全 文 ：益肾降压颗粒质量标准的研究
何　伟 1 ,容　蓉 1 ,肖振良 2
( 1. 山东中医药大学中药学院 ,山东 济南　 250014; 2. 山东中医药大学附属医院 ,山东 济南　 250014)
　　益肾降压颗粒由桑寄生、淫羊藿、葛根、丹参等
药物组成 ,具有燮补阴阳、活血通脉、清心宁神的功
效 ,用于肾虚血瘀、心神不宁之高血压病患者。 为控
制本品的质量 ,本研究对方中的桑寄生、葛根、丹参
进行了薄层色谱定性鉴别 ,并采用 RP-HPLC法测
定了方中淫羊藿苷的含量。
1　仪器、试药与样品
贝克曼高效液相色谱仪 ( 110B泵 , 420控制器 ,
163可变波长检测器 ) , HP 5890Ⅱ积分仪 (美国 )。
淫羊藿苷、葛根素、原儿茶醛、槲皮素 (中国药品
生物制品检定所 ) ;硅胶 G、硅胶 H(青岛海洋化工
厂 ) ;聚酰胺 ( 60～ 80目 ,湖南醴县一中试剂厂 ) ;乙
腈 (色谱纯 ,天津四友生物试剂有限公司 ) ;其余试剂
均为分析纯。
益肾降压颗粒 (山东中医药大学附属医院制剂
室生产 ,批号: 980415, 980416, 980417)。
2　薄层色谱鉴别
2. 1　桑寄生 [1 ]: 取本品 3 g研细 ,加甲醇 -水 ( 1∶ 1)
60 mL,超声处理 20 min,滤过 ,滤液浓缩至约 20
m L,加水 10 mL稀释 ,加 10%硫酸 0. 5 mL,水浴回
流 1 h,放冷 ,移至分液漏斗中 ,用醋酸乙酯提取 2次
( 30 mL× 2) ,合并醋酸乙酯液 ,水浴蒸干 ,残渣加醋
酸乙酯 5 mL使溶解 ,作为供试品溶液。按处方比例
称取除桑寄生外各药材 ,按工艺提取、制备 ,同法制
成缺桑寄生空白对照液。另取桑寄生药材粉末 3 g ,
同法制成对照药材溶液。取槲皮素对照品 ,加醋酸乙
酯制成 0. 5 mg /mL的溶液 ,作为对照品溶液。吸取
上述溶液各 4μL,对照品溶液 2μL,分别点于同一
高效硅胶 G薄层板上 ,以甲苯 (水饱和 ) -醋酸乙酯 -
甲酸 ( 5∶ 4∶ 1)为展开剂 ,喷以 5%三氯化铝乙醇溶
液 ,置紫外光灯 ( 365 nm )下检视。供试品色谱中 ,在
与对照品色谱相应的位置上显相同的黄色荧光斑
点 ,空白无干扰 (图 1)。
2. 2　丹参 [ 2]:取本品 2 g研细 ,加 70%乙醇 50 mL,
超声处理 30 min,滤过 ,滤液水浴蒸至无醇味 ,加水
10 mL稀释 ,加氯化钠至饱和 ,乙醚提取 4次 ( 15
mL× 2、 10 m L× 2) ,合并乙醚液 ,挥去乙醚 ,残渣加
乙醇 2 mL使溶解 ,作为供试品溶液。按处方比例称
取除丹参外各药材 ,按工艺提取、制备 ,同法制成缺
丹参空白对照液。另取原儿茶醛对照品加乙醇制成
0. 5 mg /mL的溶液 ,作为对照品溶液。吸取上述溶
液各 6μL,分别点于同一硅胶 G薄层板上 ,以氯仿-
丙酮 -甲酸 ( 8∶ 1∶ 1)为展开剂 ,喷以 2%三氯化铁
乙醇溶液显色。供试品色谱中 ,在与对照品色谱相应
位置上显相同污绿色斑点 ,且空白无干扰 (图 1)。
2. 3　葛根 [1 ]: 取本品 1 g研细 ,加 70%乙醇浸泡 15
min,超声处理 20 min,滤过 ,滤液水浴蒸发至约 5
mL,与 0. 5 g聚酰胺拌匀 ,水浴蒸干 ,置已处理好的
聚酰胺柱 ( 60～ 80目 , 3 g ,柱内径 1. 5 cm ,湿法上
柱 )中 ,先用蒸馏水洗至流出液无色 ,再以 70%乙醇
洗脱至无色 ,收集乙醇洗脱液 ,水浴蒸至无醇味 ,放
冷 ,用盐酸溶液调 pH值至 2,移至分液漏斗中。以醋
酸乙酯提取 2次 ( 15, 10 mL) ,合并醋酸乙酯液 ,水
浴蒸干 ,残渣加 70%乙醇 2 mL使溶解 ,作为供试品
溶液。按处方比例称取除葛根外各药材 ,按工艺提
取、制备 ,同法制成缺葛根空白对照液。 另取葛根素
