全 文 ：应用单一组份作为质量控制指标的方法更科学、更
准确。
312　由图 2 知留坝西洋参提取液中 3 个特征强峰
的比值为 1∶0154∶1113, 实验中还考察了吉林靖
宇、北京怀柔、美国和加拿大西洋参, 发现 3 个特征
强峰的比值分别为 1∶2135∶1154、1∶0179∶
0151、1∶1110∶1108、1∶1127∶1162, 且总离子流
图中不具备峰 3 位附近的组峰。实验共考察了 7 月
份采集的 4 年生留坝西洋参主根 10 批, 批间 3 强峰
R SD 在 1160%～ 2186% 内。可见, 所建立的留坝西
洋参药材的特征对应图, 能反映该药材的主根部位
特征, 可用于该部位留坝西洋参药材的真伪鉴别。不
同部位、不同采收季节该西洋参药材化学物质及其
相关特征性的研究正在进行中, 结果将另文报道。
　　致谢: A gilen t 科技有限公司Donat ion 计划提
供所用仪器设备。
References:
[ 1 ]　M eng X Y, L i X G, Yu Y1 Chem ical constituen ts of flow er
buds of P anax qu inquef olium L 1 cu ltivated in Ch ina [J ]1 J
J ilin U n iv A g ric (吉林农业大学学报) , 2000, 22 (3) : 1281
[ 2 ]　T ang J , L u J1 A pp lication of H PL CöEL SD on quan titative
determ ination of p seudoginseno side F11 in roo t of P anax
qu inquef olium L 1 [J ]1 J P harm A na l (药物分析杂志) , 1999,
19 (4) : 24122431
[ 3 ]　L i W K, F itzloff F1 H PL C w ith evapo rative ligh t scattering
detection as a too l to distingu ish A sian ginseng ( P anax
g inseng ) and no rth Am erican ginseng (P anax qu inqueof olius)
[J ]1 J L iq Ch rom a tog r R ela t T echnol, 2002, 25 (1) : 172271
[ 4 ]　Zhou Y, M o W J, L iu S Y1 A pp lication of ES I2M SöM S fo r
the rap id determ ination of ginseno sidic m ix tu re [J ]1 Chem
B u ll (化学通报) , 1998 (2) : 272401
[ 5 ]　R ichard B 1 van B re em en et a l1 D eterm ination of ginseno sidic
m ix tu re by H PL C2ES IöM S [J ]1 S p ec W ild E con A n im P lan t
R es (特产研究) , 1997 (4) : 482521
东北红豆杉枝叶 HPLC 指纹图谱研究
杜智敏1, 陈瑞玲1, 杨宝峰2Ξ
(11 哈尔滨医科大学附属二院临床药物研究所, 黑龙江 哈尔滨　150086;
21 哈尔滨医科大学 药理学教研室, 黑龙江 哈尔滨　150086)
摘　要: 目的　研究东北红豆杉枝叶中 H PL C 指纹图谱, 以便完整地反映东北红豆杉枝叶内在化学信息, 全面评价
东北红豆杉内在质量。方法　采用高效液相色谱法分析东北红豆杉枝叶乙醇提取物。结果　建立了东北红豆杉指
纹图谱, 对 10 批不同采收时间的东北红豆杉枝叶进行了指纹图谱分析, 得出主要共有峰相对保留时间, 相对峰面
积作为东北红豆杉枝叶指纹谱相关技术参数。结论　东北红豆杉枝叶指纹图谱可用于评价其药材质量。
关键词: 东北红豆杉; H PL C 指纹图谱; H PL C
中图分类号: R 282171013　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2005) 01 0106 03
Ana lysis of Taxus cusp ida ta tw igs and leaves by HPLC-FPS
DU Zh i2m in1, CH EN R u i2ling1, YAN G Bao2feng2
(11 Inst itu te of C lin ical Pharm aco logy and Pharm acy, T he Second Ho sp ita l of H arb in M edical U niversity, H arb in 150086,
Ch ina; 21 D epartm ent of Pharm aco logy, H arb in M edical U niversity, H arb in 150086, Ch ina)
Abstract: Objective 　To study the H PL C fingerp rin ts (H PL C2FPS) T ax us cusp id a tea tw igs and
leaves (TCTL ) fo r ref lect ing the in tern l chem ical info rm at ion and evaluat ing its in ternal quality of TCTL.
