全 文 ：中草药 Ch ins e eT r ad it i on al and H er balDr u gs第 5 3卷第 0 1期 2 4 0 0年 2 0月 . 1 10 9·
昔和昔元 )进行分离 , 10 C m 色谱柱能较好地达到分
离效果 。 乙醇一水体系 ( 20 % 乙醇 )适用于银杏黄酮的
分离纯化 , 甲醇体 系 ( 甲醇一 N a A 。 , p H 6 . 0) 适用于
银杏黄酮昔元的分离 。 懈皮素和山奈酚的最佳分离
度为 1 . 7 , 山奈 酚 和异 鼠李 黄素的最佳分 离度 为
1
.
0
,昔元分离的负荷量可以达到 6 . 7 m g 。 懈皮素的
收率可达到 95 % 以上 , 纯度在 95 %以上 ; 山奈酚和
异鼠李素的纯度均可达到 90 % 以上 。 色谱柱通过反
复再生其寿命在 25 m g /m L 固定相以上 。 表明该固
定相具有一定应用潜力 。
R e f e r e n e e s
:
〔l 〕 M a H Y , X u e Y Y . A d v a n e e s o f t h e a p p l i e a t i o n s i n
p h a r m a e o lo g y a n d p h a r m a e e u t i e a l a n a ly s i s o f 。 y e lo d e x t r i n [ J〕.
J aY
二 , a n U o iv (延安大学学报 ) , 19 9 8 , 1 7 ( 2 ) : 4 8一 5 5 .
〔2 ] H a g in a k a J , w a k a l J . 卜C y e l o d e x t r i n e o n d e d : i l i e a fo r d i r e e t
in je e t i o n a n a ly s i s o f d r u g e n a n t i ome
r s i n s e r u m b y liq u id
e h r o m a t o g r a p h y 〔J〕 . A n a l hC 。 , 1 9 9 0 , 62 : 9 9 7一 1 0 0 0 .
[ 3〕 eS b i lle B , G u i lla u m e M , V id a l一 M a d ja r C , et a l . R e t e n t i o n a nd
e n a n t i o s e le e t i v i t y p r o p e r t i e s o f 卜e y e lo d e x t r in p o ly m e r s a n d
d e r i v a t i v e s o n p o r o u s s i l i e a f o r r e v e r s e
一P h a s e liq u id e h r o m a
-
t o g r a p h i e s e p ar
a t i o n o f e n a n t i o m e r s 〔J〕. hc omar
t o g r 口p人ia ,
1 9 9 7
, 4 5
: 3 8 3
一 3 8 9
.
免疫磁性捕获 E L IS A 法检测甘草中甘草蛋 白的研究
曹 宇 , 曹学琳 , 田 旺 , 杨文博 , 白 钢 .
(南开大学生命科学学院 , 天津 3 0 0 0 7 1 )
摘 要 : 目的 制备甘草蛋白免疫磁性微球 ,并建立快速 、精确的免疫磁性捕获 E LI SA 法检测甘草蛋白 。 方法 采
用种子聚合法合成聚苯乙烯磁性微球 ,并以兔抗甘草蛋白 I沙 抗体致敏 ,制备特异性捕获甘草特征蛋白的免疫磁性微球 。 以生物素标记抗体为示踪抗体 ,结合辣根过氧化物酶标亲和素建立 E LI S A 检测系统 ,用于甘草药材和含
甘草中成药中甘草蛋白的分析 。 结果 利用该方法对甘草药材和 中成药中甘草蛋白抗原检测 ,检测灵敏度达到 10
n g / m L
新方法
。 结论 免疫磁性捕获 E L IS A 检测技术方便 、 快速 、准确 , 为生药的品种鉴定及中成药的质量控制提供一种
关挂词 :甘草 ;甘草蛋白 ;免疫磁性微球 ;免疫磁性捕获 E LI S A 技术
中圈分类号 : R 2 8 6 . 0 2 文献标识码 : A 文章编号 : 0 2 5 3 一 2 6 7 0 ( 2 0 0 4 ) 1 0 一 1 1 0 9 一 0 4
Im m u n o m a g n e t i e s e P a r a t i o n E L I S A f o r i d e n t i f i e a t i o n o f P r o t e i n i n R a d ix G ly cy
r r h i z a e
C A O Y u
,
C A O X u e
一
l i n
,
T I A N W
a n g
,
Y A N G W
e n 一
oB
,
B A I G a n g
.
