全 文 ：·药理实验与临床观察·
水杉总黄酮对大鼠血小板聚集、血液流变性的作用及机制探讨
敖　英1 ,刘惟莞1 ,严常开2,石明健1,王红英1X
( 1. 武汉大学医学院 药理教研室,湖北 武汉　430071; 2. 武汉市武钢职工总医院 药械中心, 湖北 武汉　430080)
摘　要: 目的　观察水杉总黄酮 ( FMG ) 对大鼠血小板聚集活性、血小板 5-HT 释放反应、血浆 NO 含量及血液流
变性的影响。方法　比浊法测定大鼠血小板聚集活性、荧光光度法测定血小板 5-HT 释放反应、分光光度法测定血
浆 NO 含量、血液流变全自动分析仪检测血液流变性。结果　FMG 抑制大鼠血小板聚集活性, 抑制血小板 5-HT
释放, 升高血浆 NO 含量,降低急性血瘀大鼠的全血比粘度、血浆比粘度、红细胞电泳时间、红细胞压积、红细胞计
数、血沉方程 K 值, 改善大鼠的血液流变性。结论　FMG 有抗血小板聚集活性、改善血液流变性的作用。其抗血小
板聚集的作用机制可能与抑制血小板释放反应、增加体内 NO 合成及 Ca2+ 拮抗作用有关。
关键词: 水杉总黄酮;血小板聚集; 5-HT 释放反应;一氧化氮; 血液流变性
中图分类号: R286. 2　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253 2670( 2002) 04 0327 03
Effect of total flavones isolated fromMetasequoia glyptostroboides on platelet aggregation
and hemorrheological properties in rats and research of its mechanism
AO Ying
1, L IU Wei-w an
1 , YAN Chang-kai
2, SHI M ing-jian
1, WANG Hong-ying
1
( 1. Depar tment of Pharmaco lo gy , M edical Colleg e of Wuhan U niver sity , Wuhan Hubei 430071, China;
2. M edicinal Instr ument Center , Workers Gener al Hospit al o f Wuhan Steel Company , Wuhan Hubei 430080, China)
Abstract: Obj ect　T o observe the ef fect of total flav ones isolated f rom Metasequoia glyp tostroboides
Hu et Cheng ( FMG) on platelet agg regat ion, 5-HT of release, content of NO in plasma and hemor rheolo g-
ical parameters in r ats. Methods　Platelet agg regat ion w as quantif ied by turbidimetry , release of 5-HT
was assayed by fluor escence technique, and content o f NO in plasma w as determined by spect ropho-
tometry. Results　Inhibition of platelet agg regat ion and r elease of 5-HT , increase of NO content in plas-
ma, as w ell as decr ease of w hole blood viscosity , plasma viscosity, red-cell elect ropho resis t ime, r ed-cell
specific v olume, red-cell count and K value in ESR equat ion w ere observed in the acute blo od stasis rat ,
thereby the rat s hemorr heolo gical propert ies w ere improved. Conclusion　FMG is able to inhibit the
platelet agg regat ion and improve the hemorrheolog ical parameters in acute blood stasis r at. The inhibition
of release of 5-HT, increase of NO content in plasma and antagonist ic act ion of Ca
2+
may be the mechanism
of it s act ions.