M ethods　H PL C w as u sed to analyze the alcoho l ex tracts of TCTL. Results　T he fingerp rin t of TCTL
w as estab lished. H PL C2FPS of ten batches of T. cusp id a ta samp les co llected at d ifferen t t im e w ere
analysed and ex tab lished. T he co rrela t ion techn icl param eters of T. cusp id a ta w ere ob ta ined, i. e. the
m ain common peak w ith rela t ive reten t ion t im e and rela t ive peak area. Conclusion 　T he fingerp rin t can be
u sed to evaluate the quality of TCTL.
Key words: T ax us cusp id a ta Sieb1 et Zucc1; H PL C2FPS; H PL C
　　紫杉醇作为疗效确切的抗肿瘤药物, 美国 FDA 已于 1992 年正式批准上市。但紫杉醇在树木中含量
·601· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 36 卷第 1 期 2005 年 1 月
Ξ 收稿日期: 2004203216
作者简介: 杜智敏 (1956—) , 女, 主任药师, 博士研究生导师, 从事新药开发和人体生物利用度与药动学研究。3 通讯作者　T el: (0451) 86605353
很低, 且生产紫杉醇的主要原料是红豆杉植物的树
皮, 这样会导致树木的死亡。我国东北红豆杉资源丰
富, 枝叶繁茂易于栽培。为合理开发植物资源, 扩大
药用部位, 对东北红豆杉枝叶的化学成分及药理作
用研究表明东北红豆杉枝叶中除含紫杉醇外, 还含
有较高的 cephalom ann ine、102deacetylbaccat in Ë
等紫杉烷二萜类成分; 其枝叶提取物二氯甲烷部分
对人卵巢、结肠癌和人口腔上皮癌细胞株有明显抑
制作用[1 ]。临床上, 以“达克素”为代表的东北红豆杉
总提取物制剂疗效确切, 而紫杉醇的含量却很低, 且
副作用很小。对红豆杉提取物制剂进行质控, 仅以紫
杉醇一种或几种成分为标准的含量测定显然难以准
确、全面地评价其质量。笔者对东北红豆杉枝叶指纹
图谱进行研究, 以期为进一步提高质量, 建立控制方
法提供科学依据。
1　仪器与试药
111　仪器: 高效液相色谱仪 (W aters 600E 泵、PDA
检测器) , KQ 2200E 医用超声波清洗器 (昆山市超声
仪器有限公司) , 电子分析天平 (日本岛津) , 电热恒
温水浴锅 (北京科学仪器厂)。
112　试药: 乙腈 (色谱纯, 上海陆都化学试剂厂) ; 甲
醇 (优级纯, 北京化学试剂厂) ; 蒸馏水 (二重蒸馏水,
本院制剂室制 ) ; 其余试剂均为分析纯。 102
deaceylebaccat in Ë (102DAB Ë ) 对照品 (Sigm a 公
司产品)。
113　药材: 东北红豆杉枝叶产于黑龙江省哈尔滨
市, 本实验样品为黑龙江红豆杉科技开发公司提供
的醇提物, 出膏率固定在一定范围。样品采收时间及
编号: 021005 (1)、021026 ( 2)、021117 ( 3)、021130
(4)、021229 (5)、020205 (6)、020301 (7)、020311 (8)、
020219 (9)、020429 (10)。
2　方法与结果
211　色谱条件: K rom asil C 18色谱柱 (250 mm ×416
mm , 5 Λm ) ; 流动相A (50% 乙腈) ∶B (15% 乙腈) ,
梯度洗脱 0∶100
0～ 15 m in
　 10∶90
15～ 20 m in
　 25∶
75
20～ 40 m in
　 40∶60
40～ 60 m in
　 50∶50
60～ 80 m in
　
100∶0; 体积流量: 018 mL öm in; 柱温: 室温 (2515
℃) ; 检测波长: 227 nm ; 分析时间: 80 m in。
212　供试品溶液的制备: 精密称取干燥至恒重的样
品粉末 100 m g, 以 150 mL 二氯甲烷超声溶解, 滤
过, 滤液以 150 mL 水萃取, 水层再以二氯甲烷萃取
2 次, 收集二氯甲烷层, 于 30 ℃水浴挥干溶剂, 残渣
以 5 mL 甲醇溶解, 过 0145 Λm 微孔滤膜, 制成供试
品溶液。
213　精密度试验: 取同一供试品溶液连续进样 5
次, 按上述色谱条件, 考察指纹图谱的精密度, 结果
各色谱峰相对保留时间稳定, 主要共有峰相对峰面