( C o l le g e o f L ife S e ie n e e
,
N
a n k a i U n iv e r s it y
,
T i
a n j i
n , 3 0 0 0 7 1
,
C h i
n a )
A b s t r a c t : O b j e e t T o p r o v id e a q u i e k a n d p r e e i s e im m u n o m a g n e t i e s e p a r a t i o n e n z y m e
一
l i n k e d
im m u o s o r b e n t a s s a y ( IM S
一
E L I S A ) f o r p r o t e i n d e t e e t i n g o f R a d i x G ly 卿犷犷人i z a e b y im m u n o m a g n e t i e
m i e r o s p h e r e s ( IM M S )
.
M e t h o d s U s i n g d i s p e r s io n p o l y m e r i z a t i o n
,
p o l y s t y r e n e m a g n e t i e m ie r o s p h e r e s a s
e a r r ie r s w e r e p r e p a r e d
.
IM M S e o a t i n g w i t h r a b b it a n t i
一
R a d i x G ly 卿 r 犷入i z a e p r o t e i n ( R G P ) I g G e a n
s p e e i f i e a l l y e a p t u r e R G P
.
T a k i n g b i o t i n y la t e d a n t i
一
R G P r a b b i t Ig G a s a t r a e e r a n t ib o d y
,
t o g e t h e r w i t h
h o r s e r a d i s h p e r o x id a s e ( H R P ) l a b e l e d a v id i n
, a n E L I S A o n IMM S w a s d e v e l o p e d
.
R e s u l t s T h e m e t h o d
w a s s p e e i f i e t o R G P a n t i g e n a n d e o u l d id e n t i f y 10 n g / m L R G P a n t i g e n
.
C o n e l “ s i o n IM S
一
E L IS A s h o w s a
n e w p r a e t i e a l i t y o f t h e u n e q u iv o e a l id e n t if i e a t i o n o f e f f e e t i v e e o n s t i t u e n t f o r i t s s p e e d n e s s
, e o n v e n i e n e e
,
a n d a e e u r a e y
·
K e y w o r d s
: R a d i x G ly 卿犷 r 丙i z a e ; R a d i x G ly cy r hr i z a e p r o t e i n ( R G P ) ; im m u n o m a g n e t i e m i e r o s p h e r e s ;
im m u n o m a g n e t i c s e p e r a t i o n e n z y m e l i n k e d im m u n o s o r b e n t a s s a y ( IM S
一 E L I S A )
免 疫 磁 性 微 球 ( im m u n o m a g n e t i。 m ie r o -
s p h er es
, IMM S )是近年来兴起 的一类新型磁性活
性材料 ,是连有抗体或抗原的磁性微球 ,通过表面的
抗体或抗原特异性地与靶物质结合 ,从而赋予其磁
响应性 , 在特定磁场的作用下 , 这些结合了 IM M S
的细胞和分子可以发生定 向移动 ,从而实现其免疫