Key words : total f lavones of Metasequoia glyp tost roboides Hu et Cheng ( FMG) ; platelet ag gregat ion;
5-HT release react ion; NO; hemorr heolog ical propert ies
　　血栓性疾病、心脑血管疾病往往存在血小板功
能亢进及血液流变性的异常。抑制血小板聚集活性、
改善血液流变性可有效防治此类疾病的发生、发展。
水杉总黄酮 ( total f lavones of M etasequoia glyp -
tostr oboides Hu et Cheng , FMG) 是中科院武汉植
物研究所从古老杉属植物中提取的活性部位, FMG
具有抗心肌缺血、心律失常和心肌肥厚的作用 [ 1～4] ,
对心血管疾病有一定保护作用。本研究观察了
FMG 对大鼠血小板聚集活性和血液流变性的影
响, 进一步探讨其对心脑血管栓塞性疾病的保护作
用机制。
1　材料和方法
1. 1　材料
1. 1. 1　药物和试剂:阿司匹林由石家庄神威药业股
份有限公司生产, 批号: 01030314; 水杉总黄酮
( FMG) 由中科院武汉植物研究所提供, 含量为
32% ;二磷酸腺苷 ( ADP) 系 Sigma 公司产品;凝血
酶由武汉海特生化有限公司生产, 批号:鄂医卫准字
·327·中草药　Chinese T raditional and Herbal Drug s　2002 年第 33卷第 4期
X 收稿日期: 2001-08-20基金项目:国家自然科学基金资助课题( No. 39970085)作者简介:敖　英( 1975-) ,女,湖北武汉人,武汉大学医学院药理教研室助教,在读硕士研究生,主要从事心血管药理研究。
T el: ( 027) 87331875
( 92) 397 号;川芎嗪注射液由常州制药厂生产。
1. 1. 2　动物: Wistar 大鼠, 体重 220～250 g ,由湖
北省卫生防疫站提供。
1. 1. 3　仪器: LBY-N J2 型血小板聚集仪, 北京普
利生公司产品; FASCO-3010A 全自动血液流变快
速分析仪,重庆大学维多生物工程研究所产品; 岛津
RF-540 型荧光分光光度计, 日本岛津公司产品;
UV -120-02 型紫外分光光度计, 日本 Shimadzu 公
司产品; 80-2B 型台式离心机, 上海安亭科学仪器
厂产品。
1. 2　方法
1. 2. 1　血小板聚集活性测定: 32 只雄性 Wistar 大
鼠随机分成 4 组, 分别 ig FMG 40, 20 mg/ ( kg·
d)、阿司匹林 5 mg / ( kg·d) 及等容量生理盐水,连
续 7 d。第 7天 ig 1 h 后戊巴比妥钠 35 mg/ kg 腹腔
麻醉, 颈总动脉插管取血, 109 mmol / L 枸橼酸钠抗
凝。800 r / min 离心 8 min, 取上层富血小板血浆
( PRP) ,余血 4 000 r / min 离心 10 min,取贫血小板
血浆 ( PPP) ,用 PPP 调 PRP 至血小板数 ( 6～7)×
108 / mL。每次取 PRP 200 LL 于比浊杯中, 37℃ 温
育 5 m in, 分别加诱导剂 ADP ( 4 Lmo l/ L )、凝血酶
( 500 U / L) 诱导聚集, 按比浊法测定血小板聚集
活性。
1. 2. 2　血小板 5-HT 释放反应测定: 32 只雄性
Wistar 大鼠, 分组、给药、取血、制备 PPP 和 PRP
同 1. 2. 1。凝血酶 ( 500 U / L) 诱导聚集 5 min后,立
即置于冰浴中, 加 5% EDT A 10 LL 终止反应。3
000 r/ m in 离心 10 m in, 取上清为聚集后 PPP。用荧
光光度法[ 5]测定血小板 5-HT 释放率。
1. 2. 3　血浆 NO 含量测定[ 6] : 取上组 PPP 200 LL,
用双蒸水稀释至 3 mL, 分别加入 0. 8% 对氨基苯
磺酸、0. 5% A-萘胺各 125 LL, 室温反应 20 m in,
540 nm 处测定吸光度值,以标准曲线计算 NO 2- 含
量。标准管、空白管、样品管平行操作。
1. 2. 4　急性血瘀大鼠血液流变性的测定: 40 只
Wistar 大鼠,雌雄各半, 随机分成 5 组, 即对照组、
模型组、FMG 高、低剂量组、川芎嗪组。各给药组分
