全 文 ：C> B。
表 3　方差分析表
方差来源 离均差平方和 自由度 均方 F值 P
A 4055. 426 2 2 027. 713 20. 88 < 0. 05
B 193. 417 2 　 96. 709 　 0. 990
C 588. 020 2 　 294. 010 　 3. 020
D(误差 ) 194. 806 2 　 97. 403
　　 F0. 05 ( 2, 2)= 19　 F0. 01 ( 2, 2) = 99。
　　从表中直观得出的结论是各因素最佳水平为
A1B1 C3 ,但综合试验过程中所出现的问题 ( 55%的乙
醇提取液色泽混暗 ,过滤困难 ,而 75%的乙醇色泽
纯清 ,过滤容易 )和节约资源考虑 ,以及结合 4号试
验的结果分析 ,认为可选用 A2 B1 C2 ,即醇浓度为
75% ,醇用量为 4倍 ,回流次数 4次。
2. 2. 4　工艺验证试验:称取 5份山慈菇药粉 ,每份
30 g ,按正交试验选择的最佳工艺进行提取 ,将提取
液适当处理后进行测定含量 ,计算秋水仙碱的量 ,秋
水仙碱的平均含量为 97. 39 mg。 结果说明 ,由正交
试验筛选的回流工艺条件是可靠的。
3　讨论
3. 1　由方法学考察结果可见 ,采用 HPLC检测秋
水仙碱 ,精密度高 ,重现性及线性关系好 ,故认为本
法简便、灵敏、准确 ,可用于山慈菇中提取物的质控。
3. 2　通过与其他提取方法比较 ,认为选用乙醇回流
法提取丽江山慈菇中秋水仙碱较为合适 ,通过正交
试验 ,对提取工艺进行了筛选。验证试验表明筛选的
工艺稳定可靠。
参考文献:
[ 1 ]　王盛民 ,张　英 .实用中药材鉴别检索手册 [M ] .北京:学苑
出版社 , 1992.
[2 ]　《全国中草药汇编》编写组 . 全国中草药汇编 [M ]. 北京:人民
卫生出版社 , 1975.
[ 3 ]　崔树得 . 中药大全 [M ] . 哈尔滨:黑龙江科学技术出版社 ,
1989.
[ 4 ]　姜继祖 ,叶开润 ,廖周坤 ,等 . 超临界 CO2流体萃取光菇子中
秋水仙碱的研究 [ J]. 中草药 , 1997, 28( 3): 147-149.
海狗温肾丸质量标准的研究
索菲娅1 ,陈世忠 2
( 1. 新疆大学 生物系 ,新疆 乌鲁木齐　 830046;　 2. 北京大学药学院 中药研究室 ,北京　 100083)
　　海狗温肾丸是由海马、狗肾、鹿茸、淫羊藿、人
参、补骨脂、肉桂等 11味中药组成 ,主要用于身体虚
弱、精神疲乏、腰腿酸软、肾亏精冷、性欲减退、失眠
健忘等症。为了控制该制剂的质量 ,本实验采用显微
鉴别法对海马、鹿茸、人参进行鉴别 ,利用薄层色谱
法对人参、补骨脂、肉桂进行了鉴别 ,用 HPLC法测
定了该制剂中淫羊藿苷的含量 [ 1～ 4 ]。
1　仪器与试剂
日本岛津 LC-3A型高效液相色谱仪 , SPD-2A
型紫外可见波长检测器 ,精瑞 GS2010型色谱工作
站。淫羊藿苷 (含量测定用 ,批号: 0737-9910) ,肉桂
醛 (供鉴别用 ,批号: 0786-9001)购于中国药品生物
制品检定所 ;补骨脂 Psoralea coryli folia L对照药
材、人参 Panax ginseng C. A. Mey.对照药材均购
于北京同仁堂药店。硅胶 G(青岛海洋化工厂 ) ;水为
重蒸水 ;其他试剂均为分析纯。
2　定性鉴别
2. 1　显微鉴别:取本品置显微镜下观察。 草酸钙簇
晶直径 20～ 68μm,棱角锐尖 ;树脂道碎片内含黄色
分泌物 ;网纹及梯纹导管直径 8～ 48μm;其中以草
酸钙结晶的特征明显 (人参 )。 未骨化的骨组织淡灰
