全 文 ：HPLC 法测定东北红豆杉枝叶中 10-脱乙酰巴卡亭 Ë 的含量
杜智敏1, 陈瑞玲1, 刘福清2, 杨宝峰3Ξ
(11 哈尔滨医科大学附属第二医院临床药学药物研究所, 黑龙江 哈尔滨 150086; 21 大庆市龙南医院 药剂科,
黑龙江 大庆 163453; 31 哈尔滨医科大学 药理学教研室, 黑龙江 哈尔滨 150086)
摘 要: 目的 测定东北红豆杉枝叶中 102脱乙酰巴卡亭Ë (102deacetylbaccatin Ë , 102DAB Ë )的含量。方法 采
用R P2H PL C 法。C18色谱柱 (250 mm ×416 mm , 5 Λm ) , 甲醇2乙腈2水 (20∶30∶50)作为流动相, 检测波长为 23319
nm。结果 102DAB Ë 在 01004 75～ 01038 Λg 与峰面积线性关系良好 ( r= 01999 0) , 平均回收率为 10015% , R SD
为 210%。结论 方法操作简便、灵敏度高、专属性强, 可用于红豆枝叶中 102DAB Ë 的质量控制。
关键词: 东北红豆杉; 102脱乙酰巴卡亭 Ë ; 高效液相色谱
中图分类号: R 286102 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670 (2004) 04 0398 02
D eterm ina tion of 10-deacetylbacca tin Ë in Taxus cusp ida ta branches and leaves by HPLC
DU Zh i2m in1, CH EN R u i2ling1, L IU Fu2qing2, YAN G Bao2feng3
(1. Inst itu te of C lin ical Pharm aco logy and Pharm acy, T he Second Ho sp ita l of H arb in M edical U niversity, H arb in 150086,
Ch ina; 2. D epartm ent of Pharm acy, D aqing L ongnan Ho sp ita l, D aqing 163453, Ch ina; 3. D epartm ent
of Pharm aco logy, H arb in M edical U niversity, H arb in 150086, Ch ina)
Key words: T ax us cusp id a te Sieb. et Zucc. ; 102deacetylbaccat in Ë (102DAB Ë ) ; H PL C
紫杉醇作为红豆杉中的活性成分已得到广泛的
研究开发, 但其主要存在于树皮中, 且并非唯一的抗
癌活性成分。主要存在于红豆杉枝叶中的紫杉烷萜
类化合物, 不但自身有抗癌活性, 而且可作为合成紫
杉醇或其类似物的前体。因此对红豆杉资源中紫杉
烷萜类评价分析具有重要意义。102脱乙酰巴卡亭Ë
(102deacetylbaccat in Ë , 102DAB Ë ) 为有抑制肿
瘤作用的紫杉烷萜类化合物, 有文献报道, 利用它可
合成比紫杉醇具有更高抗癌活性的 taxo tere [1 ]。本
实验采用 H PL C 法对东北红豆杉 T ax us cusp id a ta
Sieb. et Zucc. 枝叶中 102DAB Ë 含量进行测定, 用
于其质量控制并为新药研究开发提供依据。
1 仪器与试药
W aters 600 型 H PL C 色谱仪 (W aters 600 泵,
W aters 996 二极管阵列检测器) , KQ 2200E 医用超
声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) , 电子分析天
平 (日本岛津) , 电热恒温水浴锅 (北京科学仪器厂)。
102DAB Ë 对照品 (Sigm a 公司产品, 纯度>
95% ) , 东北红豆杉枝叶提取物 (黑龙江省红豆杉科
技开发有限公司) , 甲醇 (优级纯) , 乙腈 (色谱纯) , 二
氯甲烷 (分析纯)。
2 方法与结果
211 色谱条件: C 18 色谱柱 (250 mm ×416 mm , 5Λm ) , 流动相为甲醇2乙腈2水 (20∶30∶50) , 检测波
长为 23319 nm , 流速为 018 mL öm in, 柱温为 32 ℃,
进样量为 10 ΛL。
212 对照品储备液的制备: 精密称取 102DAB Ë 对
照品 500 Λg 于 10 mL 量瓶中以甲醇溶解并定容, 即
得对照品储备液 (4715 ΛgömL )。
213 供试品溶液的制备: 精密称取样品粉末 80 m g
于 250 mL 三角瓶中, 加入甲醇2二氯甲烷 (1∶1) 50
mL 浸泡 24 h, 超声提取 40 m in, 滤过, 残渣以甲醇
冲洗 3 次, 合并滤液, 30 ℃水浴浓缩, 加入二氯甲
烷2水 (1∶1) 50 mL 萃取, 水层再以二氯甲烷萃取
两次, 合并滤液于 30 ℃水浴挥干溶剂, 用 10 mL 甲
醇溶解, 用 0145 Λm 滤膜滤过, 即得。
214 方法的专属性: 在拟定的色谱条件下, 分别取
对照品溶液和供试品溶液进样测定, 得到特征峰, 与
杂质分离良好, 无干扰, 见图 1。
215 标准曲线及线性范围: 将对照品储备液依次稀
释成 38, 2815, 23175, 19, 14125, 915, 4175 ΛgömL
溶液, 每次进样 10 ΛL。以进样量对峰面积进行回
归, 得方程: Y = - 9 1621057 4+ 4 7401329 6 X , r=