别 ig FMG 40, 20 mg/ ( kg·d) , 对照组和模型组给
予等容量生理盐水,连续 7 d。末次给药后 1 h, 按文
献[ 7]制作急性血瘀模型。次晨取血 4 mL 放入肝素
化的定量采血管中,以 FASCO-3010A 全自动血液
流变快速分析仪测定其血液流变学指标。
1. 3　统计学分析:全部资料均以 x±s 表示, 使用
excel2000 软件进行 t检验。
2　结果
2. 1　FMG 对血小板聚集活性的影响: FMG 各剂
量组与对照组比较, A DP 和凝血酶诱导的血小板聚
集率分别降低, 有明显的抑制作用,并具有一定量效
关系,结果见表 1。
表 1　FMG对大鼠血小板聚集活性的影响( x±s, % )
组别 剂量
( mg /k g·d)
例
数
ADP
最大聚集率抑制率
凝血酶
最大聚集率抑制率
对照 - 8 56. 60±6. 28 - 　 75. 96± 9. 64 - 　
FM G 40 7 44. 80±5. 42* * 20. 85 59. 84±11. 25* * 21. 22
20 7 48. 99±5. 11* 13. 43 62. 00± 7. 86* * 18. 38
阿司匹林 5 8 46. 64±6. 97* 17. 67 64. 74± 7. 06* 14. 77
　　与对照组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
2. 2　FMG 对血小板 5-HT 释放反应和血浆 NO
含量的影响: FMG 各剂量组对凝血酶诱导的大鼠
血小板 5-HT 释放率有明显抑制作用, 与对照组比
较, 5-HT 释放率分别降低 39. 30%、38. 63% ( P
均< 0. 01) , 血浆 NO 含量分别升高 175. 05%、
122. 16% ( P 均< 0. 01) ,结果见表 2。
表 2　FMG 对大鼠血小板 5-HT释放率
及血浆 NO 含量的影响 ( x±s)
组　别 剂量
( mg/ kg·d ) 例数
5-HT
释放率 ( % )
血浆 NO 含量
( Lmol/ L)
对照 - 8 34. 83±8. 85 5. 01±0. 43
FMG 40 7 21. 24±6. 93* * 13. 78±1. 18* *
20 7 21. 37±8. 07* * 11. 13±2. 21* *
阿司匹林 5 7 23. 73±6. 91* 8. 49±0. 95*
　　与对照组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
2. 3　FMG 对急性血瘀大鼠血液流变性的影响: 模
型组与对照组比较, 全血比粘度、血浆比粘度、红细
胞电泳时间、红细胞压积、血沉方程 K 值、红细胞计
数均明显升高, 提示血瘀模型制作成功。与模型组比
较, FMG 各剂量组对血瘀大鼠高、中、低切全血比
粘度分别降低 14. 25% ( P< 0. 01)、13. 95% ( P<
0. 05)、9. 11% ( P < 0. 05) ; 7. 54% ( P > 0. 05 )、
13. 90 ( P< 0. 05)、6. 73% ( P> 0. 05) ;血浆比粘度
分别降低 8. 95% ( P < 0. 01)、- 0. 08% ( P >
0. 05) ; 红细胞电泳时间分别降低 14. 25% ( P <
0. 05)、7. 54% ( P > 0. 05) ; 红细胞压积分别降低
8. 59% ( P< 0. 05)、11. 80% ( P< 0. 01) ; 血沉方程
K 值分别降低 24. 55% ( P< 0. 05)、28. 76% ( P<
0. 01) ;红细胞计数分别降低 11. 92% ( P< 0. 05)、
13. 94% ( P< 0. 01) , 结果见表 3。
3　讨论
近年来,随着物质生活水平的提高和生活节奏
的加快,冠心病、高血压、脑血管疾病等发病率大大
·328· 中草药　Chinese T raditional and Herbal Drug s　2002 年第 33卷第 4期
表 3　FMG对急性血瘀大鼠血液流变性的影响 ( x±s, n= 7)
组别 剂量
( g/ k g·d)
全血比粘度 ( mPa·s)
高切 ( 200/ s) 中切 ( 30/ s) 低切 ( 3/ s )
血浆比粘度
( mPa·s)
红细胞电泳
时间( s )
红细胞压积
( L/ L)
血沉方程
