全 文 ：HPLC法测定 6种石杉科植物中石杉碱甲的含量
王　峻 ,吴　伟 ,潘胜利
(复旦大学药学院 ,上海　 200032)
摘　要:目的　测定 6种石杉科植物中石杉碱甲的含量。方法　用 2%酒石酸溶液提取总碱 , HPLC法测定 ,外标法
定量。结果　石杉碱甲在所测定的 5种石杉科植物蛇足石杉、皱边石杉、四川石杉、金丝条马尾杉、柳杉叶马尾杉中
均有较高分布 ,分别达到 0. 048 1% , 0. 057 9% , 0. 070 6% , 0. 034 5% , 0. 196 1% ,在闽浙马尾杉中含量较少 ,仅为
0. 006 1%。结论　方法简便 、准确 ,可用于石杉碱甲资源的寻找。
关键词: 石杉属 ;马尾杉属 ;石杉碱甲 ;高效液相色谱
中图分类号: R286. 02　　　文献标识码: B　　　文章编号: 0253 2670( 2003) 07 0607 02
Determination of huperzine A in six plants of Huperziaceae
WANG Jun, WU Wei, PAN Sheng-li
( Colleg e of Pharmacy , Fudan Univ ersity, Shanghai 200032, China)
Key words: Huperzia Bernh. ; Phlegmariurus Ho lub; huperzine A; HPLC
　　石杉碱甲 ( huperzine A)系从石杉科石杉属植
物蛇足石杉 Huperzia serrata ( Thumb. ) Trev.中
分离得到的生物碱 ,是一种强效的可逆性胆碱酯酶
抑制剂 ,主要用于治疗重症肌无力 [1 ] ,能改善老年性
记忆功能减退 ,可显著提高阿耳茨海默症患者的记
忆、认知和行为功能 ,无明显不良反应 ,是治疗阿耳
茨海默症的一个有前景的药物 [2 ]。 石杉碱甲在多种
石杉科植物中有分布 ,蛇足石杉中含量较高 ,目前石
杉碱甲制剂所需原料均是从蛇足石杉中提取而得。
随着蛇足石杉植物资源日益匮乏 ,在国际市场上石
杉碱甲的价格在攀升 ,寻找新的石杉碱甲植物资源 ,
加以开发和利用 ,具有重要意义。本实验采用 HPLC
法直接测定了包括蛇足石杉在内的 6种石杉科植物
中石杉碱甲的含量 ,发现石杉碱甲在这几种植物中
均有较高的分布。
1　仪器与材料
LC-10ATvp高效液相色谱仪 ( Shimadzu ) ,
SPD-10Avp紫外检测器 ( Shimadzu) , HS2000(通用
版 )色谱工作站 (杭州英谱科技发展有限公司 ) , Mil-
li-Q超纯水发生器 ( Millipo re) , M P-220型 pH计
( Met t ler To ledo )。
石杉碱甲 (复旦大学附属红旗制药厂提供 ,纯度
为 99. 8% );酒石酸、醋酸铵、冰醋酸及其他试剂均
为分析纯 (上海化学试剂公司 ) ;甲醇 ( HPLC级 ,
Merk) ;水为超纯水。
蛇足石杉 Huperz ia serrata ( Thunb. ) Trev.于
2001年 11月采自福建省福州市北峰森林公园。 皱
边石杉 H. crispata ( Ching ex H. S. Kung ) Ching
于 2001年 11月采自福建省长汀县。 四川石杉 H .
sutchueniana ( Herter) Ching于 2001年 11月采自
福建省连城县。金丝条马尾杉 Phlegmariurus far-
gesii ( Her ter) Ching于 2001年 9月采自广西壮族
自治区大瑶山瑶族自治县。 闽浙马尾杉 P .
