全 文 ：高效毛细管电泳法测定决明子及决明子茶中
大黄素和芦荟大黄素的含量
郑文捷1 ,陈兴国2 ,贾 　伟1 ,邱明丰1 ,徐朝晖1 Ξ
(11 上海交通大学药学院 ,上海 　200030 ; 21 兰州大学化学化工学院 ,甘肃 兰州 　730000)
摘 　要 :目的 　建立简单、快速且能同时分离测定决明子及决明子茶中大黄素、芦荟大黄素含量的胶束毛细管电泳
法。方法 　采用高效毛细管电泳法 ,缓冲体系为 1510 mmol/ L 硼砂23010 mmol/ L SDS210 %乙醇 (p H 9160) ,熔融石
英毛细管柱 (50 cm ×75μm) ,分离电压为 20 kV ,检测波长为 254 nm ,温度为 (25 ±013) ℃,进样时间为 5 s。结果
　大黄素、芦荟大黄素在 4～120μg/ mL 、10～200μg/ mL 与峰面积线性关系良好 ,大黄素和芦荟大黄素平均回收率
分别为 9816 %和 10219 %。结论 　该方法简单、快速、准确、重现性好 ,可用于决明子药材及决明子茶的质量控制。
关键词 :决明子 ;决明子茶 ;大黄素 ;芦荟大黄素 ;高效毛细管电泳
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :0253 2670 (2004) 08 0874 03
Determination of emodin and aloe2emodin in Semen Cassiae and its tea preparations
by high eff iciency capillary chromatography
ZHEN G Wen2jie1 , CHEN Xing2guo2 , J IA Wei1 , Q IU Ming2feng1 , XU Zhao2hui1
(11 School of Pharmacy , Shanghai Jiao Tong University , Shanghai 200030 , China ; 21 College of Chemistry
and Chemical Engineering , Lanzhou University , Lanzhou 730000 , China)
Key words : Semen Cassiae ; J uemingzi Tea ; emodin ; aloe2emodin ; high efficiency capillary electrophoresis
　　决明子为豆科决明属植物决明 Cassia obt usif o2
l ia L1 或小决明 C1 tora L1 的成熟种子 ,具有清热
明目、清肝益肾、利水润肠的作用 ,主治风热赤眼、青
盲、头痛、眩晕、肝炎、肝硬化、肝腹水以及习惯性便
秘等。药理研究表明决明子具有较好的降压、调血
脂、抑菌、泻下等功效 ,并具有增强机体免疫力、抗衰
老等多方面的作用[1 ] 。大黄素、芦荟大黄素为决明
子中的主要活性蒽醌成分。高效毛细管电泳
( HPCE)是一种先进的新型分离分析技术 ,具有分
析效率高、分析速度快、样品用量小、运行费用低、溶
剂消耗小、对环境几乎无污染等突出优点 ,对许多植
物药中有效成分 (如黄酮、生物碱、酚酸、奎宁、香豆
素等)的分析十分有效[2 ] 。本实验采用硼砂作为缓
冲液 ,对大黄素、芦荟大黄素的毛细管电泳迁移行为
进行了研究 ,考察了酸度、缓冲液浓度、SDS 浓度、有
机添加物浓度、电压等因素对待测物质分离的影响 ,
并且建立了同时分离测定决明子药材及决明子茶中
大黄素、芦荟大黄素的胶束电动毛细管色谱
(MEKC)方法。结果表明 ,该方法简便、快速、准确、
重现性好。
1 　仪器与试药
Waters Quanta 4000 型电泳仪 ( Water 公司 ,美
国) ,使用 Maxima 820 Chromatograph Workstation
进行数据采集 ;弹性石英毛细管柱 (河北永年光导纤
维厂) ; PHS —10A 型酸度计 (萧山市科学仪器厂) 。
大黄素、芦荟大黄素对照品与决明子药材购于
中国药品生物制品检定所 ,宁夏决明子茶 (宁夏宁安
宝土特产有限公司生产) 、兰州决明子茶 (兰州江源
制药厂生产) 、速溶决明子茶 (宁夏伊斯兰金马食疗
食养研究所生产)均购于兰州大药房 ,所用化学试剂
均为分析纯 ,实验用水均为蒸馏水。
2 　方法与结果
211 　电泳条件 :熔融石英毛细管柱 (5010 cm ×75
μm ,有效长度为 4214 cm) ;缓冲体系 :1510 mmol/ L
硼砂23010 mmol/ L SDS210 %乙醇 (p H 9160) ;分离
电压 :20 kV ;检测波长 :254 nm ;温度 : (2510 ±013)
℃;进样时间 510 s。
毛细管第一次使用前依次用 110 mol/ L HCl 冲
洗 5 min、蒸馏水冲洗 3 min、011 mol/ L NaOH 冲洗
10 min、蒸馏水冲洗 3 min、缓冲溶液冲洗 10 min。
两次运行之间毛细管依次用蒸馏水冲洗 1 min、011
mol/ L NaOH 冲洗 2 min、蒸馏水冲洗 1 min、缓冲溶
液冲洗 2 min。为了保证重现性 ,缓冲溶液每运行 3
次后要进行更新。