K 值
红细胞计数
(×1012/ L)
对照 - 4. 71±0. 44 6. 03±0. 59 12. 56±1. 20 1. 59±0. 04 17. 67±1. 66 0. 46±0. 03 4. 28±0. 65 4. 97±0. 32
模型 - 5. 27±0. 41* 6. 74±0. 52* 13. 65±0. 88 1. 78±0. 07* * 19. 78±1. 54* 0. 52±0. 03* * 5. 78±1. 12* * 5. 70±0. 61*
FMG 40 4. 52±0. 70△△5. 80±0. 83△ 12. 41±0. 88△ 1. 62±0. 11△△16. 96±2. 63△ 0. 47±0. 04△ 4. 38±1. 13△ 5. 02±0. 50△
20 4. 87±0. 89 5. 80±0. 74△ 12. 73±1. 92 1. 78±0. 21 18. 29±3. 35 0. 45±0. 01△△4. 11±0. 20△△4. 91±0. 11△△
川芎嗪 20 4. 70±0. 41△ 6. 15±0. 34△ 12. 58±0. 63△ 1. 69±0. 10 17. 63±1. 52△ 0. 45±0. 03△△4. 13±0. 64△△4. 89±0. 35△△
　　　　与对照组比较: * P< 0. 05　* * P < 0. 01; 与模型组比较: △P < 0. 05　△△P < 0. 01
提高,这些疾病的发生与血小板聚集、粘附等活性增
高相关以外, 还与血液流变性异常、血液粘度增加、
血细胞变形能力降低、聚集能力增强有关。本研究结
果显示: FMG 能抑制 ADP 和凝血酶诱导的血小板
聚集活性,降低急性血瘀大鼠全血比粘度、血浆比粘
度、红细胞电泳时间、红细胞压积、红细胞计数、血沉
方程 K 值, 改善急性血瘀大鼠的粘、凝状态, 表明
FMG 有抗血小板聚集、改善血液流变性的作用。
血小板具有粘附、变形、分泌、释放、及聚集等功
能。凝血酶等诱导剂与血小板膜上相应受体结合,通
过 G 蛋白偶联激活磷脂酶 C,后者将 4, 5-二磷酸磷
脂酰肌醇 ( PIP 2) 裂解为三磷酸肌醇 ( IP 3 ) 及二酰
甘油 ( DG)。IP 3进入胞内,促使血小板致密管系统
释放 Ca2+ ,使胞浆内游离 Ca2+浓度上升,引起微丝
收缩、血小板变形, 并促使静息血小板内低浓度
Ca
2+条件下的酶活化。DG 留在膜上,激活蛋白激酸
C,引起颗粒分泌,颗粒内容物如 ADP、TXA 2、5-HT
等向胞外释放,纤维蛋白原受体 ( AⅡbB3 ) 变构,露
出结合部位, 共同导致血小板聚集即活化[ 8]。而释放
出的 5-HT 和 ADP 又可作用于膜上相应受体, 引
起血小板进一步聚集[ 9]。本研究表明: FMG 能抑制
凝血酶诱导的 5-HT 释放反应, 提示其可以抑制凝
血酶诱导的血小板活化。而对 5-HT 释放反应的抑
制又可能为抗血小板聚集的机制之一。另外, Ca2+
作为第二信使,在血小板活化过程中起重要作用。以
往研究表明 FMG 有降低组织总 Ca2+ 、细胞内 Ca2+
和阻断 Ca2+ 通道[ 2, 10]的作用, 提示其降低血小板聚
集的作用可能与 Ca2+ 拮抗作用有关。但其具体机制
仍需进一步探讨。
体内普遍存在精氨酸-一氧化氮-环磷酸鸟苷代
谢通路。NO 在心血管、神经和免疫系统中作为信使
分子,具有重要的生理病理作用。NO 具有抗血小板
聚集、抗血小板和血细胞粘附,抑制凝血酶和 T XA 2
类似物诱导的血小板膜糖蛋白、p 选择素、CD65 和
GPⅡb/Ⅲa 复合物表达增强的作用。其作用机制认
为系由精氨酸-一氧化氮-环磷酸鸟苷代谢通路介
导, 使血小板 cGMP 升高,通过 cGMP 的第二信使
作用,调节收缩蛋白的磷酸化水平,并使 Ca2+ 水平
下降,从而抑制血小板聚集[ 11, 12]。FMG 增加大鼠血
浆 NO 含量,可能为其抗血小板聚集的机制之一。
综上所述, FMG 能改善血液流变性,抑制血小
板聚集。其抗血小板聚集作用机制可能与抑制血小
板释放反应、增加血浆 NO 含量及 Ca2+ 拮抗作用有
关。但其对心脑血管疾病的保护作用机制仍有待进
一步深入。
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·329·中草药　Chinese T raditional and Herbal Drug s　2002 年第 33卷第 4期