全 文 ：HPLC法测定密骨胶囊中淫羊藿苷含量△
上海市中医药研究院骨伤科研究所 ( 200032)　　史万忠
上海医药工业研究院　　　　　　　　　　　　朱　兰　 孔德云* *
上海中医药大学附属曙光医院　　　　　　　　徐德生* * 　石印玉* * *
摘　要　建立测定密骨胶囊中淫羊藿苷含量的方法。样品用甲醇超声提取 30 min,在 C18柱上以甲醇 -水 -醋酸 ( 45∶
50∶ 5)为流动相 ,在波长 270 nm处检测。 淫羊藿苷含量测定的线性范围为 0. 050 9～ 0. 814 4μg ,线性回归方程为
Y= 1 479. 437+ 455 051. 213 X ,r= 0. 999 9,平均回收率为 98. 95% ,R SD为 2. 44%。该法简便、准确、重现性好 ,可
作为密骨胶囊质量控制的方法。
关键词　 HPLC法　密骨胶囊　淫羊藿苷
Determination of Icariin in Migu Capsule by HPLC
　　 Institute o f Tr aumato log y and O rthopedy , Shanghai Academy o f TCM ( Shanghai 200032)　 Shi Wanzhong
　　 Shanghai Institute of Pha rmaceutical Industr y　 Zhu Lan and Kong Deyun
　　 Affiliated Shuguang Hospital, Shanghai Univ ersity o f TCM and Chinese Ma teria Medica　Xu Desheng and Shi Yinyu
Abstract　　 To develop a method fo r the determina tion of the contents of icariin in Migu Capsule, a
compound Chinese herbal prepa ra tion containing Epimedium koreanum Nakai fo r the t rea tment of
o steopo rosis, by RP-HPLC. The sample w as shaken in an ul t rasonic bath for 30 min. The contents w ere
determined by HPLC, wi th co lumn C18 as stationary phase, methanol-wa ter-acetic acid ( 45∶ 50∶ 5) as
mobile phase and UV detector a t 270 nm. The content o f ica riin had a good linearity in the range o f 0. 050
9～ 0. 811 44μg, Y= 1 479. 437+ 455 051. 213X , r= 0. 999 9. The average recovery is 98. 95% and RSD is
2. 44% (n= 5) . The method is rapid, reliable and simple, and can be used fo r the quali ty cont ro l o f Migu
Capsule.
Key words　　 HPLC　 Migu Capsule　 icariin
　　密骨胶囊为治疗原发性骨质疏松症的中药复方
制剂 ,由首乌、淫羊藿、骨碎补等 7味中药组成 ,具有
补肾益精、强筋壮骨的功效。淫羊藿有补肾作用 ,实
验研究表明具有抗骨质疏松的活性 [ 1, 2]。淫羊藿苷是
淫羊藿中的主要有效成分 ,故选作含量测定指标。本
文报道采用 HPLC法建立测定该胶囊中淫羊藿苷
含量的方法。
1　材料与仪器
1. 1　药品和试剂:密骨胶囊 (批号: 980921、 980018、
990118)由上海中医药大学附属曙光医院制剂室提
供。
淫羊藿经鉴定为小檗科植物朝鲜淫羊藿
Epimedium koreanum Nakai的干燥地上部分 ,由上
海市药材公司提供。
淫羊藿苷对照品由中国药品生物制品检定所提
供。
甲醇为色谱纯 ,水为超纯水 ,醋酸为分析纯。
1. 2　仪器: Waters高效液相色谱仪 (包括 510泵 ,
7725 i进样阀 , Waters 484紫外检测器 , CDMC-2A
数据处理机 ) ; SB2200超声波发生器 (中美合资上海
必能信超声有限公司 , 80 W )。
2　方法和结果
2. 1　色谱分析条件: 色谱柱: Nova-pak C18 ( 3. 9
mm× 150 mm, 4μm) , Nova-pak C18预柱 ;流动相为
甲醇-水 -醋酸 ( 45∶ 50∶ 5) ,使用前经减压抽滤脱
气 ;流速 0. 7 m L /min;检测波长 270 nm;纸速为 2
mm /min;保留时间约 15 min;理论塔板数按淫羊藿
苷计为 1 600;数据处理定量方法为外标峰面积测定
·341·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 5期
Address: Shi Wanzhong, Ins titute of Traumatology and Orthopedics, Sh angh ai Academy of Tradi tional Chin es e Medicine and Materia