·478· 中草药 　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 35 卷第 8 期 2004 年 8 月
Ξ 收稿日期 :2003211213
212 　对照品溶液的制备 :精密称定大黄素、芦荟大
黄素对照品适量 ,分别以氯仿2乙醇 (1∶1) 配制成含
大黄素 200μg/ mL ,芦荟大黄素 200μg/ mL 的对照
品储备溶液 ,在冰箱中保存。在使用前 ,按要求稀释
为不同质量浓度的工作溶液。用 012 mol/ L HCl 或
012 mol/ L NaOH 调节 p H 值。
213 　供试品溶液的制备 :将一定量的决明子药材及
冲剂研磨成粉末 ,然后分别准确称取决明子药材、宁
夏决明子茶、兰州决明子茶、速溶决明子茶各 51000
g ,分别以氯仿2乙醇 (1∶1) 做溶剂超声提取 20 min ,
然后滤过挥干 ,重复 3 次。提取物以氯仿2乙醇 (1∶
1)溶解并加至 10 mL 。进样前用 0145μm 滤膜滤
过。
214 　线性关系考察 :取对照品储备溶液稀释成系列
质量浓度的对照品溶液 ,进样。以大黄素、芦荟大黄
素的质量浓度 (μg/ mL)为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,
绘制标准曲线。结果大黄素在 4～120μg/ mL 、芦荟
大黄素在 10～200μg/ mL 与峰面积线性关系良好。
回归方程分别为 :大黄素 : Y = - 1 639 + 278193 X ,
r = 01992 1 ;芦荟大黄素 : Y = - 762175 + 63137 X ,
r = 01997 0。在 3 倍信噪比下 ,两种成分的检测限分
别为 013、112μg/ mL 。
215 　精密度试验 :精密吸取对照品溶液 (含大黄素
160μg/ mL ,芦荟大黄素 160μg/ mL) 于配制当日连
续进样 6 次 ,日内迁移时间和峰面积的 RSD 见表 1。
精密吸取同一对照品溶液 (含大黄素 160μg/ mL ,芦
荟大黄素 160μg/ mL)在配制 6 日内每日进样 ,日间
迁移时间和峰面积的 RSD 见表 1。
表 1 　精密度试验结果
Table 1 　Result of precision test
成分
迁移时间 RSD/ %
日内 日间
峰面积 RSD/ %
日内 日间
大黄素　　 0159 0191 1130 2170
芦荟大黄素 0180 1137 2196 4115
216 　回收率试验 :精密称取已测知含量的宁夏决明
子茶样品粉末各 6 份 ,每份 110 g ,精密吸取对照品
溶液 (含大黄素 160 μg/ mL 、芦荟大黄素 160 μg/
mL)适量 ,加入样品粉末中 ,按照前述样品处理方法
进行处理 ,进样测定 ,结果平均回收率和 RSD 分别
为 :9816 %、2165 %(大黄素) ;10219 %、3108 %(芦荟
大黄素) 。
217 　样品测定 :采用建立的方法对决明子药材、宁
夏决明子茶、兰州决明子茶、速溶决明子茶中两种活
性蒽醌成分进行分析 ,结果见表 2 ,电泳谱图见图 1。
表 2 　决明子药材及决明子茶中大黄素、芦荟大黄素
的含量测定结果 ( n = 6)
Table 2 　Analysis of emodin and aloe2emodin in Semen
Cassiae and Juemingzi Tea ( n = 6)
样　品
大黄素
质量分数
/ (mg·g - 1)
RSD/ %
芦荟大黄素
质量分数
/ (mg·g - 1)
RSD/ %
决明子药材　 0108 217 0148 514
宁夏决明子茶 0115 414 1131 210
兰州决明子茶 0114 110 0192 412
速溶决明子茶 0106 017 2179 219
12大黄素　22芦荟大黄素
12 emodin 　22 aloe2emodin
图 1 　对照品溶液( A) 、决明子药材( B)和宁夏决明子茶( C) 、兰州
决明子茶( D) 、速溶决明子茶( E)的高效毛细管电泳图
Fig1 1 　Electrophorograms of reference substance ( A) , Semen Cassiae crude drug ( B) , Ningxia Juemingzi
Tea ( C) , Lanzhou Juemingzi Tea ( D) , and Quick2dissolving Juemingzi Tea ( E)
3 　讨论
311 　硼砂缓冲液酸度的选择 :对于可离解的溶质分
子 ,缓冲液的酸度影响它们的离解度 ,因而酸度可明
显改变其电泳迁移行为。由实验可知 ,在 pH 9110～
10160 大黄素、芦荟大黄素均可获得很好的分离。然
而实际中药样品中的成分非常复杂 ,在 pH 9110 时 , 大黄素、芦荟大黄素因有其他未知成分的干扰而分离不佳。在 pH 9160 时分离效果最好 ,两种有效成分各自的峰形对称且窄而高 ,同时亦无其他未知成分的干扰。综合考虑对分离和迁移时间的影响 ,本实验最终选择 pH 9160 作为硼砂缓冲液的最佳酸度。312 　硼砂浓度的影响 :为了优化分离条件 ,本实验
·578·中草药 　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 35 卷第 8 期 2004 年 8 月