收稿 日期 : 2 0 0 4一 0 1一 0 5鑫金项目 : 天津市自然科学重点基金资助项 目 ( 。。3 80 5 3 1 1 ) ,教育部回国留学人员启动基金〔 (2 。。。 ) 4 7 9 号〕作者简介 : 曹 宇 ( 1 9 7 7一 ) ,男 , 辽宁铁岭人 ,硕士研究生 , 主要从事免疫磁性微球 的研究 。
, 通讯作者 T e l : ( 0 2 2 ) 2 3 5 0 8 3 1 8 E一 m a i l : g a n g b a i@ e y o u . e o m
·
1 1 1 0
· 中草药 Chine se Ta r di tin a oln a H de r ba lr Dugs 第3 5 卷第1 0期2 0 04 年1 0月
0
0凡
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1
八曰
4 26 0
目公 .侧来督
学检测等方面的目的1 j [。 免疫磁性捕获 EL ISA 技术
(i m mun oma gne tie e s Pa ra ti one nz yme lin ke d
i m mn u o
一s or be n tas s a y
,
IM S
一
E L I S A ) 将 IM M S 的
捕获 技术 与 E L IS A 检测 技 术相 结 合 , 对 于常 规
E IL S A 灵敏限以下无法检测到的抗原也可获得较
高的检出率 , 因此 日益受到人们的关注 。 目前 , IM S -
E IL S A 已应用于病原微生物 2[, 3〕、 细胞 4j[ 、 蛋 白质圈
的检测 。 本实验以甘草为例 , 采用种子聚合法制备粒
径在 5 0一 1 0 产m 的聚苯 乙烯磁性微球 ,并 以兔抗
甘草蛋白 Ig G 抗体致敏 ,制备出检测甘草特异性蛋
白的免疫磁性微球 ,进一步结合酶标抗体建立免疫
学分析方法用于甘草成分的检测 , 为中药及其部分
制剂的分析鉴定开辟了一条简便快速的途径 。
1 仪器与材料
酶标 仪 ( B IO T E C H , E L X 8 0 0 ) ; 9 6 孔 酶 标板
( CO S T A R
, 美 国 ) ;漩 涡混合器 、 ZW一 A 型微量 振
荡器 、 电子分析天平 、 磁力搅拌器 、 电动搅拌器均为
国产仪器 。 活化生物素 ( s u l f o 一N H S 一L C 一B io t i n E Z -
L i n k
T M , P I E R C E ) ; 3
, 3 ` , 5 , 5气四 甲 基 联 苯 胺
( T M B ) ;辣根过氧化物酶 ( H R P )标记亲和素 ; 牛血
清 白蛋 白 (BS A )购 自颧洋生物制品公司 , 其他试剂
均为分析纯 。
内蒙 、 赤峰 和东北产乌 拉尔甘草 G ly cy r hr iz a
“ ar le 。 站 iF sc .h 由天津市药品检验所提供 ;参荃 白
术丸 、止嗽青果丸 、 香连化滞丸均为市售中成药 。
2 方法与结果
2
.
1 特异性抗体的制备及标记 : A n it 一 R G P 抗体及
生物素标记 A n it 一 R G P 抗体按文献 6j[ 方法制备 。
2
.
2 生物素亲和素一 E L sI A ( B A S 一 E L IS A ) 夹心法
检测甘草蛋白 : 按照文献 6j[ 方法进行 。 分别取 内蒙 、
赤峰和东北产甘草粉末 , 超声波提取法制备生药抗
原提取液 , 配成 1 m g /m L 的混悬液 ;另取参等 白术
丸 、 止嗽青果丸 、 香连化滞 丸 , 剥去糖衣 ,用乳钵研
碎 , 分别配成 1 0 m g /m L 的混悬液 , 作为测试用抗
原溶液 。 将上述抗原溶液经 P B S 稀释后 ,采用 B A S -
E L IS A 法对其中的甘草蛋白成分进行检测 。 结果见
图 1 , 以甘草蛋白为标准对照 , 分别测得 3 种甘草 中
甘草蛋 白的量依次为 25 、 30 、 20 m g / g ; 3 种 中成药
中甘草蛋白的量依次为 4 · 4 、 6 · 5 、 4 5 . 0 拼g / g 。
2
.
3 IM M S 的制备 : 采用种子 聚合法制备川 。 取
F e C 1
2 · 4 H
Z
O 6 9 溶于 4 0 0 m L 3 7 · 5%聚乙 二醇溶
液 中 , 加人 N a O H 溶液至 p H 1 1 , 6 0 ℃反应 4 h ,形
成棕黑色磁流体悬浮液 。 取上述磁流体 1 9 , 于 60 %
乙醇溶液中 ,依次加人 36 m L 苯乙烯 , 0 . 3 m L 二乙
3 2 尸 4
众 O含` 拍闷曰笋乙从~一一一曰 , ` 祥乙 , 一一
0
.
X() 1 0
t
0 1 0
.
