全 文 ：acau lis [J ]1 P hy tochem istry , 1986, 25 (6) : 1411214311
[ 6 ]　Bo rgh i D , Baum er L , Ballab io M , et a l1 Structu re elucida2
t ion of helio scop ino lides D and E from E up horbia ca lyp tra ta
cell cu ltu res [J ]1 J N a t P rod , 1991, 54 (6) : 1503215081
[ 7 ]　J ia Z, D ing Y L 1 N ew diterpeno ids from E up horbia
siebold iana [J ]1 P lan ta M ed , 1991, 57, 56925711 [ 8 ]　L al A R , Cam bie R C, Rutledge P S, et a l1 E nt2atisanediterpenes from E up horbia f id j iana [J ]1 P hy tochem istry ,1990, 29 (6) : 1925219351[ 9 ]　A ppendino G, Bello ro E, T ron G C, et a l1 Po lycyclic fromE up horbia characias [J ]1 F itoterap ia , 2000, 71 ( 2 ) : 13421421
两种毛大丁草多糖 Gbp 和 Gcp 的组成研究
佘志刚1, 唐小江2, 郭志勇1, 陈东淼1, 林永成1Ξ
(11 中山大学化学与化学工程学院, 广东 广州　510275; 　21 广东省职业病防治院 毒理科, 广东 广州　510300)
摘　要: 目的　从毛大丁草的根中分离提取多糖, 测定其组成。方法　毛大丁草根的水提物经脱蛋白、脱色、乙醇沉
淀得两种粗多糖, 再经过 Sephadex G275 和 Sephadex G250 凝胶柱色谱纯化得到两种纯多糖 Gbp 和 Gcp , 用高效凝
胶色谱 (H PGPC)测定Gbp 和 Gcp 相对分子质量, 通过完全酸水解后, 进行三甲基硅醚化的 GC2M S 分析, 测定两种
多糖的组成。结果　Gbp 和 Gcp 重均相对分子质量分别为 6165×105 和 7145×104。Gbp 是由木糖、来苏糖、鼠李
糖、核糖、葡萄糖和半乳糖组成, 其比例约为 3∶3∶3∶2∶6∶2; Gcp 主要由果糖组成, 还有少量葡萄糖和木糖, 其
比例为 24∶4∶1。结论　通过凝胶柱色谱分析, 所提取两种多糖 Gbp 和 Gcp 均为单一、纯净的多糖。
关键词: 毛大丁草; 多糖; 三甲基硅醚化反应
中图分类号: R 28411　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253 2670 (2004) 06 0614 03
Study on com posit ion of two polysacchar ides Gbp and Gcp
from root of Gerbera p iloselloides
SH E Zh i2gang1, TAN G X iao2jiang2, GUO Zh i2yong1, CH EN Dong2m iao 1, L IN Yong2cheng1
(11 Schoo l of Chem isty and Chem ical Engineering, Sun Yat2sen U niversity, Guangzhou 510275, Ch ina; 21 D epartm ent of
Toxico logy, Guangdong P rovincia l Cen ter fo r O ccupational D isease P reven tion and T reatm ent, Guangzhou 510300, Ch ina)
Abstract: Object　To study the compo sit ion of tw o po lysaccharides Gbp and Gcp w h ich w ere iso la ted
and pu rif ied from Gerbera p iloselloid es (L. ) Cass1M ethods　T he po lysaccharides w ere ex tracted w ith ho t
w ater and p recip ita ted by alcoho l1 P ro tein in the p recip ita tes w as removed by Sevag m ethod1 T he p roducts