在 510～2510 mmol/ L 考察了硼砂浓度对迁移时间
的影响。实验表明大黄素、芦荟大黄素在硼砂浓度
为 510 mmol/ L 时不能很好分离 ,而当硼砂浓度为
1010 mmol/ L 时 ,芦荟大黄素的峰形不对称。结合
对迁移时间的影响 ,最终选择 1510 mmol/ L 作为最
佳硼砂浓度。
313 　SDS 浓度的影响 : 在缓冲溶液组成为 1510
mmol/ L 硼砂210 %乙醇 (p H 9160) 时 ,在 2010 ～
5010 mmol/ L 考察了 SDS 浓度对分离的影响。两
种有效成分的迁移时间都随着 SDS 浓度的增大而
增大 ,迁移顺序依次为大黄素、芦荟大黄素。当 SDS
浓度为 2010 mmol/ L 时 ,大黄素、芦荟大黄素彼此
间不能分离 ,而当 SDS 浓度超过 3010 mmol/ L 时 ,
迁移时间增大。综合考虑上述影响因素 ,最终选择
SDS 浓度为 3010 mmol/ L 。 314 　乙醇量的影响 :在缓冲液中添加有机物可改善HPCE 的分离效率。实验表明 ,在乙醇体积分数为0～5 %时分离情况不佳 ,出于对分离和迁移时间的综合考虑 ,选择 10 %乙醇。315 　分离电压的影响 :在毛细管电泳时 ,提高分离电压可以缩短体系分离时间 ,但是在高电压下会由于焦耳热的影响 ,使溶质产生扩散现象 ,从而降低毛细管电泳分离效率。本实验在 1510～2510 kV 考察了电压对分离的影响。综合考虑各影响因素 ,选择最佳分离电压为 2010 kV。References :[ 1 ] 　Hua H Q1 Study and clinical application of J uemingzi ( SemenCassiae) [J ]1 China J Chin M ater Med (中国中药杂志 ) ,1995 , 20 (9) : 56425671[ 2 ] 　Li Y , Li Y1 Capillary electrophoresis analysis on components inChinese materia medica [J ]1 Mod Inst ru (现代仪器) , 2000(5) : 1251
银杏叶提取物的毛细管电泳指纹图谱研究
马 　欣 ,孙毓庆 Ξ
(沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳 　110016)
摘 　要 :目的 　建立银杏叶提取物的毛细管电泳指纹图谱。方法 　EGb 761 为对照 ,芦丁为内参比物 ,采用毛细管
电泳法分析银杏黄酮苷。结果 　利用指纹图谱相似度计算软件 ,计算出各厂家样品与 EGb761 的相似度指数 ,建立
银杏叶提取物的指纹图谱。结论 　该研究有助于银杏叶提取物的质量控制。
关键词 :银杏叶提取物 ;指纹图谱 ;毛细管电泳
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2004) 08 0876 03
Fingerprint for extract of Ginkgo biloba leaves
MA Xin , SUN Yu2qing
(College of Pharmacy , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang 110016 , China)
Key words : extract of Gi nkgo biloba leaves ( EGb) ; fingerprint ; capillary electrophoresis
　　银杏叶制剂临床广泛应用于治疗心脑血管疾
病 ,目前认为其有效部位为黄酮类和萜内酯类化合
物。现行分析方法多以 HPLC 法测定黄酮苷元 (槲
皮素、山柰酚和异鼠李素)计算总黄酮含量为主。在
银杏叶大部分成分尚不清楚的情况下 ,间接测定总
成分含量还不能真正反映提取物质量的稳定。
Hasler 等[1 ]和游松等[2 ]分别采用 HPLC 法建立了银
杏黄酮和银杏叶注射液的指纹图谱。由于银杏黄酮
极性相差很大 ,均采用了复杂的梯度洗脱。毛细管
电泳 (capillary electrophoresis) 是一种高效分离技
术 ,具有高效、快速、进样体积小、溶剂消耗少和抗污
染能力强等特点 ,在中药有效成分分析、指纹图谱研
究方面显示出显著的优势。EGb761 现为公认的银
杏叶提取物标准[3 ] 。因此本实验以 EGb761 为对照
建立了银杏叶提取物的毛细管电泳指纹图谱。
1 　材料与方法
111 　仪器与试剂 :美国 Agilent 3D 毛细管电泳仪 ,
DAD 检测器 ,Agilent 化学工作站。未涂层石英毛细
·678· 中草药 　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 35 卷第 8 期 2004 年 8 月
Ξ 收稿日期 :2003210203
作者简介 :马　欣 (1977 —) ,女 ,广东汕头人 ,2000 年毕业于中国药科大学英语药学专业 ,现为沈阳药科大学在读硕士研究生 ,主要从事
中药分析研究。Tel : (024) 23842602 　E2mail : maxine- ma @sohu1com