1 1 10 1X() 1《 XK! 10 《X旧 1的田们
质量浓度 / (。 .g mL
一
l)
1
一甘 草蛋 白标准 品 2一赤峰产甘草 3一内蒙产甘草 4一东
北产甘草 5一香连化滞丸 6一止嗽青果 丸 7一参等白术丸
1一 R G P s t a n d a r d P r o d u e t Z
一
G
. “ ar l e” s f s f r o m C h i fe n g
3
一
G
.
u ar 如 5 15 f r o m I n n e r M o gn ol ia 4一 G . u ar le n s i s f r o m
N o r t h e s t o f Ch i n a s
一
X i a n g l i a n H u a z h i P i ll 6
一
Zh i s o u
Q i n g g u o p i l l 7
一
S h e n l in g aB i
z h u p i l l
圈 1 B A S一 E L I S A检测甘草 蛋白
F i g
·
1 A n a l y s i s o f R G P b y B A S
一
E L I SA
烯基苯和 6 9 过氧化苯甲酞 ,在氮气保护下 “ ℃反
应 10 h ,筛分后得到 50 ~ 10 0 拌m 的聚苯乙烯磁性
微球 (图 2 ) ,收率大于 “ % 。
圈 2 聚苯 乙烯免疫磁性徽球的扫描电锐照片 ( 火 , o
倍 ) ( A )和光镜照片 ( X 3 0 0倍 ) ( B )
F i g
,
2 P h o t o g r a P加 by s e a n iu n g e l e e t r os co 碑 ( X 70 )
( A ) a n d o p t ic a l m ic r o s c o pe ( X 30 ) ( B )
o f OP l y s t y r e ne m ag ue it e m 让 r os Ph e r es
2
.
4 IM M S 的致敏 : 取 2 m L 聚苯乙烯磁性微球 ,
加人 5 m g /m L A n t i一 R G P Ig G 抗体溶液 2 m L ,于 4
℃放置 4 h ,包被微球 ,通过 L o w yr 法考察致敏前后
溶液中的抗体的质量浓度 , 并推算聚苯 乙烯磁性微
球的抗体吸附量为 0 . 6 m g /m L 。 用 P B S 反复清洗 3
次 , 经 1% B S A 封闭后 , 制成抗体致敏的免疫磁性
微球 , 4 C保存备用 。
2
.
5 IM S
一
E IL S A
: 分别取阴性对照 (空 白溶液 )及
待测样 品溶液 l m L 于 1 . s m L 离心管中 , 加人 15
拜L 抗体致敏的免疫磁性微球 , 37 ℃振荡反应 l h 。
以 磁铁 的磁场聚集 固定 微球 , 弃去反应液 , 用 P B S
反复清洗 3 次 。 加人 1 0 倍稀释的生物素标记 A nt i -
R e P Ig G 抗体 一m L , 3 7 ℃振荡反应 l h 。 清洗后再
加人 2 0 0 倍稀释的 H R P 标记亲和素 1 m L , 室温
中草药 C h in e s e T r a d i t io n a l a n d H e r b a l D r u g s 第 3 5卷第 1 0期 2 0 0 4年 1 0月 · 1 1 1 1 ·
反应 03 m ni 。 清洗后 加人新 配制 的 T M B 底物 1
m L
,反应 s m i n , 加人 l m o l / L H ZS O ; 终止反应 , 观
察颜色变化 ,并于 45 0 n m 处测定其吸光度 。
以致敏的 IM M S 为固相载体 ,分别加人 0 . 01 、
o
·
0 5
、
0
·
1
、
0
·
5
、
l
·
o 拜g /m L 甘 草 蛋 白抗 原 , 依 据
IM S
一
E L I S A 法考察检测限 ,每个质量浓度重复考察
3 次 , 结果取平 均值 , 见 图 3 。 与 阴性 对照相 比其
P /N值分别为 2 . 0 、 6 . 0 、 9 . 9 、 3 2 . 0 、 4 1 . 9 。 因此 , IM S -
E L I S A 法 检测甘 草蛋 白抗 原 的最低 检测 限为 10
n g /m L ( P / N = 2 )
。
分别取 1 0 拼g / m L 内蒙 、 赤峰和东北产甘草测