色或近无色 ,边缘及表面均不整齐 ,具不规则的块状
突起物 ,其间隐约可见条状纹理 (鹿茸 )。横纹肌纤维
近无色或淡黄色 ,有细密横纹 ,横纹平直或微波纹
(海马 )。 见图 1。
A-人参　 B-鹿茸　 C-海马
图 1　海狗温肾丸的显微鉴别
·710· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 8期
收稿日期: 2001-12-27
2. 2　薄层色谱鉴别
2. 2. 1　肉桂: 取本品粉末 2. 5 g ,加乙醇 10 mL,超
声提取 30 min,滤过 ,滤液即为供试品溶液。另取肉
桂醛对照品 ,加乙醇制成 1μL /mL的对照品溶液。
取不含肉桂的阴性样品 ,同供试品处理方法制备阴
性对照液 ,照《中华人民共和国药典》薄层色谱法 (附
录Ⅵ B)试验 ,吸取供试品溶液和阴性对照液各 20
μL,对照品溶液 10μL,分别点于同一硅胶 G薄层
板上 ,以苯 -醋酸乙酯 -冰醋酸 ( 90∶ 2. 5∶ 2. 5)为展
开剂 ,展开 ,取出晾干 ,喷以 2, 4-二硝基苯肼乙醇溶
液 ,稍稍加热至斑点明显 ,见图 2-A。
2. 2. 2　人参: 取本品粉末 2. 5 g ,精密称定 ,置索氏
提取器中 ,加氯仿 40 mL,加热回流 3 h,弃去氯仿
液 ,药渣挥去氯仿 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入水饱
和的正丁醇 50 mL,超声提取 30 min,滤过 ,滤液置
蒸发皿中蒸干 ,残渣加甲醇 1 m L使溶解 ,即为供试
品溶液。另取人参对照药材 1. 0 g ,同法制成对照药
材溶液。取不含人参的阴性样品 ,同供试品处理方法
制备阴性对照液 ,照《中华人民共和国药典》薄层色
谱法 (附录Ⅵ B)试验 ,吸取供试品溶液和阴性对照
液各 20μL、对照品溶液 10μL,分别点于同一硅胶
G薄层板上 ,以氯仿 -醋酸乙酯 -甲醇-水 ( 15∶ 40∶
22∶ 10) 10℃以下放置的下层溶液为展开剂 ,展开 ,
取出晾干 ,喷以 50%硫酸甲醇溶液 ,在 105℃加热
至斑点显色清晰 ,分别置日光及紫外光灯下 ( 365
nm )下检视。见图 2-B。
2. 2. 3　补骨脂:取本品粉末 2. 5 g ,加醋酸乙酯 40
m L,超声处理 15 min,滤过 ,滤液减压回收溶剂至 1
m L,即为供试品溶液。另取补骨脂对照药材 0. 5 g ,
按上法操作 ,制成对照药材溶液。取不含补骨脂的阴
性样品 ,同供试品处理方法制备阴性对照液。照《中
华人民共和国药典》薄层色谱法 (附录Ⅵ B)试验 ,吸
取供试品溶液 20μL,对照品溶液 10μL,分别点于
同一硅胶 G薄层板上 ,以正丁醇-醋酸乙酯 ( 8∶ 2)
为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以 10%氢氧化钾甲
醇溶液 ,置紫外光灯 ( 365 nm)下检视。 见图 2-C。
3　淫羊藿苷的含量测定
3. 1　色谱条件:迪马 DiamonsilTM C18柱 ( 4. 6 mm×
250 mm, 5μm) ,流动相: 乙腈-水 ( 33∶ 67) ,检测波
长: 270 nm ,流速: 1 mL /min,柱温: 室温 ,灵敏度:
0. 1 AUFS。 理论塔板数按淫阳藿苷计不得少于
3 500。
3. 2　标准曲线的制备: 精密吸取对照品溶液 ( 80
μg /mL) 2. 5, 5. 0, 10. 0, 15. 0, 20. 0μL,注入高效液
　 1-肉桂醛对照品　　 1-人参对照药材　　 1-补骨脂对照药材
