全 文 ：表 8　不同培养基激素浓度对根形成的影响
Table 8　 Ef fect of culture media in dif ferent hormone
concentration on root forming
培养基 接种数
/株 生根数 /株
株平均根
数 /条
生根率
/%
平均根长
/cm
( 7) 30 30 3. 17 98 3. 88
( 8) 30 30 2. 94 100 4. 86
( 9) 30 30 3. 68 100 3. 28
( 10) 30 30 3. 49 100 3. 86
( 11) 30 30 3. 43 100 4. 09
( 12) 30 30 2. 88 100 5. 06
( 13) 30 29 2. 23 97 4. 18
( 14) 30 30 2. 30 100 5. 25
( 15) 30 30 3. 55 100 2. 85
( 16) 30 26 2. 17 90 3. 06
一次杀菌剂和营养液 ,一个月后小苗则长出白色新
根 ,然后控制水分 ,每 10～ 15天左右喷水一次 ,增加
晒光时间 , 20～ 30 d后可直接大田定植 ,成活率基
本能达到 85% 。
3. 2. 4　脱毒苗快繁技术体系:在温度 25～ 28℃ ,光
照 2 000～ 3 000 lx培养条件下 ,丹参根段或茎尖诱
导不定芽培最佳培养基为 1 /3 M S+ BA 1. 0
mg /L+ IBA 0. 02 mg /L+ 蔗糖 30 g /L , pH 5. 8;丛
生芽分化最适宜培养基为 MS+ BA 1. 5 mg /L+
IBA 0. 2 mg /L+ 蔗糖 30 g /L, pH 5. 8;生根最适宜
培养基为 1 /2 M S+ IAA 1. 0 mg /L+ 蔗糖 20 g /L
pH 5. 8。
　　芽体在分化培养基上 25～ 30 d继代一次 ,芽增
殖系数基本保持在 8. 0以上 ,瓶苗接种到生根培养
基上一般 20 d即可全部生根 , 30 d开始练苗。 练苗
温度 20～ 30℃ ,湿度 90%以上 ,蛭石基质炼苗 30 d
左右 ,控制水分 ,使根老化。炼苗期间真菌感染 ,是造
成组培苗大量死亡的重要原因 ,必须做到基质经
0. 1%高锰酸钾彻底消毒 ,洗净苗根部的培养基 ,每
3～ 5天喷施多菌灵、甲基托布津等杀菌剂一次。 按
上述优化的分化、生根培养基配方和培养条件 ,可进
行丹参无毒苗工厂化规模繁育。
4　讨论
4. 1　丹参不同种质类型在耐热性方面有较大差异 ,
狭叶丹参> 大叶丹参> 皱叶丹参> 圆叶丹参 ,脱病
毒率与耐热性成反比 ,圆叶丹参在热处理后两周植
株基本死亡 ,未获得脱病毒植株 ,需进行变温或其他
方法脱除病毒研究。
4. 2　丹参不定芽诱导同时 ,对丹参根茎进行了愈伤
诱导 ,获得了大量愈伤组织 ,经愈伤调控和多次继
代 ,获得了泥状、颗粒状、菜花状、棕红色等多种不同
状态类型的丹参愈伤组织 ,部分类型愈伤容易再生
出小植株 ,这一特性有利于愈伤法脱病毒或培育新
品系等研究。
4. 3　脱毒丹参苗大田栽植后 ,前期生长缓慢 ,栽植
半年后观察 ,与根茎栽植苗比较脱毒苗根系均匀、分
枝增多、商品根多 ,需进一步研究其生长势、产量、药
用成分含量等。
References:
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s tud y of Rad ix Salxiae Mil it ior rhizae [ J ]. J Chin Med Mater
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源 ) , 2001 ( 2): 1.
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virus diseas es f rom Dansh en in Chin [ J] . Ch ina Tradi t Herb
Drugs (中草药 ) , 2003, 34( 12): 1136-1139.
