全 文 ：·1364· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月
验利用F!C1。造成大鼠中动脉血栓形成的模型，观
察了脑梗死的情况。结果表明，注射用熊胆粉对缺血
性脑损伤有明显的治疗作用，改善了动物脑缺血的
症状；其对结扎双侧颈总动脉造成的不完全性脑缺
血也有缓解作用，抑制脑血管渗出增加，对反复脑缺
血再灌注损伤的动物能缓解脑水肿，降低脑组织由
于缺血而造成的MDA水平升高，保护脑组织SOD
活性，避免由于自由基的增加而加重脑损伤。临床上
脑缺血多由血栓的形成导致的，本实验还观察了注
射用熊胆粉对血栓形成的影响，结果表明，其可明显
抑制动物体内外血栓的形成，表现出明显的活血化
瘀作用。同时也观察了注射用熊胆粉对血小板的影
响，发现其可降低血小板的黏附率及抑制ADP诱
导的聚集率，说明注射用熊胆粉可抑制血小板的聚
集，改善血液黏稠度，也表明注射用熊胆粉抗血栓的
机制可能与改善血小板的功能有关。
上述结果表明，注射用熊胆粉可明显抑制动物
体内外的血栓形成，降低血液黏稠度，改善血液流变
性，抑制血小板的聚集，降低血小板的黏附性，改善
血栓缺血脑组织的病变程度，缓解脑水肿，降低毛细
血管的通透性，由于其可增加脑血流量，降低脑血管
阻力，因此可增加缺血区的供血，在脑组织受损时，
降低MDA水平，保护SOD的活性，对脑缺血组织
具有保护和治疗作用。
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猪蹄甲与穿山甲抗小鼠骨髓微循环障碍作用的实验研究
张东伟1，付 敏2，彭贤文2，李 健2，宋 鹏2，崔 瑛3，侯士良3
(1．清华大学化学系生命有机磷化学及化学生物学教育部重点实验室，北京 100084；2．北京中医药大学
细胞与生化实验室，北京100029；3．河南中医学院，河南郑州450008)
穿山甲为鲮鲤科动物穿山甲Mainspen—
tadactylaLinnaeus的鳞甲，由于其具有较好的临床
疗效而被广泛应用于内、外、妇、儿各科。但受生态环
境影响和人为因素的破坏，穿山甲野生资源日益匮
乏，药材供需矛盾比较突出，限制其临床应用。猪蹄
甲为猪科动物猪SuscrofadomesticaBrisson的蹄
甲，为畜牧业的副产品，其资源丰富。现代研究表明
猪蹄甲和穿山甲在临床应用、化学成分和药理作用
等方面有一定相似之处[1]，穿山甲有一定的抗小鼠
微循环障碍的作用[2]。在此基础上，为研究猪蹄甲替
代穿山甲的可能性，本实验进一步研究了猪蹄甲和
穿山甲抗小鼠骨髓微循环障碍的作用，观察猪蹄甲
和穿山甲在药理作用方面的相似性，为猪蹄甲全面
替代穿山甲提供一定的实验基础。
1材料
1．1 动物：ICR种雄性小鼠，体重(25±2)g，2～
2．5月龄，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
1．2 穿山甲水煎液：穿山甲为脊椎动物鲮鲤科穿山
甲M．pentadactylaLinnaeus的鳞甲，按《中国药
典》法砂烫醋淬炮制后，粉碎成粗颗粒。取干燥穿山
甲粉200g，加水600mL浸泡1h后，煮沸两次，第
1次50min，第2次30min，滤过。合并滤液，并压
榨药渣中滤汁，一并浓缩至200mI。(相当于含生药
1 g／mL，总氨基酸质量分数≥50％)，置于4C冰
箱，冷藏备用。临用前稀释为0．1g／mI。。
1．3猪蹄甲水煎液：猪蹄甲为猪科动物猪S．scrofa
domesticaBrissond的蹄甲，洗净，晒干后，炮制方法
同穿山甲，取猪蹄甲粉600g，煎煮方法同穿山甲，
滤液浓缩至600mI。(相当于含生药1g／mL，总氨
基酸质量分数≥50％)，置于4C冰箱，冷藏备用。
收稿日期：20050224
基金项目：北京中医药大学大学生科学技术研究基金资助项目(YD20021)
作者简介：张东伟(1974一)，男，河南洛阳人，研究方向为中药作用的生化机制。E—mail：zhdwl006@163．conl
万方数据
中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月·1365‘
临用时分别稀释为1、2、4g／mI。。
1．4 主要试剂：乙醚、无水乙醇、甲醛、高铁氰化钾、