w ere fu rther pu rif ied w ith co lum n ch rom atography on Sephadex275 and Sephadex2501 T he mo lecu lar
w eigh ts of Gbp and Gcp w ere m easu red by H PGPC1 T heir compo sit ion s w ere studied by u sing GC2M S af2
ter acid hydro lysis and trim ethylsilyla t ion1 Results　T he w eigh t2average mo lecu lar w eigh ts of Gbp and
Gcp are 6165×105 and 7145×104 respect ively (w ith po lyoxyethylene glyco l as a reference) 1 Gbp is con sist2
ed of lyxo se, xylo se, rob ito se, g luco se, and galacto se, the ra te is 3∶3∶3∶2∶6∶21 Gcp is compo sed of
fructo se, g luco se, and xylo se (24∶4∶1) 1 Conclusion　Gbp and Gcp are show n to be homogeneou s by gel
perm eat ion ch rom atograhy1
Key words: Gerbera p iloselloid es (L 1) Cass1; po lysaccharide; t rim ethylsilyla t ion
　　多糖是一类重要的生命大分子物质, 在生物体
内有重要的生物功能和良好的生物活性, 在生命科
学和医药科学中有广泛的应用, 因而多糖成为具有
吸引力的研究领域[1 ]。我们从鲍鱼和海洋微生物的
菌体中分离出多种有生物活性的多糖, 并对其组成、
结构和药理活性进行了研究[2, 3 ]。近来又从中药毛大
丁草的根部分离出两种多糖 Gbp 和 Gcp , 药理实验
显示这两种多糖是良好的免疫调节作用。毛大丁草
·416· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
Ξ 收稿日期: 2003210219
基金项目: 广东省中医药局科研资助项目 (101028)3 通讯作者　E2m ail: ceslyc@zsu1edu1cn
Gerbera p iloselloid es (L 1) Cass1 是一种传统的中
药, 具有清热解毒, 理气和中的功效, 临床常用作镇
咳、祛痰、平喘[4 ]。我们对毛大丁草的化学成分及药
理活性进行了研究, 其脂溶性成分及药理活性另文
报道, 本文将报道两种多糖的分离纯化方法及组成
分析结果。
1　实验部分
111　仪器和试剂: 美国 F inn igan 公司V ayager GC2
M S 气相色谱质谱联用仪,W aters- 991- GPC 高效
凝胶色谱仪, 上海沪西分析仪器厂HL - 2 恒流泵, 上
海青浦沪西仪器厂BXZ- 100 自动部分收集仪。毛大
丁草采自罗霄山脉禾山段, 经中山大学生命科学院植
物系张宏达教授鉴定; 氯化三甲基硅烷六甲基二硅氨
烷,M erck 公司产品; Sephadex G50, G75, Sigm a 公
司产品, 其余试剂均为国产分析纯试剂。
112　提取和分离: 将毛大丁草去叶和茎, 根部粉碎,
用水提取, 减压浓缩, 用 3 倍体积 95% 乙醇沉淀, 4
℃放置过夜, 离心, 将沉淀加水溶解, 多次用 Sevag
法除蛋白后, 调 pH 9～ 10, 加 1ö10 倍 30% H 2O 2, 脱
色, 用自来水透析, 浓缩, 加 1 倍乙醇沉淀, 4 ℃放置
过夜, 离心, 分别用乙醇、丙酮和乙醚洗涤沉淀, 真空
干燥, 得粗毛大丁草多糖 Gb; 其上清液加乙醇至
75% (体积比) , 冷置过夜, 离心, 脱水, 干燥得另一种
多糖粗品 Gc。
113　两种毛大丁草多糖的纯化: 取 Gb 和 Gc 各 50
m g, 分别溶于适量的水, 过 Sephadex 凝胶柱, Gb 进
行 Sephadex G75 柱色谱, Gc 用 Sephadex G50 进行
柱色谱, 用恒流泵调节流速, 自动部分收集仪收集,
20 m in 一管, 5 mL ö管, 硫酸苯酚法检验, 收集单一
峰部分, 冷冻干燥得两种纯多糖 Gbp 和 Gcp。
114　相对分子质量测定: 选用W aters U ltrahydro2
gel 250 凝胶柱, 配制样品浓度 011% , 用 011 mo löL
N aC l 作洗脱剂, 恒流速度 110 mL öm in, 进样量:
