全 文 ：· 药剂与工艺 ·
生 、炒决明子及其煎剂中部分活性成分的比较
中国中医研究院中药研究所(北京 1 0 0 7 0 0) 张启伟 奄 阴 健 张 俊 ‘ ’
摘 要 采用高效液相色谱法对生 、炒决明子及其煎剂中游离大黄酚 、结合大黄酚及保肝成分进
行了比较 。 与生品比较 , 炒决明子游离大黄酚含量升高 , 结合大黄酚含量下降 ;而煎剂中结果则相
反 。 炒决明子保肝类成分含量下降 , 但煎剂中含量反而略高 。 对上述实验结果进行了分析 。 本文为
决明子炮制研究提供了方法和数据 。
关键词 决明子 炮制 大黄酚 保肝成分 高效液相色谱法
决明子是一 味常用中药 , 功能为清热 明
目 , 润肠通便 。 除用生品外 , 还用炒制品 。 决
明子含有多种蕙醒类成分和蔡并毗喃酮类成
分 〔‘〕 。 一般认为结合型蕙醒是决明子通便作
用的有效成分 。 有报道决明子中某些蕙醒贰
和蔡并 一y一毗喃酮贰具有对抗四 氯化碳和半
乳糖胺对 原代培 养 小 鼠肝 细 胞 的毒 害 作
用〔2 , 3 , 。 已报道的决明子葱醒类成分测定方法
主要是比色法〔‘一 6〕。 但在我们的工作中发现 ,
由于干扰物的存在 , 用混和碱显色不 为粉红
色 , 而主要呈棕色 。 因此我们分别建立 了用高
效液相色谱法测定大黄酚及分离保肝成分的
方法 , 并 比较了炒制前后药材及煎剂 中两类
成分的变化 , 为深入研究决明子的炮制提供
了方法和数据 。
1 药材 、试药和仪器
1
.
1 药材的来源及炮制 :决 明子购于北京市
药材公司 , 经本所谢宗万研究员鉴定 为 Ca : -
五a to ra L . 的成熟种子 。 按中国药典 1 9 9。年
版一部决明子炮制项下制备净决明子及炒决
明子 。
1
.
2 试药 : 大黄酚 (化学对照 , 中国药品生物
制品检定所 ) ;液相色谱所用甲醇为优级纯 ,
纯水为蒸馏水经 M IL L IPO R E M illi一Q I 处
理所得 , 其它试剂均为分析纯 。
1
.
3 仪器 : 岛津 LC 一 3A 液相色谱仪 , G R E -
3A 梯度程序仪 , S P D 一 1 紫外可 见分光检 测
器 , C 一E IB 数 据处 理 机 , SI L 一 IA 进 样 品 ,
C T O
一
ZA 柱温箱 。
2 方法与结果
2. 1 大黄 酚 液 相 色谱 分 离 条 件 : 色 谱柱
Z o r b a x O D S (7拜m ) 2 5 Om m X 4rn m id , 柱温 :
4 O C
, 流动相 A : 0. 1 肠高氯酸水溶液 , 流动相
B : 0. 1 %高氯酸 甲醇溶液 , 由梯度程序仪控
制配 比为 A 一B (2 0 : 8 0 ) , 流速 : lm l/ m in ;检
测波长 : 2 5 4 n m , 灵敏度 : 0 . o 8A U FS 。
在上述层析条件下 , 大黄酚能得到很好
的分离 , 可用于定量分析 。大黄酚及样品的色
谱图见图 1 。
图 1 大黄酚对照品及样品色谱图
带
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‘ ’ 贵州省遵义市贵州长寿长乐集团公司药物研究所
《中草药 》1 9 9 6 年第 27 卷第 2 期
2
.
2 保肝类成分的分离条件 : 色谱柱 : 同前 ,
柱温 : 40 ℃ ;流动相 A : 纯水 , 流动相 B : 甲醇 ,
由梯度程序仪控制配 比为 A 一B (65 , 35 ) , 流
速 : lm l/ m in , 检 测 波 长 : 2 5 o n m , 灵 敏 度 :
0
.