对照品加甲醇制成 1 mg /mL的溶液 ,作为对照品溶
液。 吸取上述溶液各 6μL分别点于同一硅胶 H薄
层板上 ,以氯仿 -甲醇 -水 ( 8∶ 3. 5∶ 1)下层溶液为展
开剂 ,展开、取出、晾干 ,置氨气中熏后 ,于紫外光灯
( 365 nm )下检视。供试品色谱中 ,在与对照品色谱
相应的位置上 ,显相同的亮蓝色荧光斑点 ,空白无干
扰 (图 1)。
3　淫羊藿苷含量测定
3. 1　色谱条件 [1 ]:色谱柱: Kromasi l C18 ( 200 mm×
4. 6 mm, 5μm,中国科学院大连化学物理研究所 ) ;
流动相: 乙腈 -水 ( 24∶ 76) ;流速: 1 mL /min;检测波
长: 270 nm;灵敏度: 1. 0 AU FS;进样量: 20μL。 淫
羊藿苷与杂质峰分离度大于 1. 5,色谱柱理论塔板
数按淫羊藿苷计应大于 1 500。色谱图见图 2。
·326· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 4期 2003年 4月
收稿日期: 2002-02-04作者简介:何　伟 ( 1955— ) ,女 ,北京市人 ,副教授 ,硕士生导师 ,从事中药药剂的教学与科研工作。
Tel: ( 0531) 2614731　 E-mail: jun5512@ sdu. edu. cn
1　 　 2　 　 3　 4　 1 　 2　　　 3　 　 1　 　 2　 　 3
A　　　　　　　 B　　　　　　　 C
1-供试品　　　　　　 1-原儿茶醛　　　　 1-空白对照
2-槲皮素对照品 2-供试品 2-葛根素
3-空白对照 3-空白对照 3-供试品
4-桑寄生 1-protocatechuic 1-sample wi th out
1-sample 　 ald ehyde 　 Rad ix Puerar iae
2-quercetin 2-sample 2-pu erarin
3-sample wi th out 3-sample w ithou t 3-sample
　 Herba Ta xil li 　 Rad ix Salviae
4-Herba Ta xil li 　 Milt iorrhi zae
图 1　桑寄生 ( A)、丹参 (B)和葛根 (C)的薄层色谱图
Fig. 1　 TLC chromatograms to identify Herba
Taxilli ( A) , Radix Salviae Miltiorrhizae
(B) andRadix Puerariae (C)
* -淫羊藿苷
* -icariin
图 2　对照品 (A)、供试品 ( B)和阴性对照 (C)的色谱图
Fig. 2　 HPLC chromatograms of icariin ( A) , sample
(B) and sample without Herba Epimedii ( C)
3. 2　线性关系考察: 精密称取淫羊藿苷对照品
10. 76 mg ,置 10 mL量瓶中 ,加 70%乙醇稀释至刻
度 ,摇匀 ,分别精密量取 20, 30, 40, 50, 60, 70μL,置
1 mL量瓶中 ,加 70%乙醇稀释至刻度 ,摇匀。 按上
述色谱条件测定淫羊藿苷色谱峰面积 ,以淫羊藿苷
的量为横坐标 ,峰面积积分值为纵坐标 ,计算回归方
程 Y= 175. 68X- 1 273. 44, r= 0. 999 7。结果表明
淫羊藿苷在 0. 430 4～ 1. 721 6μg线性关系良好。
3. 3　供试品溶液的制备: 将本品研细 ,取约 0. 3 g,
精密称定 ,加 70%乙醇 100 mL,超声分散 2 min,加
热回流提取 1 h,滤过 ,用 70%乙醇少量洗涤容器和
滤渣 ,洗液与提取液合并 ,水浴蒸干 ,残渣加水 5 mL
使溶解 ,置已处理好的聚酰胺柱 ( 60～ 80目 , 2. 5 g,