　 2-供试品溶液 2-供试品溶液 2-供试品溶液
　 3-阴性对照溶液 3-阴性对照溶液 3-阴性对照溶液
图 2　样品 TLC图
相色谱仪中 ,按上述色谱条件测定峰面积 ,以淫羊藿
苷的量为纵坐标 ,以峰面积为横坐标作图 ,回归方程
为: Y= 4× 10- 6X+ 0. 003 7, r= 0. 999 7,线性范围:
0. 2～ 16μg。
A-对照品　 B-供试品　 C-空白溶液　* -淫羊藿苷
图 3　 HPLC图谱
3. 3　空白试验:按处方配比投入缺淫羊藿的空白样
品 ,按供试品溶液配制的方法提取 ,并按上述色谱条
件测定。 结果在淫羊藿出峰位置未见其他杂峰的干
扰 ,说明缺样空白无干扰。
3. 4　精密度考察: 精密吸取上述供试品溶液 20
μL,连续进样 ,结果峰面积 RSD= 1. 27% (n= 5)。
3. 5　稳定性考察: 精密吸取上述供试品溶液 20
μL,每隔 1 h进样 1次 ,共进样 5次 ,测定 ,峰面积
RSD= 1. 36%。
3. 6　重现性考察: 精密吸取上述供试品溶液 20
μL,注入高效液相色谱仪中 ,每份供试品溶液进样 3
针 ,测定 5份 ,测定 ,供试品溶液峰面积 RSD=
0. 5% (n= 5)。
3. 7　加样回收率试验:称取供试品 20 g,置研钵中
研成细粉 ,取 0. 5 g精密称定 ,共 6份 ,置锥形瓶中 ,
其中 5份供试品中分别加入 0. 5 mL加样溶液 ,置
水浴上挥去溶剂 ,另 1份为空白。按样品处理方法测
定 ,结果平均加样回收率为 98. 46% , RSD =
3. 15%。
·711·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 8期
3. 8　样品中淫羊藿苷含量的测定: 称取供试品 10
g ,置研钵中研成细粉 ,取 1. 5 g精密称定 ,置锥形瓶
中 ,加入甲醇 30 mL,称定质量 ,静置过夜 ,然后超声
30 min,放冷后称重 ,加甲醇补足质量 ,滤过 ,取续滤
液 15 mL,置水浴上蒸干 ,残渣加流动相溶解并定容
于 5 mL量瓶中 ,微孔滤膜 ( 0. 45μm)滤过。 精密吸
取供试品溶液各 20μL,进样 ,测定结果见表 1。
表 1　海狗温肾丸中淫羊藿苷的含量 (n= 3)
批　号 淫羊藿苷含量 (mg /g)
000207 0. 299
000212 0. 679
000216 0. 882
4　讨论
4. 1　海狗温肾丸为复方制剂 ,其中海马、鹿茸、人参
以原药材粉碎入药 ,其他药物以浸膏入药 ,在鉴别方
面 ,由于海马、鹿茸缺乏特征性的 TLC鉴别方法 ,且
是贵重药材 ,故鉴别采用粉末显微的方法进行鉴别 ,
其鉴别特征明显 ,具有特征性。
4. 2　人参的鉴别采用了显微鉴别和 TLC结合的方
法 ,其原因是近年来市场上常有使用提取过的人参
入药和使用人参茎叶总皂苷入药 ,使用显微鉴别和
TLC结合的方法可以避免上述现象的出现。
4. 3　淫羊藿是方中主药 ,淫羊藿苷是淫羊藿的活性
成分之一 ,有关淫羊藿苷的含量测定 ,文献 [5, 6 ]中记
载的有高效液相色谱法、薄层扫描法等 ,其中以高效
液相色谱法较多。 经流动相的选择 ,最终选用乙腈-
水 ( 33∶ 67)为流动相 ,分离效果较佳 ,淫羊藿苷与其
他杂质峰达到基线分离 ,理论塔板数达到 3 500
以上。
4. 4　经方法学研究结果表明 ,本方法简便、准确、特
征性强、重复性好、空白无干扰 ,可作为海狗温肾丸
质量控制的方法。
参考文献:
[ 1 ]　阴　健 ,郭力弓 .中药现代研究与临床应用Ⅰ [ M ] . 北京:学
苑出版社 , 1993.