试用抗原溶液 , 1 0 m g / m L 参等 白术丸 、 香连化滞
丸 、 止 嗽 青 果 丸测 试 用抗 原 混 悬 液 , 采 用 IM S -
E L IS A 法对其中甘草蛋白抗原进行检测 , 每个样品
重复测定 3 次 ,结果取平均值 ,见图 3 。 结果表明 , 采
用 B A S 一 E L IS A 法和 IM S 一E L IS A 法对药材和中成
药丸剂中甘草蛋白的检测结果完全一致 ,均可检出
微量甘草蛋 白的存在 。 特异性 分析也表 明 , A nt i -
R G P 抗体有 良好的特异性 , 同甘草以外的其他生药
没有交叉反应 6j[ 。 因此 , IM S 一E IL S A 检测法用于中
药材及其制剂的分析可行 ,其检测结果准确可靠 。
10 11 12
方面进行中药材鉴别 , 为生药品种鉴定和质量控制
提供一种新方法 6[, ’ , }。〕 。
作为近年来国内外新兴 的一种免疫学技术 , 免
疫磁性微球以其灵敏度高 、检测速度快 、特异性高及
重复性好等优点开始在病原生物和生物大分子抗原
检测中广泛地应用 。 本研究采用种子聚合法制备聚
苯乙烯磁性微球 , 并以兔抗甘草蛋白 Ig G 致敏制备
出甘草蛋白检测用的免疫磁性微球 。 利用 IMM S 可
以从复杂的中药混悬液中直接特异性地捕获和浓集
甘草蛋白 , 通过生物素标记甘草蛋白抗体 , 并结合酶
标亲和素建 立 IM S 一 E L IS A 方法 , 用于甘草药材及
其部分制剂 中甘草蛋 白抗原 的检测 ,其灵敏度可达
1 0 n g /m L
。
另外 , 本实验曾尝试对复方甘草片 、 银翘解毒片
和桑菊感冒片进行检测 ,未检测出甘草蛋白抗原 。其
原因可能由于醇提取使蛋 白质类抗原的构型发生改
变 ,导致 A n it 一 R G P 抗体不予识别 , 故该方法更适合
水提中药制剂和生药材样品的分析和鉴定 。
IM S
一
E IL S A 检测法只需借助一块磁铁及相应
的试剂即可在 3 h 内对药品进行检测 , 因此与传统
的检测技术相比 ,该方法不仅检测灵敏度高 , 特异性
强 , 而且操作简单 , 不需要借助仪器设备 , 可以在短
时间内对大量的药品进行现场检测 ,便于普及推广 ,
是一种实用 的中药分析新方法 。
R e f e r e n e e s
:
〔l 〕 U g e l s t a d J , oS d e r b e r g L , Be r g e A , e t a l · M o n o d i s p e r s e
p o ly m e r p a r t i e l e s 一 a : t e p f o r w a r d f o r c h r o m a t o g r a p h y [ J」.
N a t u er
,
1 9 8 3
, 3 0 3 : 9 5
一 9 8
.
仁2〕 Y a dz a n k h a h S P , H e l l e m a n n A L , R o n n i n g e n K , e t a l ·
R a p id a n d s e n s i t i v e d e t e e t i o n o f S t aP 勺 loc ` u s s p e e i e s i n m i [k
b y E L IS A b a
s e d o n m o n o d i s p e r s e m a g n e t i e 邵 r t i e l e s 【J〕. V `之
材乞。 刀占滋ol , 19 9 8 , 6 2 : 1 7一 2 6 .
[ 3〕 N ib b e l in g H A M , v a n E t t e n L , F i l l ie Y E , e t a l · E n h a n e e d
d e t e e t i o n o f S e h i s t o s o m a e i r e u l a t i n g a n t ig e n s b y t e s t i n g 1 m L
u r i n e s a m p l e s u s i n g i m m u n o m a g n e t i c b e a d s 〔J〕. A c t a T r O P ,
1 9 9 7
,
6 6 ( 2 )
:
85
一 92
.