柱内径约 1. 5 cm,湿法上柱 )中 ,先以水 40 mL洗至
流出液无色 ,弃去 ,再以 90%乙醇 150 mL洗脱 ,收
集醇洗脱液 ,水浴蒸干 ,残渣加 70%乙醇使溶解 ,并
定容至 10 mL,以 0. 5μm微孔滤膜滤过 ,即得。
　　精密称取淫羊藿苷对照品 ,加 70%乙醇制成
40. 3μg /mL的溶液 ,作为对照品溶液。
3. 4　空白试验:按处方中药味比例自制不含淫羊藿
的颗粒 ,制成空白溶液 ,按样品方法测定 ,结果在与
对照品溶液相同保留时间无吸收峰 ,空白无干扰。
3. 5　精密度试验:吸取供试品溶液 ,重复进样 ,求得
淫羊藿苷峰面积 RSD= 0. 96% (n= 6)。
3. 6　稳定性试验: 吸取供试品溶液 ,每隔 2. 5 h进
样一次 ,测定淫羊藿苷色谱峰面积 ,结果表明 ,峰面
积积分值在 12. 5 h内基本稳定 , RSD= 1. 28%
(n= 6)。
3. 7　回收率试验:采用加样回收法。取已测知淫羊
藿苷含量的同一批样品 (批号 980416) ,分别精密加
入一定量的淫羊藿苷对照品乙醇溶液 ,依法测定 ,结
果平均回收率为 98. 24% , RSD= 1. 93% (n= 5)。
3. 8　重现性试验: 取本品 (批号 980416) 5份 ,精密
称定 ,制备供试品溶液 ,依法测定 ,淫羊藿苷平均含
量为 1. 94 mg /g ,RSD= 2. 3% (n= 5)。
3. 9　样品测定结果: 取益肾降压颗粒 (批号
980415, 980416, 980417) ,依法测定淫羊藿苷含量 ,
结果见表 1。
表 1　益肾降压颗粒中淫羊藿苷含量测定结果 (n= 5)
Table 1　 Analysis of content of icariin
in Yishen Jiangya Granula (n= 5)
批　号 淫羊藿苷含量 /( mg· g- 1 ) R SD /%
980415 1. 89 3. 5
980416 1. 94 2. 3
980417 2. 02 0. 9
　　由以上结果 ,暂定本品含淫羊藿苷 ( C33 H40O15 )
计不得低于 1. 70 mg /g。
4　讨论
4. 1　桑寄生主要有效成分为槲皮素和扁蓄苷 ,但其
他中药品种含该成分 ,若仅以槲皮素为对照品 ,专属
性较差 ,因此在薄层色谱鉴别中增加了药材对照。
·327·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 4期 2003年 4月
4. 2　葛根素为异黄酮类化合物 ,经聚酰胺色谱柱分
离 ,去除了多数干扰成分 ,但醇洗脱液中的小檗碱仍
干扰葛根素薄层色谱分析 ,加入盐酸溶液 ,使小檗碱
形成盐酸盐 ,用醋酸乙酯将葛根素提出 ,制成供试品
液。进行薄层色谱分离 ,色谱斑点圆整、清晰 ,分离效
果理想。
4. 3　淫羊藿苷的含量测定中 ,本品若以 70%乙醇
提取后直接进行 HPLC含量测定 ,则供试品液对液
相色谱柱污染严重。本实验中对供试液采用聚酰胺
柱预处理 ,水洗液中未检出淫羊藿苷 ;再用 90%乙
醇洗脱 ,对醇洗脱液进行 HPLC测定 ,以乙腈 -水
( 24∶ 76)为流动相 ,淫羊藿苷能与其他干扰成分实
现基线分离。
References:
[1 ]　Ch P (中国药典 ) [S ]. 2000 ed. VolⅠ .
[2 ]　 Lǜ W Q, Long X H. Id enti f i cation of Trad it ional Chinese
Medicinal Ma terials in Ch inese Paten t Med icine by Th in Layer
Ch romatog raphy (中成药中的药材薄层色谱鉴别 ) [M ]. Bei-
jing: People s Medical Publishing House, 1997.