minchegensis Ching于 2001年 11月采自福建省长
汀县。柳杉叶马尾杉 P. cryptomerianus ( Maxim. )
Ching comb. nov.于 2001年 11月采自福建省连城
县。 以上材料均经本院潘胜利教授鉴定。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱: Diamonsil C18不锈钢柱
( 250 mm× 4. 6 mm , 5μm) ( Dikma ) ;流动相:甲醇 -
0. 08 mol /L醋酸铵溶液 ( 32∶ 68,用冰醋酸调 pH
至 6. 0) ;流速: 1 mL /min;检测波长: 308 nm;柱温:
室温 ( 22℃ ) ;进样量: 20μL。
2. 2　对照品溶液的制备: 精密称取 12. 48 mg石杉
碱甲对照品 ,置 25 mL量瓶中加入流动相使溶解 ,
并稀释至刻度 ,摇匀 ,作为贮备液 (含石杉碱甲
0. 499 mg /mL)。
2. 3　样品溶液的制备:按生物碱提取的常规方法进
行。分别取 6种药材粉碎 ,过 20目筛 ,精密称取一定
量 ,加入 2%酒石酸 25 mL,超声提取 2 h,定性滤纸
·607·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 7期 2003年 7月
收稿日期: 2002-09-11作者简介:王　峻 ,男 , 1995年毕业于第二军医大学 ,现为复旦大学药学院生药学专业博士研究生。
过滤 ,续滤液用 0. 45μm微孔滤膜过滤 ,取滤液 0. 5
m L,用 0. 5 mL 2%酒石酸溶液稀释 , 4 000 r /min离
心 10 min,取上清液即得。
2. 4　线性关系考察: 精密吸取石杉碱甲贮备液
( 0. 499 mg /mL) 0. 1, 0. 2, 0. 4, 0. 8, 1. 0 mL置 10
m L量瓶中 ,用流动相稀释至刻度 ,摇匀 ,分别进样
20μL。 以峰面积与对应浓度绘制标准曲线 ,得回归
方程: A= 9 217. 82+ 38 848. 59C , r= 0. 999 7。结果
表明:石杉碱甲浓度在 5～ 50μg /mL与峰面积呈良
好线性关系。
2. 5　方法学考察
2. 5. 1　精密度试验: 取 0. 499μg /mL的石杉碱甲
对照品溶液 ,重复进样 5次 ,测得石杉碱甲峰面积的
RSD为 0. 92%。
2. 5. 2　稳定性试验:取同一份样品溶液 20μL,分
别于制备后 1, 2, 4, 6, 8, 10 h依法测定。样品在 10 h
内稳定 ,四川石杉、蛇足石杉、闽浙马尾杉、柳杉叶马
尾杉、皱边石杉、金丝条马尾杉样品溶液中石杉碱甲
峰面积的 RSD 分别为 0. 78% , 0. 94% , 0. 75% ,
0. 86% , 0. 82% , 0. 79% (n= 6)。
2. 5. 3　重现性试验:取闽浙马尾杉粉末按 2. 3项下
方法提取、测定 ,重复 5次 ,结果石杉碱甲峰面积的
RSD为 1. 28%。
2. 5. 4　回收率试验:石杉碱甲对照品溶液用 2%酒
石酸稀释至一定浓度 ,取 0. 5 mL加入 0. 5 mL的样
品提取液中 ,按 2. 3项下方法过滤 ,离心 ,取上清液
20μL进样 ,测定石杉碱甲的含量 ,计算加样回收
率。结果石杉碱甲在四川石杉、蛇足石杉、闽浙马尾
杉、柳杉叶马尾杉、皱边石杉、金丝条马尾杉中的加
样回收率分 别为 99. 88% , 100. 38% , 98. 55% ,
99. 03% , 98. 92% , 98. 81% , RSD 分别为 1. 76% ,
2. 39% , 1. 99% , 2. 07% , 2. 24% , 1. 90% (n= 9)。
2. 6　样品测定结果: 取样品溶液 20μL,注入液相
色谱仪测定 ,采用外标法定量 ,色谱图见图 1,石杉
碱甲在 6种植物中的含量见表 1。
3　讨论
　　 HPLC法测定 6种石杉科植物中石杉碱甲的含
量 ,可将石杉碱甲与其他成分很好地分离 ,峰型对
称 ,以石杉碱甲计柱效大于 5 000。
结果表明石杉碱甲在所测定的 6种植物中均有
分布 ,其中在柳杉叶马尾杉中含量最高 ,接近
0. 2% ,蛇足石杉中约为 0. 05% ,金丝条马尾杉中含
量略低于蛇足石杉 ,而闽浙马尾杉中石杉碱甲的含
量比柳杉叶马尾杉小数十倍。 储滨孟 [ 3 ]等采用高效
* -石杉碱甲
* -huperzine A
图 1　石杉碱甲对照品 ( A)和闽浙马尾杉
供试品 ( B)的 HPLC图谱
Fig. 1　HPLC chromatograms of huperzine A ( A)
and sample of P . minchegensis (B)
薄层扫描法测定了 14种石松植物中福定碱 ( fo r-
dine,与石杉碱甲 huper zine A为同一物 )的含量 ,其
中包括本实验所测定的四川石杉、闽浙马尾杉、蛇足
石杉。本实验测定结果与其有较大差别 ,比较结果见
表 1。
表 1　高效薄层扫描法与 HPLC法测定 6种石杉科
植物中石杉碱甲含量比较 (n= 9)
Table 1　 Comparison of huperzine A determined
by HP TLCS and HPLC respect ively
in six plants of Huperziaceae (n= 9)
名称 高效薄层扫描法 /% HPLC法 /%
闽浙马尾杉　 0. 030 4 0. 006 1
蛇足石杉　　 0. 006 6 0. 048 1
四川石杉　　 0. 005 6 0. 070 6
皱边石杉　　 0. 057 9
柳杉叶马尾杉 0. 196 1
金丝条马尾杉 0. 034 5
　　由 HPLC色谱图可以看出 ,在与石杉碱甲对照
品的峰位相同处 ,闽浙马尾杉有较小的峰 ,通过加样
法 ,改变色谱条件 ,峰未分离 ,表明为石杉碱甲的色
谱峰。
所采用的 HPLC法可以将石杉碱甲与其他成
分较好地分离 ,但在不同的色谱柱进行分析时 ,分离
度及石杉碱甲的保留时间可在一定范围内发生变
化。由于石杉碱甲为碱性物质 ,对流动相的 pH较为
敏感 ,可采用适当调节 pH值的方法调节石杉碱甲
与其他成分的分离度 ,使测定更为准确。
References:
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·608· 中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 34卷第 7期 2003年 7月