury induced
by CCl4 and D-GlaN. ALT, AS T levels in serum and GSH-Px activi ty in liv er w ere examined. The bi le
f low rate and the concentration of the main components in the bile of ra ts af ter ig administ ration of gen-
tiopicroside w ere estimated. Results　 Gentiopicroside administ rated ig decreased the serum ALT and AST
levels, increased th e liv er GSH-Px activi ty in the mice t reated wi th CCl4 , promo ted the secretion o f bi le
and increased the concentration of bili rubin in the bi le. Conclusion　 Gentiopicroside administ ra ted ig ex-
hibi ted signi ficant liv er-pro tection and promoting bi le secretion.
Key words: g entiopicroside; liv er-pro tection; promoting bi le secretion
·47·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 1期
收稿日期: 2001-06-12基金项目: 国家“九五”攻关课题“龙胆苦苷质量标准的规范化研究” ,批准号 969030203作者简介: 刘占文 ( 1973-) ,男 ,河北省满城县人 ,主管中药师。 1996年毕业于河北医科大学医学专业 ,学士。 1999年毕业于上海中医药大学 ,药理学硕士。 目前为上海同仁医院药剂科主管中药师。 主要研究方向为中药药理学 (肝胆方面 )。 Tel: 62524259-药剂科
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