Medica, Shanghai史万忠　男 ,助理研究员 , 1994年毕业于上海中医药大学 ,获学士学位。目前正在攻读硕士学位。主要从事骨质疏松症的基础研究及相关防治药物的研制开发。
* * 指导老师　　* * * 项目负责人△国家“九· 五”攻关资助项目 ( No. 96-906-09-05)
法。
2. 2　标准曲线制备: 精密称取淫羊藿苷标准品
10. 18 mg ,置 50 mL容量瓶中 ,加甲醇溶解至刻度 ,
摇匀 (每 1 m L含淫羊藿苷 0. 203 6 mg )。 精密吸取
1 mL,置 10 mL容量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀
(每 1 mL含淫羊藿苷 0. 020 36 mg )。分别精密吸取
0. 203 6 mg /mL的对照溶液 2. 0, 2. 5, 4. 0μL和
0. 020 36 mg /mL对照溶液 2. 5, 5. 0, 11μL,注入高
效液相色谱仪中 ,以淫羊藿苷的量为横坐标 ,峰面积
积分值为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,回归方程为: Y=
147 9. 437+ 455 051. 213 X , r= 0. 999 9,线性范围
为 0. 050 9～ 0. 814 4μg。
2. 3　样品液制备:精密称取密骨胶囊药粉 0. 15 g ,
置 25 mL容量瓶中 ,加甲醇近刻度 ,放入超声波发
生器中提取 30 min,取出待冷至室温 ,再加甲醇至
刻度 ,摇匀 ,滤取续滤液 ,即得样品液。
2. 4　精密度试验: 精密吸取对照品溶液 ,先后进样
5次 ,淫羊藿苷含量 RSD= 1. 79% (n= 5)。
2. 5　重复性试验:同一批号样品 5份 ,按样品测试
条件测定 ,淫羊藿苷含量的 RSD为 2. 02%。
2. 6　稳定性试验: 将同一样品液于 1, 2, 3 d测定 ,
结果表明淫羊藿苷的 RSD= 3. 86% (n= 3)。
2. 7　空白对照液制备与测定: 按处方比例和工艺 ,
制成不含淫羊藿的空白样品 ,按样品液的制备方法
制备 ,测定。 结果表明 ,处方中其他药材和辅料不干
扰淫羊藿苷的测定 ,结果见图 1。
A-空白　 B-淫羊藿苷　 C-样品　 a-淫羊藿苷峰
图 1　高效液相色谱图
2. 8　加样回收率测定:在已知含量的样品中分别加
入不同量的淫羊藿苷对照品 ,配制成加样样品液。将
加样样品液分别按上述色谱条件测定其含量 ,并计
算加样回收率为 98. 95% , RSD= 2. 44% (n= 5)。
2. 9　样品测定:分别精密吸取对照品溶液和样品溶
液 ,依上述色谱条件测定 3个批号样品 ,用外标峰面
积法计算密骨胶囊中淫羊藿苷的含量 ,结果见表 1。
表 1　样品测定数据
　批　号 淫羊藿苷含量 (mg /g) R SD (% )
980921(n= 4) 2. 43 2. 91
981118(n= 5) 2. 17 5. 26
990118(n= 5) 2. 04 4. 27
3　讨论
3. 1　流动相的选择: 目前关于淫羊藿苷的 HPLC
法测定报道较多 ,但密骨胶囊为中药复方制剂 ,成分
复杂且有些成分与淫羊藿苷性质极相似 ,因此限制
了文献方法的应用。我们在研究了不同比例甲醇、水
和醋酸对分离结果影响的基础上 ,选择了本文报道
的流动相。
淫羊藿苷是一种黄酮苷 ,因含有羟基而显酸
性 [3 ] ,在分离淫羊藿苷的流动相中加入少量醋酸 ,可
使淫羊藿苷的出峰时间延长 ,峰形更佳。这与文献报
道相符 [4 ]。 作者在本实验中使用加入 5%醋酸的流
动相 ,同时减少对淫羊藿苷有较强洗脱能力的甲醇
的用量 ,结果其出峰时间反而提前 ,见表 2。由此推
测醋酸对淫羊藿苷的保留时间具有浓度信赖性的双
向影响作用 ,即在低醋酸浓度时 ,淫羊藿苷的保留时
间随醋酸浓度的增加而延长 ;在高醋酸浓度时 ,淫羊
藿苷的保留时间反而缩短。该现象是否与其在流动
相中形成的酸碱度和其对淫羊藿苷洗脱强度的偶联
平衡有关 ,值得进一步研究。
表 2　不同比例的流动相对淫羊藿苷保留时间的影响
甲醇 -水 -醋酸 保留时间 ( min )
55∶ 45∶ 0 8. 00
55∶ 45∶ 0. 3 10. 19
50∶ 50∶ 0 25. 30
45∶ 50∶ 0 14. 36
3. 2　提取时间的选择:采用本文提取方法测定同一
样品 ,超声提取的时间分别为 30, 45, 60 min,结果
含量基本相同。 本文选用 30 min。
3. 3　本方法不仅重现性好、精度高 ,而且采用样品
直接超声提取 ,具有样品处理简单 ,操作方便的特
点 ,可以作为控制质量的方法。
参 考 文 献
1　李芳芳 ,等 .全国代谢性骨病学术研讨会论文集 . 1998, 11: 98
2　马中书 ,等 .全国代谢性骨病学术研讨会论文集 . 1998, 11: 131
3　梁生旺 ,等 . 中药制剂定量分析 . 北京: 中国中医药出版社 ,
1997: 199
4　叶丽卡 ,等 .药物分析杂志 , 1998( 18) 1: 15
( 1999-05-06收稿 )
·342· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　 2000年第 31卷第 5期