痛经平胶囊的质量标准研究
李　彤 1 ,赵志军 2 ,丁里玉 3 ,杨彩琴 3 ,王　静 3 ,姚子华 1
( 1. 河北大学化学与环境科学学院 ,河北 保定　 071002; 2. 河北省药品检验所 ,河北 石家庄　 050011; 3. 河北医科大学 ,河
北 石家庄　 050017)
　　痛经平胶囊由当归、赤芍、元胡等 8味中药经提
取加工而制成 ,具有止痛化瘀之功效 ,主治痛经、月
经不调等症。为了控制该制剂的质量 ,本实验采用薄
层色谱法对制剂中当归、赤芍、元胡进行了定性鉴
别 ,并采用 HPLC法对该制剂中的主要成分阿魏酸
进行了含量测定 ,结果满意。
1　仪器与试剂
LC-480高效液相色谱仪 (美国 PE公司 ) ;阿魏
酸、芍药苷、延胡索乙素对照品 (中国药品生物制品
检定所 ) ;甲醇为色谱纯 ,水为重蒸水 ,其余试剂均为
分析纯 ;痛经平胶囊 (河北医科大学药学院提供 )。
2　定性鉴别
2. 1　赤芍的鉴别 [1 ]: 取本品内容物 4 g,加乙醚 70
m L,索氏提取器回流 1 h,弃去乙醚液 ,药渣挥干溶
剂 ,加甲醇 100 m L,回流提取 1. 5 h ,提取液回收至
干。残渣加水 10 mL溶解 ,过滤 ,滤液以 2 mL /min
的流速通过已处理好的 D-101大孔树脂柱 ,用水
500 mL洗涤 ,继以用 70%乙醇洗脱。弃去初滤液 10
m L,收集续滤液 100 mL置水浴上蒸干 ,残渣加甲
醇 ,定容于 5 mL量瓶中 ,摇匀 ,作为供试品溶液。另
取缺味配制的模拟制剂 ,同法制备 ,得阴性对照溶
液。取芍药苷对照品 ,加甲醇制成 1 mg /mL的对照
品溶液。吸取上述溶液各 5μL分别点于同一以羟甲
基纤维素钠为粘合剂的硅胶 G薄层板上 ,以氯仿 -
醋酸乙酯-甲醇 -异丙醇 -甲酸 ( 30∶ 15∶ 10∶ 2∶
0. 2)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 5%香草醛硫
酸溶液 ,热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中在与
对照品色谱相应的位置上显相同的蓝紫色斑点 ,阴
性对照无此特征斑点 (图 1-A)。
2. 2　元胡的鉴别 [ 2]:取本品内容物 1 g ,加浓氨水湿
润 ,加乙醚 20 mL密闭 ,室温避光冷浸 24 h。吸取上
清液 10 mL用 10%醋酸萃取 3次 ,每次 8 mL,合并
酸萃取液 ,用浓氨水调 pH 10～ 11。再用氯仿萃取 3
次 ,每次 15 mL,合并氯仿液 ,水洗至中性 ,用无水硫
酸钠脱水后水浴蒸去溶剂 ,室温放冷 ,置干燥器中敞
口放置 12 h,精确加入 0. 5 mL甲醇溶解 ,制得供试
品溶液。 另取缺味配制的模拟制剂 ,同法制备 ,得阴
性对照溶液。取延胡索乙素对照品及中性硫酸盐适
量 ,加甲醇制成 1 mg /m L延胡索乙素的溶液作为对
照品溶液。吸取上述溶液各 5μL分别点于同一以羧
甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶 G薄层板上 ,以石油
醚 -醋酸乙酯 ( 2∶ 1. 7)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,
喷以改良碘化铋钾溶液 ,供试液色谱中在与对照品
色谱相应的位置上显相同的橙红色斑点 ,阴性对照
无此特征斑点 (图 1-B)。
2. 3　当归的鉴别 [3 ]: 取本品内容物 2 g于索氏提取
器中 ,加 100 mL乙酸乙酯 -甲醇混合液 ( 9. 5∶ 0. 5)
连续提取 4 h,提取液回收至干 ,加适量甲醇溶解。
过滤 ,定容于 10 mL容量瓶中 ,制得供试品溶液。另
取缺味配制的模拟制剂 ,同法制备 ,得阴性对照溶
·328· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 4期 2003年 4月
收稿日期: 2002-06-14