[ 4〕 L i Y R , w u J M , Z o u p . Is o la t i o n o f e o s i n o p h i l s f r o m
p e r ip h e r a l b l o o d b y t h e n e g a t i v e s e le e t i o n p r o e e d u r e o f
m a g n e t i e a e t i v a t e d e e l l s o r t i n g [ J〕. C h i , J I m m u n o l (中国免
疫学杂志 ) , 2 0 0 0 , 16 ( 8 ) : 4 2 3一 4 2 7 ·
〔5〕 M u ll e r 一 s e h u l t e D , B r u n n e r H . N o v e l m a g n e t i e m i e r o s p h e r e s
o n t h e b a s i s o f p o l y ( v i n y l a le o h o l ) a s a f f in i t y m e d i u m fo r
q u a n t云t a t ive d e t e e t i o n o f 9 1界 a t ed h a e m o g l o b in 「J」· J
C h
~
a t og
r A
, 19 9 5
,
7 1 1 ( 1 )
: 5 3
一
6 0
·
仁6〕 B a i G , C a o X L , Y a n g W B , e t a l . T h e s t u d y o f
im m u n o a
s s a y m e t h o d f o r R a d i x G I夕卿 r hr f z a e id e n t i f i e a t i o n
〔J〕. C人i n T ar d i t 万 e r 占刀八才g : ( 中草药 ) , 2 0 0 3 , 3 5 ( i ) : 5 3 -
8 6
.
〔7 〕 Q i u e M . s t u d i e s o n m a g n e t i e p o l y s t y r e n e m i e r o s p h e r e s :
e o p o ly m e r i z a t i o n a n d e h a r a e t e r i z a t i o n o f a e or le i n a n d s t y r e n e
[ J〕. C h i n J C o l lo id p o ly 阴 e r (胶体与聚合物 ) , 1 9 9 9 , 1 7 ( 4 ) :
1
一 4
.
0000
昌辱丫侧呆彭
样品
1
一阴性对照 2一。 . 01 件g /m L 甘草蛋 白 3一 0 . 05 卜g /m L
甘草蛋白 4一 0 . 1 拜g /m L 甘草蛋 白 5一 0 . 5 林g / m L 甘草蛋 白
6
一 .1 0 拜g / m L 甘草蛋白 7一内蒙产甘草 8一赤峰产甘草 9一东
北产甘草 1压参等白术丸 1 1一止嗽青果丸 12 一香连化滞丸
1
一 n e g a t i v e s a m p l e Z
一 o
·
0 1 拜g /m L R G P s t a n d a r d p r o d u e t
3
一 0
·
0 5 尸g /m L R G P 4 一o , l 群g /m L R G P S一 0 · 5 滩 / m L R G p
6一 l
·
0 “ g /m L R G P 7 一G · u ar l e n s i s f r o m In n e r M o n g o l i a
8
一
G
.
u r a l亡 n s i s f r o m C h i f e n g g一G
.
u ar l e n s i s f r o m N o r t h e a s t
o f C h in a 1 0
一
S h e n l in g aB i
z h u P il l 1 1
一
Z h i s o u Q i
n g g u o P i ll
1 2
一
X i a n g li a n H u a z h i P i l l
图 3 免疫磁性捕获 一E L sI A 检测甘草蛋 白
F ig
·
3 A n a l y s i s o f R G P b y IM S
一
E L I S A
3 讨论
现代免疫学检测技术作为蛋 白质和小分子药物
等的检测手段之一 , 已经开始应用在传统的中药鉴
定领域 , 并在中药成分的分析鉴定上具有十分重要
的价值川 。 本研究选用甘草为实验对象 ,利用甘草种
属特异性蛋 白建立一种免疫学鉴定方法 ,从蛋 白质
·
1 1 1 2
.中草药 C h i n s e eT a rdi ti on al an dH e rbal D rug s第 3 5卷第 10期 0 0 2 4年 0 1月
仁 8〕
〔 9〕
Y u anJR
,
Y u a n H
·
T h e s t u d i e s o f q u a l i t y e o n t r o l m e t h o d s
f o r t r a d i t i o n a l C h i n e s e m e d i e i n e s [ J〕. hC i n P h a mr J ( 中国药
学杂志 ) , 2 0 0 1 , 3 6 ( 8 ) : 56 6一 5 6 9 .