氰化钾、磷酸二氢钾均购自北京化学试剂厂。60Co一了
射线源由军事医学科学院放射科学研究所提供。
1．5 仪器：7504型紫外可见分光光度计(上海第
三分析仪器厂)，离心机(北京医用离心机厂)，涡旋
混合器(江苏泰县)，电子天平(上海电子仪器厂)。
2 方法
2．1 显色剂的配制和保存：称取高铁氰化钾200
mg、氰化钾50mg和磷酸二氢钾140mg，溶于
1000mL蒸馏水中，分装于500mI，棕色瓶中，在
室温或4℃冰箱内保存备用。
2．2 动物分组与造模：取健康ICR种小鼠90只，
随机分为正常组、模型组、穿山甲组、猪蹄甲低、中、
高剂量组，每组15只。其中正常组和模型组ig生理
盐水(20mI。／kg)；穿山甲组ig穿山甲水煎液(20
g／kg)；猪蹄甲各组分别ig猪蹄甲水煎液(20、40、
80g／kg)。各组小鼠每日ig体积相等，实验期间自
由饮水。ig第7天后，除正常组外，其余各组进行
”Co一7射线照射[3]，剂量约为0．5Gy／min。全身照射
总剂量为4．0Gy，”Co一7照射后，称体重，继续按上
述方法给药，照射后第3天称体重后脱臼处死，测定
其骨髓血红蛋白水平、血清中血栓素A。(TxA：)和
前列腺素I：(PGI：)的水平，并取左后腿股骨，进行
组织形态学检查。
2．3 骨髓血红蛋白溶液的制备和测定：处死小鼠
后，每只小鼠取股骨和胫骨各1根(右后腿)，去净
骨外软组织，用注射针头在骨两端打孔，用注射器将
骨髓全部冲人盛有5mL显色剂的试管内，通过4
号针头将骨髓溶液移人离心管。每管加入乙醚1
mL，盖上翻口塞。在振荡器强烈振荡2～3rain，然
后3000r／rain离心15min，用吸管将脂肪层下的
骨髓血红蛋白溶液吸入比色杯，在波长540nm处
测定吸光度(A)值，用显色剂调节零点。
2．4 血清中TXA：和PGI。的水平测定：小鼠眼眶
取血，待血液凝固后，室温3000r／rain离心15
min，取其上清液即为血清，分装于Ependorf管一
20‘C冻存备用。用放免法测定[TXA。水平以血栓
素B。(TXB：)水平表示]。
2．5骨髓病理切片和微血管反应评价[3]：取小鼠的
左后腿股骨，作病理检查。取中股骨，去净周围软组
织，在10％甲醛溶液中固定，再按常规方法包埋、
切片、HE染色，用阿拉伯胶封片。病理切片由北京
中医药大学组织胚胎学教研室制作及观察。
2．6祛瘀作用的表示：药物的祛瘀作用可以通过测
定骨髓中血红蛋白的量来表示，计算公式为：
血红蛋白抑制率一等墼塑二竽×100％
01模型组 01正常组
2．7 数据处理：所有数据均以z±S表示，利用
SPSSll．0统计软件进行单因素方差分析。
3 结果
3．1对小鼠体重的影响：经60Co—T射线照射后，模
型组小鼠体重与正常组小鼠体重相比，有一定程度
的减轻趋势，且部分小鼠出现严重腹泻等反应。猪蹄
甲和穿山甲组小鼠体重同正常组小鼠相比无明显差
异，无明显腹泻现象。
3．2对60Co一7照射后小鼠骨髓血红蛋白水平的影
响，见表1。猪蹄甲和穿山甲均具有降低”Co一7辐射
后小鼠骨髓血红蛋白水平的功效，其中穿山甲对以
上指标改善较为显著(P
量猪蹄甲组与中、高剂量组差异显著(P
水平的影响(；±s，H一15)
Table1 EffectsofS．scrofadomesticaandM．pentadac—
tylaonhemoglobinlevelinmicewithobstruction
ofmarrowmicrocirculation(；±s，n一15)
组别剂量／(g·kg_1)骨髓血红蛋白(A值) 抑制率／％
与正常组比较：～P
与猪蹄甲(20g／kg)组比较：4P<0．05；表2同
’。P
Table2 issame
3．3对小鼠血清中TXB。和PGI。水平的影响：见表
2。猪蹄甲和穿山甲能显著降低60Co一7辐射后小鼠
血清TXB。水平及升高小鼠血清PGI。水平，其中穿
山甲对以上指标改善较为显著(P
0．05)，低剂量猪蹄甲组与中、高剂量猪蹄甲组比较
差异显著(P<0．05)。
3．4小鼠骨髓病理检查结果：正常组的骨髓毛细血
管壁清晰，可见内皮细胞完整，无出血现象。模型组
小鼠骨髓内呈明显出血，血窦结构不清，明显扩张或
万方数据
·1366· 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第9期2005年9月