[2 ]　中国药典 [ S] . 1995年版 .一部 .
[3 ]　阴　健 . 中药现代研究与临床应用Ⅱ [M ]. 北京:中医古籍出
版社 , 1995.
[4 ]　阴　健 . 中药现代研究与临床应用Ⅲ [M ]. 北京:中医古籍出
版社 , 1997.
[ 5]　朱炳辉 ,梁艺英 ,莫金垣 .安神补脑液中淫羊藿苷含量的高效
液相色谱法测定 [ J ]. 中国实验方剂学杂志 , 1999, 5( 6): 8-10.
[6 ]　李章万 ,刘三康 ,钱广生 ,等 . 四种含淫羊藿中成药中淫羊藿苷
的含量测定 [ J] .华西医科大学学报 , 1995, 26( 1): 66-69.
HPLC法测定双胆片中猪去氧胆酸含量
林　吉吉 1 ,肖学凤 2 ,邱智东 1 ,王　凯 1 ,董金香 1
( 1. 长春中医学院 中药系 ,吉林 长春　 130021; 2. 天津中医学院 中药系 ,天津　 300193)
　　双胆片是本院研制的口服治疗湿热酒毒内蕴所
致的酒精性肝炎的一种新药。方中猪胆汁膏为主要
药物 ,其有效成分为猪去氧胆酸。猪去氧胆酸测定方
法已有薄层扫描法 [1, 2 ]的报道。 本实验采用 HPLC
法测定双胆片中猪去氧胆酸的含量 ,为该制剂的质
量控制提供了准确、快捷的测定方法。
1　仪器与试剂
高效液相色谱仪 (日本岛津 ) , LC-10AD泵 ,示
差折光检测器 , DL-800色谱工作站 (大连化物所 ) ;
猪去氧胆酸对照品由中国药品生物制品检定所提
供 ,经高效液相色谱法归一化纯度为 100% ;猪胆汁
膏经长春中医学院中药系中药鉴定教研室姜大成教
授鉴定为猪科动物猪 Sus scrofa domestica Brisson
的胆汁的干燥品。 甲醇为优级纯 ,其他均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: YWG LC18 ( 4. 6 mm× 250
mm , 10μm) ,流动相: 甲醇-水 ( 80∶ 20) ,流速: 1. 0
mL /min,柱温: 16℃。
2. 2　标准曲线的制备:精密称取猪去氧胆酸对照品
16. 00 mg ,置容量瓶中 ,加甲醇定容 ,摇匀 ,配制成
5. 00 mg /mL的对照品溶液。 精密吸取上述对照品
溶液 2, 5, 10, 15, 30μL,分别注入液相色谱仪 ,依法
测定 ,以测得峰面积值 ( Y )为纵坐标 ,猪去氧胆酸对
照品的进样量 ( X )为横坐标作图 ,得回归方程为
Y= 10 533+ 2 886 388. 272X , r= 0. 999 6。 在 10～
100μg范围内线性关系良好。
2. 3　供试品溶液的制备:分别取双胆片适量 ,研细 ,
精密称取 4. 5 g ,置索氏提取器中 ,加乙醇 100 mL
·712· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2002年第 33卷第 8期
收稿日期: 2001-10-31