1010 ΛL ,W aters 410 示差检测。进行 GPC 分析。
115　多糖的酸水解: 分别取两种多糖 Gbp 和 Gcp
各 10 m g 加入 2 mo löL 三氟乙酸 5 mL , 封管, 120
℃反应 6 h, 反应结束, 用氮气流吹干, 用 P 2O 5 干燥。
116　三甲基硅醚衍生化: 将已知单糖和干燥的多糖
酸水解产物, 分别注入 1 mL 无水吡啶, 待完全溶解
后, 再注入 014 mL 六甲基二硅氨烷和 012 mL 氯化
三甲基硅烷, 摇匀, 室温放置 015 h, 加水后, 用氯仿
萃取, 蒸去大部分氯仿后, 用作 GC2M S 分析。
117　三甲基硅醚衍生物的 GC2M S 分析: 分别取三
甲基硅醚衍生物的上清液 1～ 5 ΛL 进样, GC 条件:
SE254 石英毛细管柱 (30 m ×0125 mm ) , 进样口温
度 270 ℃, 程序升温 150 ℃, 保持 1 m in, 以 10 ℃ö
m in 升温至 230 ℃, 保持 4 m in。M S 条件: 接口 230
℃, 离子源 E I+ , Energer: 70 eV , 检测器电压: 280
eV , 质谱扫描 43100～ 650100。进行 GC2M S 分析。
2　结果与讨论
211　多糖的分离提取: 毛大丁草的水提物中, 除多
糖外, 还含有蛋白质、肽、多酚类物质、苷类及小分子
水溶性物质 (氨基酸、单糖等) , 溶液呈红棕色, 经脱
蛋白、脱色、水透析、乙醇分级沉淀后可以除去这些
杂质。用 Sevag 法除蛋白时, 要经过多次才能除尽。
H 2O 2 脱色须在碱性条件进行, 在此条件下, H 2O 2 不
易分解, 且有较强的氧化能力, 还可以防止多糖的降
解 (酸性条件下, 多糖易水解) , H 2O 2 把多酚类有色
物氧化成无色的酸性化合物时, 溶液的 pH 值会降
低, 因此, 每隔一段时间, 须用碱调溶液的酸碱性。
212　多糖的纯化及相对分子质量测定: 多糖的纯化
是测定多糖组成和结构的关键。我们采用不同型号
的葡聚糖凝胶对用乙醇粗分的两种多糖 Gb 和 Gc
进行纯化, 用 Sephadex G75 纯化 50% 乙醇沉淀 Gb
得 Gbp , Gbp 的水溶性较差; 用 Sephadex G50 纯化
75% 乙醇沉淀 Gc 得 Gcp , Gcp 在水中有较好的溶解
性。以聚乙二醇为标准, 通过高效凝胶色谱
(H PGPC)测定相对分子质量, Gbp 的重均相对分子
质量M W = 6165×105, 离散度 D = 1144; Gcp 的
M W = 7145×104,D = 1121。
213　多糖的组成测定: 多糖的完全酸水解时, 过去
常使用不同浓度的盐酸、硫酸等, 文献报道[5 ]这些酸
能使水解后的单糖发生部分降解, 目前多使用三氟
乙酸, 该方法能减少对单糖的降解, 而且反应完后,
多余的三氟乙酸易除去, 用氮气吹干即可。
单糖组成的测定有多种方法, 三甲基硅醚化是
最简单的测定单糖的组成方法之一, 该方法操作简
便, 衍生物易于气化, 但是每种糖会出现多峰现象,
这是由于单糖三甲基硅衍生物的异构体造成的, 这
种多峰现象并不影响单糖组成确定。两种多糖完全
酸水解后的三甲基硅醚衍生物进行 GC2M S 分析,
用已知单糖作标准, GC2M S 分析结果见表 1。从表
中可以看出, 每种单糖有 1～ 5 个峰, 除 Α2、Β2; 吡喃
型、呋喃型外, 还有链状结构的衍生物。分析结果表
明Gbp 是由木糖、来苏糖、鼠李糖、核糖、葡萄糖和
半乳糖组成, 其比例约为 3∶3∶3∶2∶6∶2; Gcp
主要由果糖组成, 还有少量葡萄糖和木糖, 其比例为
24∶4∶1。
·516·中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
表 1　Gbp 和 Gcp 完全酸水解后三甲基硅醚
衍生物的 GC-M S 分析结果
Table 1　GC-M S results of tr imethylsilyl ether der ivatives
of ac id hydrolysis for Gbp and Gcp
多糖 保留时间öm in 单　糖 峰面积ö%
Gbp 　　　5129 木　糖
7159 木　糖
9134 木　糖 　　 16132
9178 木　糖
5173 来苏糖
6177 来苏糖 13147
10103 来苏糖
11138 来苏糖
5145 鼠李糖
7188 鼠李糖 15169
8128 鼠李糖
5163 核　糖
8153 核　糖 11161
10151 核　糖
10184 核　糖
8142 葡萄糖
9118 葡萄糖 32149
10133 葡萄糖
9194 半乳糖 1140
Gcp 6118 果　糖
6123 果　糖 82114
6127 果　糖
6142 果　糖