表2猪蹄甲与穿山甲对骨髓微循环障碍小鼠血清TXB：
和PGl2水平的影响(工土s，n一15)
Table2 EffectsofS．scrofadomesticaandM．pentadactyla
onTXB2andPGl2evelinmiceserumwithobstruc-
tionofmarrowmierocirculation(卫±s，n一15)
组别剂量／(g·kg一1)TXBz／Qtg·mL一1)PGl2／(Pg·mL一1)
破坏，血窦数减少，可见髓腔中心静脉扩张，窦状隙
有形状和大小不一的出血灶。穿山甲组小鼠骨髓内
毛细胞损伤与出血明显减轻；猪蹄甲低、中、高剂量
组，未见明显的骨髓内出血，可见毛细血管壁结构，
各剂量组间有一定差异，且中、高剂量组能明显地减
轻窦状隙系统的破坏，降低微血管通透性，改善窦状
隙系统血流状况，能明显地使骨髓微循环损害得到
一定延缓和遏制。
4讨论
骨髓微循环系统的基本功能是保证骨组织及细
胞的物质交换，并与机体造血功能有密切联系。骨髓
组织中除大量的造血细胞外，还有丰富的血管网络
组成的骨髓微循环系统。60Co一7射线照射小鼠后可
以造成骨髓内血窦结构的破坏，而致小鼠骨髓血红
蛋白水平升高、血清中TXA：升高和PGI。降低等一
系列微循环障碍表现。骨髓微循环系统的改变，也属
于中医血瘀的一种表现。60Co一7射线照射小鼠，可引
起骨髓血红蛋白水平升高及骨髓的血窦扩张，充血
通透性增高。该模型成熟稳定，常用于治疗骨髓微循
环药物的评价研究[3]。PGI：和TXA：均为花生四烯
酸的代谢产物，它们对血液系统的药理作用相反，它
们之间的相互平衡对于维护机体的正常血液循环有
着重要的作用E4,5]。而微循环障碍常表现为血清中
TXA：升高和PGl：降低，导致PGI。和TXA。失衡。因
此本实验选择以上指标进行研究，能较好地反映药
物的作用。
穿山甲为活血消痈、消肿排脓之良药。《本草纲
目》记载穿山甲：“除痰虐寒热，风痹强直疼痛，通经
脉，下乳汁，消痈肿，排脓血，通窍杀虫”。现代研究证
明穿山甲水煎液具有良好的抗微循环障碍的作
用[2]。本实验研究也证明，穿山甲水煎液能在一定程
度上防治60Co一7射线造成的小鼠骨髓血窦结构损
伤，显著降低血清TXB。(血清TXB。为血液中
TXA。体外存在形式)水平和升高血清PGI。水平。
《本草从新》中记载：“猪悬蹄甲，治寒热痰喘，痘疮人
目，五痔肠痈”。现代研究证明猪蹄甲对心血管系统
及血液系统有显著影响口’7]。本实验研究也发现猪蹄
甲低、中、高剂量均能预防60Co—y射线造成的小鼠骨
髓血窦结构损伤以及调节血清中TXB。和PGI：水
平，但猪蹄甲低剂量组作用不如中、高剂量组明显。
本实验研究表明：猪蹄甲和穿山甲均有一定的
抗小鼠微循环障碍的作用，其机制可能在于改善小
鼠微循环系统，让成熟的血细胞进入血管，促进小鼠
骨髓静脉窦的修复，明显增加骨髓微血管数，扩张其
微血管面积，改善红细胞的变形和取向能力髓]，从而
发挥其活血化瘀作用。而小鼠骨髓基质内细胞核因
子一KB(NF—KB)与小鼠骨髓微环境基质细胞的抗辐
射能力及造血功能恢复有关[9’1⋯。穿山甲和猪蹄甲
对骨髓微循环改善是否与调节小鼠基质内NF—KB
有关，有待于进一步探讨。猪蹄甲中、高剂量组与穿
山甲组在抗小鼠骨髓微循环障碍方面无显著差异，
这提示猪蹄甲在抗小鼠骨髓微循环障碍方面替代穿
山甲具有一定的可能性，这为猪蹄甲全面替代穿山
甲奠定了一定的实验基础。至于猪蹄甲能否全面替
代穿山甲有待于进一步研究。
致谢：本实验在进行过程中得到了北京中医药
大学团委董玲、范璐老师，科研处王伟、葛纫华、王志
刚老师的大力支持，同时也得到了中日友好医院、军
事医学科学院放射科学研究所的大力帮助。
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蚓激酶对实验动物血栓及相关血液学指标的影响
许超千1，焦军东1，孙宏丽1，龚冬梅1，杨宝峰1’2+
(1．哈尔滨医科大学药理学教研室，黑龙江哈尔滨150086；2．黑龙江省生物医药重点实验室～
省部共建国家重点实验室培育基地药理学教研室，黑龙江哈尔滨 150086)
近年来我国心肌梗死、血栓性疾病成为常见病、