积R SD < 5% , 表明精密度良好。
214　重现性试验: 按样品溶液制备方法处理同一样
品 5 份, 按上述色谱条件测定, 结果各色谱峰相对保
留时间稳定, 主要共有峰相对峰面积R SD < 5% , 表
明实验方法的重复性良好。
215　稳定性试验: 取同一供试品溶液分别在 0、2、
4、8、16 h 按上述色谱条件测定, 结果各色谱峰相对
保留时间稳定, 主要共有峰相对峰面积R SD < 5% ,
表明样品溶液在 16 h 内稳定。
216　指纹图谱的测定
21611　洗脱时间的确定: 在选择指纹图谱的洗脱时
间时, 记录了 120 m in 的色谱峰。发现 80 m in 之后
指纹图谱中基本没有色谱峰出现。故将指纹图谱的
洗脱时间初定为 80 m in。
21612　参照峰的选择: 在东北红豆杉枝叶的指纹图
谱中, 3 号峰所占的比例最大, 且较稳定, 因此选定 3
号峰为参照峰 (S)。
21613　不同采收时间指纹图谱的测定: 精密称取干
燥至恒重的样品 (1) 100 m g, 按 212 项下方法制备
供试品试液, 分别按 211 项下的色谱条件进行检测,
色谱图见图 1。
图 1　东北红豆杉指纹图谱特征峰
F ig11　F ingerpr in t character istic peak of T1 cusp ida ta
21614　指纹图谱色谱峰的标定: 称取 102DAB Ë 对
照品适量, 加入甲醇稀释成对照品溶液, 供H PL C 进
样测定, 按 211 项下条件进行实验, 色谱图见图 2。通
过对照品与样品图比较, 对样品图中色谱峰进行标
定, 样品色谱图中 8 号峰为 102DAB Ë 的色谱峰。
21615　指纹图谱的技术参数: 通过对 10 个不同采
收时间东北红豆杉枝叶指纹图谱的测定, 比较其色
谱图, 确定了 14 个色谱峰为各采收时间样品的共有
峰, 其中峰面积大于或等于 5% 总峰面积的峰有 4
个, 分别为 1、3、4、9 号。对各指纹图谱中共有峰的相
对保留时间ö相对峰面积进行统计, 计算结果见表 1。
·701·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 36 卷第 1 期 2005 年 1 月
A 2102DAB Ë 对照品　B2样品
A 2reference substance of 102DAB Ë 　B2samp le
图 2　指纹图谱特征峰的标定
F ig12　M arker of f ingerpr in t character istic
peak of T1 cusp ida ta 　　结果, 各采收时间样品中共有峰的相对保留时间非常接近, R SD 在 01061%～ 01311% , 进一步证明了各共有峰选择的准确性。技术参数: 共有峰相对保留时间: 1 (01733±01001)、2 (01914±01001)、3(1 )、4 ( 11230 ± 01001 )、5 ( 11280 ± 01002 )、6( 11343 ± 01003)、7 ( 11406 ± 01002)、8 ( 11504 ±01003)、9 (11946±01001)、10 (21135±01003)、11(21180±01005)、12 (21248±01003)、13 (21420±01004)、14 (21532±01003)。大于 5% 共有峰相对面积: 1 (01614±0107)、3 ( 1)、4 ( 01711±0104)、9(01418±0118)。
表 1　指纹图谱共有峰相对保留时间ö相对峰面积
Table 1　Relative reten tion timeörela tive area of common peaks in samples’ f ingerpr in ts
峰号
相对保留时间ö相对峰面积
样品 1 样品 2 样品 3 样品 4 样品 5 样品 6 样品 7 样品 8 样品 9 样品 10
1 01734ö01497 01733ö01655 01734ö01705 01734ö01638 01732ö01638 01734ö01632 01733ö01664 01733ö01578 01733ö01711 01733ö01648
2 01914ö01100 01915ö01112 01915ö01111 01911ö01114 01915ö01102 01915ö01119 01916ö01111 01911ö01100 01915ö01109 01914ö01113
3 　　1ö1 　　1ö1 　　1ö1 　　1ö1 　　1ö1 　　1ö1 　　1ö1 　　1ö1 　　1ö1
4 11230ö0172 11229ö01784 11229ö01627 11229ö01820 11230ö01673 11229ö01704 11231ö01679 11231ö01667 11229ö01680 11230ö01673