01999 0。可见 102DAB Ë 在 01004 75～ 01038 Λg 与
·893· 中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 4 期 2004 年 4 月
Ξ 收稿日期: 2003206210
作者简介: 杜智敏 (1956—) , 女, 哈尔滨人, 主任药师, 硕士研究生导师, 从事新药开发和人体生物利用度与药动学研究。
T el: (0451) 866053533 通讯作者
3 2102DABË
图 1 10-DAB Ë 对照品 (A)和东北红豆杉
枝叶提取物的 HPLC 图谱
F ig. 1 HPLC chromatogram s of 10-DAB Ë reference
substance (A) and Taxus cusp ida ta branches
and leaves extract (B)
峰面积呈良好的线性关系。
216 精密度试验: 取 14125 ΛgömL 102DAB Ë 对照
品溶液, 连续进样 6 次, 测定峰面积, 计算浓度, 结果
浓度R SD 为 0166% (n= 6)
217 稳定性试验: 取供试品溶液 1 份, 每隔 1 h 测
定 1 次, 考察供试品溶液中 102DAB Ë 含量变化。结
果含量R SD 为 0192% (n= 6) , 表明供试品溶液在
5 h 内稳定。
218 重现性试验: 精密称取同一批样品 6 份, 平行
制备 6 份供试品溶液, 进样测定, 102DAB Ë 含量为
01423 3% , R SD 为 0180% (n= 6)。
219 回收率试验: 精密称取 9 m g 样品粉末 4 份, 分
别加 915, 19, 2815 ΛgömL 102DAB Ë 对照品溶液,
各 1 mL , 另一份做空白, 平行制备 4 份供试品溶液,
进样测定, 每份测 3 次, 结果平均回收率为
10015% , R SD 为 210% (n= 4)。
2110 样品的测定: 精密称取 1 批样品 3 份, 制备供
试品溶液, 进样测定, 结果 102DAB Ë 的含量为
01456 1% (n= 3)。
3 讨论
311 本实验对检测波长、流动相系统、提取方法进
行考察, 建立了H PL C 测定东北红豆杉枝叶提取物
中 102DAB Ë 含量的方法。该方法简便、灵敏度高、
专属性强, 未见报道。可用于红豆杉提取物中紫杉烷
萜类 102DAB Ë 的质量控制。
312 检测波长的选择: 102DAB Ë 对照品甲醇溶液
在 200～ 400 nm 波长中最大吸收波长在 23319 nm ,
故选 23319 nm 作为最大检测波长。
313 流动相的选择: 实验中选择了多种流动相体
系, 包括不同配比的甲醇2水, 甲醇2乙腈2水, 乙腈2水
等效洗脱及梯度洗脱, 结果以甲醇2乙腈2水 (20∶
30∶50)等效洗脱和乙腈2水梯度洗脱的分离效果较
好, 但后者的重现性较差, 因此选甲醇2乙腈2水
(20∶30∶50)作为流动相等效洗脱。
314 提取方法的选择: 实验中采用文献报道的提取
方法[2 ]将样品以甲醇2二氯甲烷研磨, 冷浸, 超声提
取, 用水2二氯甲烷萃取。但测定结果的重现性差, 可
能由于研磨后倾入冷浸容器的过程易造成误差。因
此, 本实验采用甲醇2二氯甲烷冷浸 24 h 后超声提
取 40 m in, 再以水2二氯甲烷萃取。本方法提取效果
与前者相当, 且重现性好。
References:
[ 1 ] B issery M C, Guenad D , V oegelin G, et a l. Experim en tal an2
t itumo r activity of taxo tere, a taxo l analogue [J ]1 Cancer R es,
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[ 2 ] Gao S L , Zhu D N , Zhou R H , et a l. Con ten t of the taxo l and
brevifo lio l in species of T ax us L. from east A sia and no rth
Am erica [J ]1 J Ch ina P harm U niv (中国药科大学学报) ,
1995, 26 (1) : 81
茜草提取工艺的研究
谭朝阳, 尤昭玲Ξ
(湖南中医学院 中西医结合系, 湖南 长沙 410007)
摘 要: 目的 优选茜草的最佳提取工艺。方法 比较渗漉法、浸渍法、加热回流法 3 种提取方式, 并采用L 9 (34)正
交试验, 以大叶茜草素含量和干浸膏收率为指标, 对影响茜草的乙醇加热回流提取工艺的因素水平进行了研究。结
果 茜草的最佳提取工艺为用 10 倍量 70% 乙醇加热回流提取 3 次, 每次 1 h。提取次数影响差异具有显著性。结
·993·中草药 Ch inese T radit ional and H erbal D rugs 第 35 卷第 4 期 2004 年 4 月
Ξ 收稿日期: 2003208212
基金项目: 国家自然科学基金项目 (30271633) ; 国家中医药管理局新药开发专项基金项目 (D 1X046B)
作者简介: 谭朝阳 (1970—) , 男, 湖南郴州人, 1992 年毕业于武汉大学生物化学专业后, 在湖南省药品检验所从事中药新药研究和质量
分析, 1999 年获湖南中医学院中药学硕士学位, 现为湖南中医学院 2001 级在读博士, 研究方向为: 妇产科中药新药研究与中
药质量分析。T el: (0731) 2290699 E2m ail: tom tzy@m ail. ch ina. com