多发病，发病率逐年提高，并且留有较为严重的后遗
症。目前临床上常用于治疗血栓性疾病的药物，如尿
激酶、链激酶等虽然具有较好的疗效，但易引起出
血。1983年Mihara等首次从地龙(蚯蚓)中提取出
蚓激酶，作为治疗血栓性疾病的新型药物，其疗效确
切，且不易引起出血口~3]，但由于蚓激酶提取工艺复
杂，因此临床应用较少。本室与九信科技实业有限公
司经多年合作，以蚯蚓为原料，提取出蚓激酶。本实
验通过对蚓激酶进行药效学的研究，证明其有抗血
栓作用，为临床用药提供了理论依据。
1材料与方法
1．1 药品和试剂：蚓激酶：哈尔滨医科大学药理教
研室与哈尔滨九信科技实业有限公司共同研制，每
支0．25mg；脉络宁注射液，金陵药业股份有限公司
南京金陵制药厂提供，批号200202021；二磷酸腺苷
(ADP)，美国Biopool公司提供，批号704N02。
1．2实验动物：Wistar大鼠，雄性，体重(300±50)
g，哈尔滨医科大学实验动物中心提供，合格证号：
09—2—1。大耳白家兔，雌雄兼用，体重(2．5---!-_0．5)
kg，哈尔滨医科大学实验动物中心提供，合格证号：
医动字：9—4—1。
1．3 仪器：Librorael型电子天平，13本岛津；
xBH～32A型血小板黏附仪，无锡医疗器械厂；
LBY—NJ2血液聚集仪，北京普利生公司。
1．4大鼠动静脉旁路血栓模型的建立：Wistar大
鼠50只，随机分为空白对照组、蚓激酶大、中、小剂
量(8、4、2mg／kg)组、阳性对照组。空白对照组iv
等量生理盐水；蚓激酶各剂量组iv蚓激酶；阳性对
照组iv脉络宁注射液(22．5mL／kg)，各组均采用
舌下静脉给药，给药后5min，大鼠以戊巴比妥钠
0．05g／kgip麻醉，正中切开颈部皮肤，钝性剥离右
颈总动脉及左颈外静脉，将事先充满肝素生理盐水
(50U／mL)的聚乙烯管(分3段连结，在中段放入
长5cm的4号手术线)的一端插入左颈外静脉后，
从聚乙烯管注入肝素50U／kg，夹住管壁，将右颈总
动脉近心端用止血夹夹住以阻断血流，眼科剪剪一
小口，将聚乙烯管另一端插入右颈总动脉，结扎。打
开止血夹开放血流，15min后中断血流，迅速取下
聚乙烯管，取出手术线，放在已称质量的滤纸上，用
分析天平称质量，以总质量减去线质量和纸质量即
得血栓湿质量，然后将滤纸放入干燥箱60℃干燥
1h后称质量，以总质量减去线质量和纸质量即得
血栓干质量。
1．5 家兔血小板数、血小板黏附率及聚集率的测
定：将健康家兔40只，随机分为5组，分别为空白对
照组(生理盐水0．5mL／kg)、蚓激酶(1、2、4rag／
kg)组和阳性对照药脉络宁注射液(1．1mL／kg)
组。取家兔称质量，于耳缘iv药物，8rain后心脏取
血2．7mL，加入到预先加有0．3mL3．8％枸橼酸
钠的试管中，摇匀待用。取抗凝血750弘I。，加入容量
为5mL的玻璃球瓶中，置于血小板黏附仪转盘上，
以3r／min旋转15rain。然后从抗凝管及玻璃球瓶
中分别取血20肛L，各加到盛有0．38mL血小板稀
释液的试管中进行血小板计数，计算黏附率。将抗凝
血以500r／min离心5min，制备富血小板血浆
(PRP)，剩余血浆经3000r／rain离心10min，制备
贫血小板血浆(PPP)，用PPP调PRP中血小板数
收稿日期：2005—02—13
作者简介：许超千(1975一)，男，黑龙江省哈尔滨人，硕士研究生，研究方向为心血管药理学。
Tel：(0451)86669482E—mail：xuchaoqian@ems．hrbmu．edu．cn
*通讯作者杨宝峰
万方数据
猪蹄甲与穿山甲抗小鼠骨髓微循环障碍作用的实验研究
作者： 张东伟， 付敏， 彭贤文， 李健， 宋鹏， 崔瑛， 侯士良
作者单位： 张东伟(清华大学,化学系,生命有机磷化学及化学生物学教育部重点实验室,北京,100084)
， 付敏,彭贤文,李健,宋鹏(北京中医药大学,细胞与生化实验室,北京,100029)， 崔瑛,侯
士良(河南中医学院,河南,郑州,450008)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2005,36(9)
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