OSA U F S
。
在此条件下决明子提取物中保肝类成分
的分离图谱见图 2 。
图 2 决明子中保肝成分色谱图
2
.
3 样品溶液的制备
2
.
3
.
1 药材中游离大黄酚和总大黄酚 的提
取按文献 〔‘〕方法 。
2
.
3
.
2 水煎液的制备及其中游离大黄酚和
总大黄酚的提取 : 称取决 明子 30 9 , 捣碎 , 加
蒸馏水 3 0 0m l , 煮沸 , 保持微 沸 3 Om in , 尼龙
纱 网滤 过 , 药 渣 再 加 蒸 馏 水 15 o m l , 煎 煮
30 m in
,滤过 。 2 次滤液合并 , 测定体积 。
取相 当于 20 9 药材的水煎液以氯仿多次
萃取其中的游离葱醒 , 合并氯仿萃取液 。
另取相当于 2 . 59 药材的水煎液 , 加入等
量的 sm ol / L 硫酸 , 直火缓缓回流 2h , 放至室
温 , 加氯仿 3 o m l 回流 3 om in 。分 出氯仿层 , 用
蒸馏水洗涤 2 次 。
上述游离大黄酚和总大黄酚氯仿提取液
回收氯仿至干 , 准确加入氯仿一甲醇 (1 , l) 溶
液 1 0m l溶解 , 滤过 ,供液相色谱分析用 。
2
.
3
.
3 药材中保肝成分的提取 :将提取 了游
离大黄酚的药渣挥尽氯仿 , 准确加入 90 %甲
醇溶液 5 0 m l , 称重 , 水浴 回流 2h , 放冷 , 补足
.
8 0
·
回流损失的溶剂至原重 , 混匀 , 滤过 , 即得 。
2. 3. 4 煎剂中保肝成分供试液的制备 : 取水
煎液滤过 , 供液相色谱分析用 。
2. 4 结果与分析
2. 4. 1 大黄酚标准曲线的制备 : 精密称取大
黄酚对照品 , 加氯仿一 甲醇 (1 : 1) 溶液配制成
每 lm l含 0. O 8 8 2 m g 的标准溶液 。 分别进样
l
、
2
、
4
、
6
、
8
、
1 0拜l, 每个体积进样 3 次 。 以进样
量 伽g )为横坐标 , 峰面积为纵坐标进行线性
回归 , 回归方程为 Y = 2 7 6 4 5 8 X 一 3 3 3 4 , r =
0
.
9 9 9 8
。
2
.
4
.
2 生 、炒决明子中游离及总大黄酚含量
测定 : 将上述供测定大黄酚的样品溶液进样
2 一 10川 , 取 2 次测定的平均值 , 结合大黄酚
含量为总大黄酚含量减去游离大黄酚含量求
得 , 结果见表 1 。 生品 中游离大黄酚含量很
低 , 总大黄酚含量较高 ; 而炒品中游离大黄酚
大大增高 , 约为生品的 7 倍 , 但炒品中结合大
黄酚含量有所下降 。 生品与炒品大黄酚总量
基本一致 , 因此很可能在炒制时因受热等因
素影响 , 蕙醒贰的贰键断裂 , 使大黄酚贰的含
量下降 ,而游离大黄酚含量升高 。
2. 4. 3 生 、炒决明子水煎液中游离及结合大
黄酚的测定 : 结果 见表 1 , 生品水煎液 中游离
大黄酚含量比药材中含量还高 , 重复 3 次 , 虽
每次测定值差异略大 , 但上述结果不变 。炒 品
却不存在这样的结果 , 推测可能是 由于种子
中酶的作用使蕙醒贰发生水解 。 炒 品水煎液
中结合大黄酚含量 比生品的略高 。
表 1 生 、炒决明子及其水煎液中游离和结
合大黄酚含量
大黄酚含量 (% )
游离 结合
药材
煎液
药材
煎液
0
.
0 0 2 1 6 0
.
2 5 1 6生品
炒品
0
.
0 0 6 5 0
0
.
0 1 4 6 0
0
.