6168 木　糖
6177 木　糖 3134
7103 木　糖
7111 葡萄糖 14153
7183 葡萄糖
　　从 GC2M S 分析结果看, 在相同水溶液中, 用不
同浓度的乙醇分级沉淀, 经纯化得到的两种多糖
Gbp 和 Gcp , 不仅只是相对分子质量和溶解度的差
别, 它们的组成完全不同, Gbp 中戊糖约占 58% , 而
Gcp 主要以己酮糖2果糖为主。
References:
[ 1 ]　H urtley S, Service R , Szurom i P1 C inderella’s coach is ready
[J ]1 S cience, 2001, 291: 2373223761
[ 2 ]　She Z G, H u G P, W u Y W , et a l1 Study on the m ethano ly2
sis of the su lphated po lysaccharide H al2A from H aliotis d i2
verisicolor Reeve [J ]1 Ch in J O rg Chem (有机化学) , 2002,
2 (5) : 36723701
[ 3 ]　She Z G, H u G P, W u Y W , et a l1 T he study on the
m ethano lysis of the po lysaccharide from the m arine m angrove
fungus (strain # 1356) from the Sou th Ch ina Sea [J ]1 J S un
Y a t2sen U n iv - N at S ci (中山大学学报·自然科学版) ,
2001, 40 (6) : 12321241
[ 4 ]　T ang X J , Zhang R , H uang H R , et a l1 A nalysis and com 2
parison of the essen tial o il from the leaves, caudexes and
roo ts of Gerbera p iloselloid es (L 1) Cass. [J ]1 J S un Y a t2sen
U n iv - N at S ci (中山大学学报·自然科学版) , 2003, 42
(2) : 12421251
[ 5 ]　Zanetta J P, T imm erm an P, L eroy Y1 D eterm inaton of con2
stituen ts of su lphated p roo teoglycan during a m ethano lysis
p rocedure and gas ch rom atographöm ass spectrom etry of hep2
tafluo roburate derivatives [J ]1 G ly coconjug a te J , 1999, 16:
6171
川明参须根中的化学成分
李帮经, 彭树林, 梁　健, 丁立生Ξ
(中国科学院成都生物研究所, 四川 成都　610041)
　　川明参 Chuanm inshen v iolaceum Sheh et Shan
属于伞形科川明参属, 是我国特有的单种属植物, 主
要分布在四川, 多为栽培[1 ]。其根作为滋补用药, 具
有润肺化痰、和胃生津和解毒的功效, 在民间常常用
作滋补药材[2 ]。饶高雄、周燕等曾经对不同产地、不
同部位的川明参化学成分进行过研究, 得到多为香
豆素和黄酮类化合物[2～ 4 ]。川明参须根在市场上也
作为滋补品出售, 且价格较低。为了进一步探索川明
参的活性成分, 为综合开发利用这一特有资源提供
依据, 我们对川明参须根的化学成分进行研究, 从其
乙醇提取物中分离鉴定出 10 个化合物。主要成分为
线性呋喃香豆素类化合物, 另外还有黄酮、甾体和三
萜酸, 其中化合物É～ Ì、Ð 和Ñ 为首次从该种植物
中分离得到。川明参须根的化学成分与主根以及茎
叶的化学成分在结构上类似, 但又不完全相同, 应引
起注意。
1　仪器与试剂
熔点用XRC- 1 型显微熔点仪测定 (温度计未
校正) ; ES I2M S 用 F inn igan L CQ DECA 型质谱仪测
定; 1H 2NM R 和13C2NM R 用B ruker A C - 400 型核
磁共振仪测定, TM S 为内标。薄层色谱用硅胶和柱
色谱用硅胶均为青岛海洋化工厂产品。反相硅胶
·616· 中草药　Ch inese T radit ional and H erbal D rugs　第 35 卷第 6 期 2004 年 6 月
Ξ 收稿日期: 2003210216
作者简介: 李帮经 (1973- ) , 男, 在读博士生, 现从事天然药物研究。