B a i G
,
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〔J〕 . B IOI P h a 厂m B u l l , 1 9 9 7 , 2 0 ( 12 ) : 1 2 24 一 12 2 8 .
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(南开大学学报 ) , 2 0 0 2 , 3 5 ( 3 ) : 8 7一 9 0 ·
nI 型山东药圣 1 + 1 澄清剂用于抗流感滴鼻剂的澄清工艺
张会 宗 , 潘明云 , 张若石 ,李大明
(辽宁省中医研究院 ,辽宁 沈阳 1 1 0 0 3 4)
摘 要 : 目的 考察抗流感滴鼻剂的絮凝除杂工艺条件 。 方法 以澄清效果为指标 ,对影响 l 型山东药圣 1+ 1 澄
清剂絮凝除杂的 5 种因素进行了考察 。 以桅子昔量为定量考察指标 , 木兰脂素 、 桅子昔的 T L C 检识为表观考察指
标 ,对 l 型 山东药圣 1 + 1 澄清剂絮凝 、 50 % 乙醉醇沉 、 75 % 乙醇醇沉除杂情况进行对比 ,确定最佳的除杂工艺条
件 。 结果 采用优化后的絮凝除杂工艺条件 , 絮凝组中桅子昔含量明显高于 50 % 、 75 %乙醇醇沉组 ; T L C 显示 ,絮
凝除杂组与原液组斑点基本一致 。 结论 且型山东药圣 1+ 1澄清剂在抗流感滴鼻剂的除杂工艺中 ,具有活性成分
保留率高 ,操作简便 ,成本低廉 , 工艺稳定等优点 ,是较理想的除杂方法之一 。
关键词 :抗流感滴鼻剂 ; 班型山东药圣 1 + 1 澄清剂 ;桅子昔 ;木兰脂素 ;高效液相色谱 ;薄层色谱
中图分类号 : R 2 8 G . 0 2 文献标识码 : B 文章编号 : 0 2 5 3 一 2 6 7 0 ( 2 0 0 4 ) 1 0 一 1 1 1 2 一 0 4
A p p l i c a t i o n o f S h a n d o n g Y a o s h e n g l + 1 ( nI ) c l a r i f i c a n t in c l a r i f y in g P r o c e s s
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K e y w o r d s : A n t i
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f l u N o s e D r o p s ( A N D ) ; S h a n d o n g Y a o s h e n g l + 1 ( l ) e l a r i f ie a n t ; g a r d e n o s id e ;
m a g n o l i n ; H P L C ; T L C
自 2 0 世纪 50 年代末有机高分子絮凝剂制成以
来川 ,吸附澄清技术逐渐应用于食品 、 医药领域 。 特
别在中药除杂方面 ,絮凝剂通过架桥吸附 ,选择性地
去除杂质 ,克服醇沉脱水因物质的溶解度改变而造
成活性成分遗失 ,客观上与中医的整体观 、 中药多靶
点发挥作用的内在机制相吻合 。 抗流感滴鼻剂 由白
芷 、 辛夷等 4 味中药组成 , 具有辛凉解表 、 疏散风热
之功效 , 临床用于风热证流感 。辛夷挥发油有抗组胺
样作用川 , 白芷中香豆素类有治疗头痛作用阁 。 该制
剂的提取工艺为提取挥发油后 ,对药渣进行水煎 ,因
此水煎液的除杂问题成为直接影响制剂澄清度和药
物稳定性的关键问题之一 。 为了寻求最佳除杂工艺
收稿 日期 : 20 0 3一 1 2一 2 5
基金项 目 : 辽宁省科技厅资助项 目 (。 0 2 2 6。。 3 )作者简介 : 张会宗 ( 19 7 1一 ) ,男 ,助理研究员 , 辽宁省凌源市人 , 现在攻读辽宁中医学院生药学硕士学位 , 主要从事中药新制剂的研制开发工作 。 T e l : ( 0 2 4 ) s 6 l l o o 2 7 E 一m a i l : h z ` h a n g l z y k@ v ip . s i n a . e o m