5 11280ö01070 11280ö01093 11279ö01083 11282ö01091 11281ö01070 11278ö01097 11281ö01083 11282ö01076 11279ö01080 11282ö01086
6 11341ö01046 11342ö01065 11343ö01041 11343ö01052 11340ö01047 11340ö01051 11344ö01053 11344ö01051 11345ö01054 11345ö01050
7 11407ö01054 11406ö01070 11406ö01061 11405ö01070 11406ö01054 11405ö01074 11405ö01062 11408ö01054 11407ö01057 11408ö01076
8 11504ö01075 11504ö01104 11504ö01071 11504ö01099 11504ö01082 11502ö01092 11504ö01072 11507ö01065 11504ö01069 11056ö01093
9 11946ö01497 11947ö01627 11946ö01417 11947ö01661 11946ö01449 11946ö01568 11946ö01408 11946ö01388 11947ö01374 11947ö01425
　10 21136ö01121 21137ö01157 21132ö01117 21137ö01169 21132ö01135 21137ö01155 21136ö01102 21137ö01097 21134ö01092 21135ö01138
　11 21180ö01069 21184ö01097 21177ö01089 21184ö01107 21177ö01108 21178ö01070 21182ö01054 21182ö01078 21180ö01097 21175ö01100
　12 21148ö01070 21251ö01052 21245ö01059 21251ö01049 21245ö01048 2. 246ö0. 055 2. 251ö0. 051 2. 251ö0. 028 2. 245ö0. 036 2. 248ö0. 115
　13 21420ö01055 21424ö01088 21419ö01085 21424ö01093 21419ö01065 21419ö01092 21419ö01094 21422ö01061 21419ö01078 21419ö01110
　14 21530ö01148 21535ö01072 21533ö01075 21535ö01170 21530ö01160 21533ö01141 21533ö01083 21535ö01061 21530ö01077 21530ö01181
3　讨论
311　供试液制备方法的选择: 精密称取干燥至恒重
的供试品粉末 4 份, 每份 100 m g, 分别以如下方法
处理。
　　方法 1: 以 150 mL 甲醇超声溶解, 滤过; 方法
2: 以 150 mL 二氯甲烷超声溶解, 滤过, 滤液加入
150 mL 水萃取, 水层再以二氯甲烷萃取 2 次, 收集
二氯甲烷层; 方法 3: 以 150 mL 醋酸乙酯超声溶解,
滤过, 滤液加入 150 mL 水萃取, 水层再以醋酸乙酯
萃取 2 次, 收集醋酸乙酯层; 方法 4: 以 150 mL 石油
醚溶解, 滤过, 滤液加入 150 mL 水萃取, 水层再以
石油醚萃取 2 次, 收集石油醚层。
　　溶液于 30 ℃水浴挥干, 残渣以 5 mL 甲醇溶解,
过 0145 Λm 的微孔滤膜, 供H PL C 色谱仪进样。结果 表明, 方法 1 色谱重叠严重, 无法辨认, 方法 3、4 色谱峰丢失较多, 方法 2 所得图谱的色谱峰数量较多, 分离度和重现性较好, 因此采用方法 2 的制备方法。312　10 个不同采收时间的东北红豆杉枝叶指纹图谱中, 主要峰群的整体图貌基本一致, 但各成分含量的相对比值有较大差别。313　本实验目前只获得 10 个不同采收时间样品,采用 H PL C 法, 进行指纹图谱分析, 所获得的信息显然是不全面的, 只能作为东北红豆杉质量评价的一个参考, 收集更多有代表性的样品进行测定, 获得更全面的信息, 能使东北红豆杉质量评价更为完善。References:[ 1 ]　Tong X J , W ang W S, Zhou J Y1 Studies on the chem icalconstituen ts of leaves and tw igs of T ax us cusp id a ta [J ]1 A ctaP harm S in (药学学报) , 1994, 29 (1) : 552601
·801· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 36 卷第 1 期 2005 年 1 月