0 0 1 0 4
0
.
10 8 4
0
.
2 4 1 1
0
.
1 2 6 9
2. 4. 4 生 、炒决 明子保肝成分的 比较 : 结果
见表 2 。
生品中保肝成分含量最高 , 炒制后各峰
峰高均有所下降 ,但下降率并不一致 。说明炒
表 2 生 、炒决明子及其水煎液中保肝成分的峰高
保肝成分的峰 . :万
峰 号
生品 9 8 9 8
{;{炒 品
药材
煎液
药材
煎液
4 74 7 4 0 10
9 5 2 9 80
1 98 3 30 1气
8 7 9 15 78
l〔)2 0
3 汽3
制使保肝类成分含量下降 . 且各成分对热的
稳定性亦不同 。 煎液中妙 品大部分保肝成分
煎出量比生品高 , 这 与水煎液巾结 合大黄酚
的结果一致 可能 由于妙 后质地酥脆或质地
酥脆易捣碎而使煎出址增 加 。
3 讨论
3
.
1 蕙醒类提取 、水解 参考 了文献 〔: 二 , 未对
方法学做进一步考察 。
3
.
2 文献川报道了决明子 中保肝成分的分
离条件 . 以 乙睛 一水系统梯度洗脱分离 。 我们
改用 甲醇一水 系统等强洗脱分离这组成分 。 由
于没有对照品 , 无法对各个峰进行定性 , 只好
用峰高来反映保肝成分的存在及量的变化 。
3
.
3 在萃取水 煎液 中游离 葱醒时 . 发生乳
化 。我们在实验 中分 出乳化层 , 用热回流方法
破乳化 , 最终分出氛仿层 。
3
.
4 关于酶解 的探索 , 为了证 实酶 解的推
测 , 我们设计了冷水 下药煎及沸水下药煎的
一组试验 。 经测定煎液中游离大黄酚含童发
现 : 冷水 下药其 含量 为 0 . 0 0 76 % , 与 以前 测
定 结 果 荃 本 一 致 ; 而 沸 水 下 药 其 含 量 为
(). 。。2 6 % · 比冷水下药低 2 倍 。 说明关于酶解
的推测是有一定合理性的 。 妙品由于在炒制
过程 中酶的破坏 . 所以不存在此种现象 。
3. 5 决明子炒制后葱醒贰类成分下降 , 可解
释通便作用的减弱 。 这 已得到药理实验结果
的证明 。 虽炒品水煎液中保肝 成分略多 . 但药
理实验结 果表明其保肝作用比生品弱 。 所以
炒制是否使这类成分发生质的变化有待深入
研究 。
3
.
6 决明子在炒制过程中 . 山于受热等因素
衫响 , 化学成分及药理作用均有所变化 。因此
有必要对影响炒制的诸因素进行考察 . 以便
确定最佳炒制工艺 。
参 考 文 献
1 阴 键 , 等编 . 中药现代研究 与临床 应用 (1) . 北京 : 学苑
出版 社 , 19 9 4 . 3 1 6
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4 卜纂邹 . 等. 药学学报 , 1 9貂 , 1。( 12 ) : 淞。
不 K (〕s h l() k 是1 M . e t a l. C h e n 飞 Ph a r m B u ll , 1 9 7 8 , 2 6 ( 5 ) : 13 4
‘ 之鉴妙荣 . 等. 中l闷中药杂志 , 19 9 0 . 15 (8 ) : 2 9
(1 9 9 5
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1 7 收稿 )
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t e n t o f fr e e el、r ys o p h a n o l in p r o e e s 、e d s e c d 、 一n e r c : s e d
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e o m p o n e n t、 d e er e a s e d
.
B u t tl、o 、 e p r e 、 e n t In rl、。 d o e o e r一o n w o r e jtxs l v ie e v e r s o
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T h e m e th o d , d e s e r lb o d e o n b e
u s e d fo r fu r th e r s t t 一d ie s in th e p r o e e s 、in g o f (
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《中草药》19 9 6 年第 27 卷第 2 期 . 8 1 .