HPLC法测定山 中球松素的含量
潘永峰 1 ,卢玉斌 2 ,张继敏 2 ,肖万宏 2 ,邬芙蓉 2
( 1. 河南省信阳市药品检验所 ,河南 信阳　 464000; 2. 河南羚锐制药股份有限公司 ,河南 新县　 465550)
　　樟科 ( Lauraceae)山胡椒属 ( Lindera Thunb. )
植物山 L . ref lexa Hemsl. 为灌木或小乔木 ,已收
载于《河南省中药材标准》 ( 1993年版第 2册 )。 性
温 ,行气止痛 ,止血消肿 ,主要用于胃疼。主要含黄酮
类化合物和生物碱等 ,其中含量较高的是二氢黄酮
类化合物球松素 ( pino st robin)。 因此本实验采用
HPLC法测定了其中球松素的含量。
1　仪器、试剂与药品
日本岛津 LC— 10A高效液相色谱仪 , KA—
500型医用超声清洗器 (昆山仪器有限公司 ) ,甲醇
·1059·中草药　 Chinese T raditional and Herbal Drug s　第 35卷第 9期 2004年 9月
收稿日期: 2003-12-02作者简介:潘永峰 ,男 ,河南省信阳市人 ,副主任中药师 ,主要从事药品检验工作。 Tel: ( 0376) 6562739
为色谱纯 ,其余试剂均为分析纯。
　　球松素对照品由中国医学科学院药物研究所提
供 (纯度为 99. 3% ) ,山 药材由河南羚锐制药股份
有限公司提供 ,经公司质量部按《河南省中药材标
准》 ( 1993年版第 2册 )检验 ,结果符合规定。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件: 色谱柱 YWG-C18 ( 150 mm× 4. 6
mm,中国科学院大连化学物理研究所 ) ;流动相:甲
醇 -水 ( 80∶ 20) ;体积流量: 0. 8 mL /min;紫外检测
波长: 290 nm;柱温: 25℃。
2. 2　对照品溶液的制备: 取球松素适量 ,用乙醇制
成 12. 0μg /mL,摇匀 ,即得。
2. 3　供试品溶液的制备:取山 药材粗粉 0. 5 g,精
密称定 ,置 250 mL烧瓶中 ,精密加入乙醇 50 mL,
称定质量 ,加热回流 1 h,取出 ,用乙醇补足减失的
质量 ,摇匀 ,滤过 ,弃去初滤液。 精密量取续滤液 5
m L,置 25 mL量瓶中 ,加流动相至刻度 ,摇匀 ,滤
过 ,弃去初滤液 ,取续滤液作为供试品溶液。
2. 4　标准曲线的制备:取球松素对照品适量 ,加流
动相分别制成 4. 0、 8. 0、 12. 0、 16. 0、 20. 0μg /mL的
对照品溶液 ,各取 20μL进样 ,分别测定峰面积。以
峰面积平均值为纵坐标 ,球松素质量浓度为横坐标
进 行 回 归 处 理 , 得 回 归 方 程 Y = - 810+
2 253 812 X , r= 0. 999 7,表明球松素在 0. 08～
0. 40μg与峰面积线性关系良好。
2. 5　精密度试验: 取 12. 0μg /mL球松素对照品溶
液重复进样 6次 ,测定峰面积值 ,计算其 RSD为
0. 83% 。
2. 6　重现性试验: 取同一批号样品 6份 ,按供试品
溶液制备方法制备 ,依法测定球松素含量 ,计算得其
RSD为 0. 95% 。
2. 7　稳定性试验: 取球松素对照品溶液 ,在 0、 1、 2、
3、 5、 8、 12 h分别测定峰面积 ,计算得其 RSD为
0. 75% 。
2. 8　回收率试验:采用加样回收法。 精密称取已知
含量的样品 ,精密加入 12. 0μg /m L球松素对照品
溶液 5. 0 mL,按供试品溶液的制备方法制备 ,依法
测 定 ,得平均回收率为 98. 3% , RSD为 1. 13%
(n= 5)。
2. 9　样品测定:精密吸取上述对照品、供试品溶液
各 20μL,分别注入液相色谱仪中 ,测定峰面积 ,按
外标法计算含量 ,结果见表 1,色谱图见图 1。
表 1　山 中球松素测定结果 ( n= 2)
Table 1　 Pinostrobin in L . ref lexae (n= 2)
产　地 球松素 /%
河南新县 0. 62
河南新县 0. 67
河南新县 0. 65
河区　 0. 62
河区　 0. 66
* 球松素
* pinost robin
图 1　球松素对照品 ( A)和山 (B)的 HPLC色谱
Fig. 1　 HPLC of pinostrobin (A) and L . ref lexae ( B)
3　讨论
3. 1　波长的选择: 取球松素对照品 4 mg ,于 100
mL量瓶中 ,加流动相适量 ,超声处理数分钟 ,使溶
解 ,加流动相至刻度 ,摇匀 ,以流动相作为空白 ,于
UV— 2401PC型紫外分光光度计中 400～ 200 nm
波长扫描 3次 ,结果均在 290 nm波长处有最大吸
收 ,故检测波长定在 290 nm波长。
3. 2　样品用乙醇加热回流提取和超声处理各 1 h
进行比较 ,结果加热回流提取明显高于超声处理法。
3. 3　山 中球松素的含量测定未见报道 ,河南羚锐
制药股份有限公司生产的以山 为主药的胃疼宁片
已用于临床多年 ,主治胃脘胀满、胃寒痛疼、嗳气吐
酸及消化性溃疡 ,疗效很好。 为了阐明其活性成分 ,
进一步提高药品疗效 ,增加科技含量 ,并为该植物资
源的开发利用和新药的研究提供信息 ,对于山 的
深入研究提供依据。
《新中医》征订启事
　　《新中医》 (月刊 )是由国家中医药管理局主管、广州中医药大学主办的一份国家级中医药学术刊物 ,从 2005年第 1期起 ,
《新中医》由原来每期 80页增加到每期 96页。 每期 7. 8元 ,全年 12期 ,共 93. 6元。国内邮发代号: 46-38,国外: M186,漏订者
可直接向编辑部发行科订购 ,地址:广州市机场路 12号大院广州中医药大学内 ,邮政编码: 510405。
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